Visualisera bultande hjärta i Drosophila</em
Summary
Teknik som krävs för att visualisera slående hjärta hos larver och vuxna<em> Drosophila</em> Presenteras. Varje liv etapp kräver en annan metod.
Abstract
Den<em> Drosophila</em> Hjärta har nyligen dykt upp som ett bra modellsystem för undersökning av genetiska, cellulära och molekylära mekanismerna bakom funktion i myogenic hjärtan. Ett viktigt steg i att undersöka hjärtats funktion i flugan är att hitta ett sätt att komma åt hjärtat på ett sätt som bevarar dess myogenic funktion och samtidigt tillåta att slå hjärtat kroppsdel som skall observeras och registreras. Två olika metoder för att observera och registrera bultande hjärta i både larv och vuxen<em> Drosophila</em> Beskrivs här. Vår semi-intakt förberedelse med hjälp av vuxna flugor kan klara visualisering av buken hjärtat utan inblandning från pigmenterade nagelband och överliggande fett organ. För att spela in larver hjärtat slår är det nödvändigt att immobilisera larven, vilket minimerar kroppsrörelser vägg och därigenom minska hjärtats rörelser som inte är förknippade med hjärtinfarkt sammandragningar. Vår metodik producera stabila vuxna och larver förberedelser hjärta som kan slå i timmar med en hastighet på 1-3 Hz.
Protocol
Discussion
Den Drosophila modellen har visat sig vara ett kraftfullt genetiska verktyg som har använts för att ta itu med en rad olika vetenskapliga frågor sträcker sig från embryologiska utveckling till inlärning och minne. Nyligen denna mångsidiga modell organism har använts för att undersöka genetik av hjärtfunktionen i gylfen. Ett antal försök att kvantifiera hjärtat fysiologi hos vuxna Drosophila har förlitat sig på observationer gjorda i intakt flyger genom buken nagelbanden. De flesta av dessa metoder har f?…
Acknowledgements
KO stöds av ett bidrag från American Heart Association.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Micro Dissecting Spring Scissors (curved) | Roboz | RS-5611 | Good for gross cuts (Step 3) | |
| Micro Dissecting Spring Scissors (straight) | Roboz | RS-5620 | ||
| Dumont #55 forceps | Fine Science Tools | 11295-51 | ||
| Dumont #5 forceps | Fine Science Tools | 11295-10 | ||
| Glass Capillaries, 100ul | VWR | 53432-921 | ||
| Glass Capillaries, fine | Science Products | GB100T8P | ||
| Pipette Puller | Sutter Equipment | P-97 | Both horizontal and vertical pipette pullers will work | |
| Plastic tubing | Tygon R-3603 | 1/16” inner diameter | for 100μl capillaries | |
| Plastic tubing | Tygon R-3603 | 1/32” inner diameter | for small capillaries | |
| Histoacryl® tissue adhesive | B.Braun, Melsungen |
References
- Ocorr, K., Reeves, N., Wessells, R. J., Fink, M., Chen, H. -. S. V., Akasaka, T., Yasuda, S., Metzger, J., Giles, W., Posakony, J. W., Bodmer, R. KCNQ potassium channel mutations cause cardiac arrhythmias in Drosophila that mimic the effects of aging. Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 3943-3948 (2007).
- Broadie, K. S., Bate, M. Development of the embryonic neuromuscular synapse of Drosophila melanogaster. J Neurosci. 13, 144-166 (1993).
