MTT testi sarı MTT azaltılması ve suda çözünmeyen mor formazan üretimine dayalı hücre canlılığının değerlendirilmesi için kolay ve tekrarlanabilir kolorimetrik assay. Burada, nanogenomedicine tedavi üzerine MCF-7 hücre canlılığı değerlendirildi.
Abstract
Fütüristik nanogenomedicine (örneğin, kısa müdahale RNA ve antisens) Sitotoksisite klinik geliştirme engel olabilir. Bunlardan, gen bazlı ilaç ve / veya taşıyıcı hücresel toksisite ortaya çıkarmak. Gibi sitotoksisite değerlendirilmesi için ortak bir metodoloji, 3 kullanımı üzerine büyük ölçüde bağlıdır (4, 5-dimetil-2-thiazolyl) -2, yaygın olarak kullanılan 5-difenil-2H-tetrazolium bromide (MTT) tayini hücrelerinde mitokondriyal dehidrogenaz enzimlerin aktivitesi üzerine dayalı bir kolorimetrik yaklaşım. Bu araştırmada, MCF-7 hücreleri 96-plaka ekildi ve 50% confluency farklı nanopolyplexes ile tedavi edildi ve 24 saat sonra tahlil MTT için tabi. Suda çözünen sarı MTT dimethylsülfoksit ve Sornson s tampon pH 10,5 daha fazla çözünmüş suda çözünmeyen mor formazan, metabolik olarak aktif hücreler tarafından metabolize edilir. Ortaya çıkan ürün, 570 nm'de bir plaka okuyucu kullanarak spektrofotometri tarafından belirlenebilir.
Protocol
MCF-7 96-plaka tohumlama: MCF-7 hücreleri 37 ° Dulbecco'nun Modifiye Kartal Kullanıcı Orta (DMEM),% 10 FBS, 100 U / ml penisilin, ve 100 mg / ml streptomisin içeren orta 25 t-balon kültüre edildi ° C'de% 5 CO 2,% 95 ile hava ve tam nem. Bir kez ~% 90 confluency ulaştı, 0.05% tripsin / EDTA ile müstakil ve tripan mavi ve hemasitometre sayılır. Bu hücreler daha sonra 4 × 10 4 hücre / cm 2 'lik bir konsantrasyon yeniden bekletildi ve 8 …
Discussion
MTT testi, çok yönlü bir yöntem olarak kabul edilir ve buna göre çeşitli tedaviler üzerine hücrelerin canlılığı değerlendirilebilir. Sonuç formazan üretimi, hücrelerde enerji metabolizması düzeyi ile orantılı olarak görünür. Bu nedenle, metabolik olarak aktif hücrelerin hücre proliferasyonu yokluğunda bile ölçmek mümkündür. Üretilen formazan miktarı inkübasyon orta MTT miktarı ile doğru orantılıdır. Ederken, formazan maksimum miktarını elde etmek için gerekli olan MTT konsantra…
Acknowledgements
Yazarlar, hediye olarak enjeksiyon için fenol kırmızısı ve steril su olmadan DMEM sağlamak için sırasıyla Kök Hücre Teknolojisi ve Shahid Gazi Tebriz şirketlerinin kabul etmek istiyorum.
Ahmadian, S., Barar, J., Saei, A. A., Fakhree, M. A. A., Omidi, Y. Cellular Toxicity of Nanogenomedicine in MCF-7 Cell Line: MTT assay. J. Vis. Exp. (26), e1191, doi:10.3791/1191 (2009).