Summary
Este estudo descreve o desenvolvimento de um método modificado CsCl que facilmente purifica oocistos T. gondii a partir de fezes de gatos infectados que são adequados para biológica molecular e manipulação de cultura de tecidos
Abstract
Toxoplasma gondii é um protozoário patógeno intracelular obrigatório que normalmente infecta seres humanos. É um apicomplexan bem caracterizado associados a causar surtos de doenças alimentares e transmitidas pela água. O hospedeiro definitivo é a espécie de felino, onde ocorre a replicação sexual resultando no desenvolvimento do oocisto altamente infecciosa e ambientalmente resistente. A infecção ocorre através da ingestão de cistos de tecido de carne contaminada ou oocistos do solo ou água. Infecção é geralmente assintomática em indivíduos saudáveis, mas resulta em uma infecção latente ao longo da vida que pode reativar causando encefalite toxoplásmica e morte se o indivíduo torna-se imunocomprometidos. Carne contaminada com T. cistos gondii têm sido a principal fonte de infecção na Europa e nos Estados Unidos, mas as recentes mudanças na gestão animal e práticas de criação e manipulação de alimentos melhorados e procedimentos de processamento reduziram significativamente a prevalência de T. cistos gondii em carne 1, 2. No entanto, a seroprevalência em humanos permanece relativamente elevada, sugerindo que a exposição a partir de solo contaminado de oocistos ou água é provável. De fato, os surtos pela água da toxoplasmose foram relatados em todo o mundo apoiando a exposição teoria para a forma de oocistos ambiental representa um risco significativo de saúde 3-5. A pesquisa data, no entendimento da prevalência de T. gondii oocistos na água e meio ambiente são limitados devido à falta de ferramentas para detecção de oocistos no ambiente 5, 6. Isto é principalmente devido à falta de protocolos de purificação eficientes para a obtenção de um grande número de oocistos altamente purificada T gondii de gatos infectados para fins de pesquisa. Este estudo descreve o desenvolvimento de um método modificado CsCl que facilmente purifica T. gondii oocistos de fezes de gatos infectados que são adequados para biológica molecular e manipulação de cultura de tecidos 7.
Protocol
Acknowledgments
Gostaríamos de agradecer a Nichole Brinkman e Michael Ware para revisão técnica do manuscrito e Abu Sayed e Dr. Linda Ransick para apoio técnico e administrativo. Os Estados Unidos Agência de Proteção Ambiental através do seu Instituto de Pesquisa e Desenvolvimento parcialmente financiado e colaborou na pesquisa aqui descrita com o número do contrato EP-D-06-096 para Dynamac, Inc. e um número de convênio interinstitucional DW-12-92289801-0 para USDA. Ele foi submetido a revisão Agência e aprovado para publicação. Menção de nomes comerciais ou produtos comerciais não constitui endosso ou recomendação para o uso. MJS endereço atual: Dynamac, Inc. Cincinnati, OH.
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