سريع سرعة عالية طريقة لرسم الخرائط Ribonucleoproteins (RNPs) على مرنا ما قبل الإنسان
Summary
نظرا لطبيعة عابرة للمرنا المسبق ، يمكن أن يكون من الصعب عزل ودراسة<em> في الجسم الحي</em>. هنا ، فإننا نقدم رواية<em> في المختبر</em> نهج لتحقيق RNA البروتين التفاعلات باستخدام مجموعة جزئية الاصطناعية التي البلاط عبر مناطق مختارة من مرنا المسبق.
Abstract
التسلسل الرناوات التي شاركت في immunoprecipitate (CO – IP) مع البروتينات الحمض النووي الريبي ملزمة زاد فهمنا الربط وذلك بإثبات أن يؤثر في كثير من الأحيان ملزمة الموقع وظيفة عامل الربط. ومع ذلك ، كما هو الحال مع أي استراتيجية أخذ العينات من فرصة يعتبر تحديد الحمض النووي الريبي منضمة إلى عامل الربط يتناسب وفرة الخلوية. وقد وضعنا في رواية نهج المختبر عن درس خصوصية ملزمة للخلاف عابرة قبل مرنا. هذا النهج يستخدم مجموعة المصممة خصيصا قليل النوكليوتيد أن البلاط عبر الإنترونات ، exons متماثلة ، تقاطعات لصق ، أو غيرها من قبل مرنا. يخضع تجمع إلى نوع من التحديد الجزيئي. هنا ، ونحن لشرح الطريقة التي تفصل في جزء قليل النوكليوتيد مقيدة وغير منضم والاستفادة من مجموعة واللون two استراتيجية لتسجيل كل عمليات تخصيب قليل النوكليوتيد في جزء محدد. بيانات مجموعة يولد خرائط عالية الدقة مع القدرة على تحديد تسلسل محدد من المحددات الهيكلية وبروتين نووي ريبوزي (RNP) ملزمة للمرنا المسبق. وهناك ميزة فريدة من نوعها لهذا الأسلوب هو قدرته على تجنب التحيز مرنا تجاه أخذ العينات المرتبطة بالملكية الفكرية والتقنيات الحالية سيليكس ، كما تم تصميمه خصيصا للسباحة وتوليفها من قبل مرنا التسلسل. مرونة تجمع قليل النوكليوتيد ميزة أخرى منذ المجرب الذي يختار لدراسة المناطق والبلاط عبر والخياطة تجمع لاحتياجاتهم الفردية. باستخدام هذه التقنية ، يمكن للمرء أن فحص آثار الأشكال ، أو طفرات على ملزمة على نطاق واسع أو استنساخ في مكتبة مراسل الربط الوظيفي وتحديد [أليغنوكليوتيد] التي هي المخصب في جزء المدرجة. هذه الرواية ذات الدقة العالية في المختبر نظام رسم الخرائط يوفر وسيلة فريدة لدراسة التفاعلات RNP مع الأنواع قبل مرنا عابرة ، الذي منخفضة وفرة يجعل من الصعب دراسة مع التقنيات الحالية في الجسم الحي.
Protocol
Discussion
عندما تفعل هذا الإجراء مهم لنتذكر أن إنشاء تجمع مرنة وقابلة للتعديل في الحمض النووي الريبي إما أو مستوى البروتين. ويمكن على مستوى الحمض النووي الريبي الأخذ orthologous المناطق ، والطفرات المرض ، وتعدد الأشكال ، أو الطفرات العشوائية في تسلسل قليل النوكليوتيد. ويمكن في مست?…
