Здесь мы показываем, как это сделать ретро-орбиту у взрослых рыбок данио.
Abstract
Медикаментозное лечение целых животных является важным инструментом в любой модели системы для фармакологической и химической генетических исследований. Внутривенно (IV) инъекции часто является наиболее эффективным и неинвазивной формой доставки агентов, представляющих интерес. В данио (<em> Danio rerio</em>), И. В. инъекции препаратов уже давно проблемой из-за малого диаметра сосуда. Это также оказалось значительным препятствием для инъекции клеток в процессе hematopoeitic трансплантации стволовых клеток. Исторически сложилось, что инъекции в кровоток были сделаны непосредственно через сердце. Однако, это внутри-сердечной процедура имеет очень высокий уровень смертности, как сердце часто проколотые во время инъекции оставив рыбы склонны к инфекциям, массивная кровопотеря или смертельные повреждения органа. Опираясь на наш опыт работы с мышью, мы разработали новую процедуру инъекции в данио, в котором месте инъекции находится позади глаз и в ретро-орбитальной венозного синуса. Это ретро-орбитальной (RO) инъекции метод был успешно применен в обоих инъекции препаратов у взрослых рыб, а также трансплантация клеток костного мозга целом почки. RO инъекции имеет гораздо более низкий уровень смертности по сравнению с традиционными внутри-сердечных инъекций. Рыбы, которые вводят ретро-орбитально, как правило, меньше кровоточить после инъекции и находятся на гораздо более низкий риск повреждения основной орган, как сердце. Кроме того, если будут выполнены должным образом, вводили клетки и / или наркотиков, быстро попадают в кровоток позволяет соединений оказывать свое влияние на всю рыбу и клетки почек легко домой к своим нишу. Таким образом, эта новая техника инъекций снижает смертность позволяя при этом эффективную доставку материала в крови взрослых рыб. Здесь мы иллюстрируют этот метод, ретроорбитального инъекции Tg (<em> Глобина</em>: GFP) клеток во взрослых<em> Каспер</em> Рыбы, а также введение красного красителя флуоресцентные (декстран, Texas Red<em></em>) Во взрослых<em> Каспер</em> Рыбы. Затем мы себе успешных инъекций целыми микроскопии флуоресценции животного.
Protocol
Часть 1. Подготовка материала инъекции Tg (глобина: GFP) клеток: Bleed взрослых рыб доноров использованием 10ul кончиком пипетки покрытие гепарином (1unit/ul), чтобы проколоть рыбу за жабры. Аспирируйте красных кровяных клеток и обойтись в ячейке буфера (PBS 0.9x + 5% ЭТС + 1% Pen / Strep). </…
Discussion
Ретро-орбиту у взрослых данио дает наибольшую эффективность доставки вводят материал в кровоток с самой низкой частоты смертности. Из-за характера инъекции месте прокола кажется заживают быстро, уменьшая возникновения инфекции и объем кровопотери. Сайте, могут быть даже неоднократно…
Acknowledgements
Эта работа проводится при поддержке Медицинского института Говарда Хьюза и грант NIH для изучения эмбрионального кроветворения.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa