Анализ МТТ является простым и воспроизводимым колориметрического анализа для оценки жизнеспособности клеток, основанный на уменьшении желтого МТТ и производство нерастворимые в воде фиолетовый формазана. Здесь, жизнеспособность MCF-7 клеток при лечении nanogenomedicine была оценена.
Abstract
Цитотоксичность футуристический nanogenomedicine (например, коротких интерферирующих РНК и антисмысловых), могут помешать его клинической разработки. Из них ген медицины и / или ее носитель может вызывать сотовой токсичности. Для оценки таких цитотоксичность, общая методология во многом зависит от использования 3 – (4, 5-диметил-2-тиазолил) -2, 5-дифенил-2H-тетразолия бромид (МТТ) анализа, который широко используется в качестве колориметрического подхода, основанного на активности митохондриальных ферментов дегидрогеназы в клетках. В нынешней расследования, MCF-7 клеток были привиты в 96-луночного планшета и при 50% слияния с ними обращались с различными nanopolyplexes и подвергается МТТ анализ после 24 часов. Водорастворимые желтого МТТ метаболизируется метаболически активных клеток в нерастворимые в воде фиолетовый формазана, который далее растворяется в буфере рН диметилсульфоксида и Sornson с 10,5. Полученный продукт может быть определена количественно спектрофотометрически использованием ридер при 570 нм.
Protocol
MCF-7 посева в 96-луночного планшета: MCF-7 клетки культивировали в 25 т-колбу в среде, содержащей Средний Дульбеко изменения Орла (DMEM), 10% ЭТС, 100 ед / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина при 37 ° C с 5% CO 2, 95% воздух и полное влажности. Как только достигли ~ 90% слияния, они были…
Discussion
Анализ МТТ считается универсальным методом и, соответственно, жизнеспособность клетки могут быть оценены на различных методов лечения. Производство результирующая формазана, как представляется, пропорционально уровню энергетического обмена в клетках. Таким образом, можно измерить ?…
Acknowledgements
Авторы хотели бы выразить признательность стволовых клеток и технологии Шахид Гази Тебриз компаний, соответственно, для обеспечения DMEM без фенола красного и стерильной воды для инъекций в качестве подарков.
Ahmadian, S., Barar, J., Saei, A. A., Fakhree, M. A. A., Omidi, Y. Cellular Toxicity of Nanogenomedicine in MCF-7 Cell Line: MTT assay. J. Vis. Exp. (26), e1191, doi:10.3791/1191 (2009).