인간 췌장 아일릿 절연 : 2 부 : 인간 아일 레츠의 정화와 문화
Summary
높은 품질과 인간 아일 레츠의 적절한 수량을 달성하는 것은 성공적인 아일릿 이식을 위해 유명 전제 조건 중 하나입니다. 이 비디오에서는, 우리는 단계별로 설명을 인간의 췌장 아일릿 절연 (부분 II : 인간 아일 레츠의 정화 및 문화)에 대한 절차를 수정 자동화된 방법을 사용하여.
Abstract
1 형 당뇨병의 관리는 매년 100여 억 달러를 비용, 모두 개인과 사회에, 부담합니다. 포도당 모니터링 및 새로운 인슐린 공법의 광범위한 사용에도 불구하고, 많은 사람은 여전히 파괴적인 보조 합병증을 개발합니다. 췌장 아일릿 이식은 당뇨병 환자에서 정상적인 혈당 조절 근처에 복원할 수 있습니다<sup> 1</sup>, 집중적인 인슐린 요법과 관련된 심각한 혈당 에피소드의 위험이없이. 충분한 아일릿 질량을 제공하는 것은 성공적인 아일릿 이식을 위해 중요합니다. 그러나 기증자 특성, 기관 조달 및 보존은 절연 결과에 영향을<sup> 2</sup>. 시카고 일리노이 대학 (UIC)에서 우리는 개선 정화 기울기와 함께 성공적인 격리 프로토콜을 개발<sup> 3</sup>. 이 프로그램은 2004 년 1 월 시작했고 300 명 이상의 isolations 11 월 2008까지 수행했다. pancreata는 (UW, 위스콘신 또는 HTK 대학, 히스티딘 – 트립토판 Ketoglutarate) 차가운 보존 솔루션에 보내진<sup> 4-7</sup> 아일릿 절연을위한 UIC에서 셀 절연 연구실 있습니다. 췌장 아일 레츠는 원래 Ricordi에 기술된 방법의 수정된 버전입니다 UIC 방법을 사용하여 격리되었다<em> 외</em><sup> 8</sup>. 로서 일부 설명 : 소화 및 췌장 조직의 수집, 인간의 췌장은 줄어들 cannulated, perfused, 그리고 소화했다. 수집 UW 솔루션에 부화 최소 30 분 후, 조직은 정화를위한 (COBE 2991, Cobe, 레이크 우드, CO) 세포 분리에로드했습니다<sup> 3</sup>. 다음 정화, 아일릿 수율 (아일릿 등가물, IEQ로 표현), 조직 볼륨, 그리고 순도가 표준 방식에 따라 결정되었습니다<sup> 9</sup>. 절연 아일 레츠는 CMRL - 1066 1.5 % 인간의 알부민, 0.1 % 인슐린 트랜스페린 – 셀레늄 (ITS), * 시프 로플 록 사신, 1M HEPES 5 ML 1 ML과 보충 미디어 (Mediatech, 헤른던, VA), 그리고 14.5 ML에 교양되었습니다 37 T175 flasks에서 7.5 %의 나트륨 비카보네이트 ° C 야간 문화 아일 레츠가 이식이나 연구에 사용하기 전에.
Protocol
Discussion
인간 아일릿 절연의 기술에 상당한 진보에도 불구하고, 아일릿 수율이 높은 변수 및 예측 남아 있습니다. 소화 췌장 조직의 정화는 이식을위한 성공적인 효소 소화 후 충분한 이슬 미사를 복구하는 데있어 매우 중요합니다. 매우 순수한 인간 아일 레츠의 뛰어난 복구이 방법을 사용하여 입증 되었기 때문에 UIC 정화 방법을 권장합니다. 또한, 소화 조직의 최대 50 ML 따라서 격리에 사용되는 총 시간…
Acknowledgements
시카고 일리노이 대학에서 창립뿐만 아니라 지원 아일릿 세포 자원 센터 NIH 그랜트 (RFA – RR 05-003), 크리스토퍼 재단 Efroymson 재단과 Tellabs 재단으로.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Centrifuge | equipment | Beckman Coulter | 424803 | |
| Cobe 2991 Cell Processor | equipment | Gambro. BCT | 2556 | islet purification |
| MZ6 Inverted Microscopy TLBD4.1 | equipment | Leica Diagnostic Instrument Co | 4103 | |
| Cell Culture Dish with 2 mm Grid | equipment | Nunc Brand Products | 174926 | islet counting |
| Digital Sight DS L1 | equipment | Nikon | 217267 | |
| COBE bag | disposable equipment | O.R. Solution | 66707003 | |
| T175 culture flask | disposable equipment | Sarstedt | 83.1812.500 | |
| University of Wisconcin (UW) solution | reagent | DURAMED | 1000-46-06 | |
| Hank’s Buffered Salt Solution (HBSS) | reagent | Mediatech Inc | 99-597-CM | |
| Ficoll 1.100 | reagent | Bichrom AG | L6155 | |
| M199 media (wash solution) | reagent | Mediatech Inc | 99-784-CM | |
| Final wash/Culture Medium | reagent | Mediatech Inc | 99-785-CV | |
| Dithizone | reagent | Sigma | D5130 |
References
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