Burada yetişkin zebrafish retroorbital enjeksiyon nasıl yapılacağını göstermektedir.
Abstract
Bütün hayvanlar İlaç tedavisi, kimyasal, farmakolojik ve genetik çalışmalar için herhangi bir model sistem önemli bir araçtır. İntravenöz (IV) enjeksiyonu genellikle en etkili ve non-invaziv bir ilgi ajan teslim şeklidir. Zebra balığı (<em> Danio rerio</em>), IV ilaç enjeksiyonu küçük damar çapı nedeniyle uzun bir meydan okuma olmuştur. Bu aynı zamanda hematopoeitic kök hücre nakli sırasında hücrelerin enjeksiyon için önemli bir engel olduğu kanıtlanmıştır. Tarihsel olarak, kalp yoluyla doğrudan kana enjeksiyon yapıldı. Ancak kalp, enfeksiyon, büyük bir kan kaybı veya ölümcül organ hasarı eğilimli balık bırakarak enjeksiyon sırasında sık sık delinirse, bu intra-kardiyak prosedür çok yüksek bir ölüm oranına sahiptir. Fare ile deneyim Çizim, gözün arkasında ve retro-orbital venöz sinüs içine enjeksiyon yerinde olduğu zebrafish yeni bir enjeksiyon prosedürü geliştirdik. Bu retro-orbital (RO) enjeksiyon tekniği yetişkin balık ilaç enjeksiyonu yanı sıra, tüm böbrek iliği hücreleri nakli başarıyla çalışan olmuştur. RO enjeksiyon geleneksel kalp içi enjeksiyon çok daha düşük bir ölüm oranı vardır. Retro-orbitally enjekte Balık az aşağıdaki enjeksiyon kanamaya eğilimi ve kalp gibi önemli bir organ yaralanma riski çok daha düşük. Ayrıca, düzgün bir şekilde yapıldığında, enjekte edilen hücreler ve / veya ilaçlar, kan dolaşımına izin veren bileşikler kendi niş ev kolayca bütün balık ve böbrek hücreleri üzerindeki etkisi hızla girin. Böylece, yetişkin balık kana malzemenin verimli teslim izin verirken, bu yeni enjeksiyon tekniği mortalite en aza indirir. Burada Tg retroorbital enjeksiyonu ile bu tekniği örnek (<em> Globin</em>: Yetişkin içine GFP) hücreleri<em> Casper</em> Balık yanı sıra kırmızı floresan boya enjeksiyon (dekstran, Texas Red<em></em>) Yetişkin<em> Casper</em> Balık. Daha sonra tüm hayvan floresan mikroskopi başarılı enjeksiyonları görselleştirmek.
Protocol
Bölüm 1. Enjeksiyon malzemesinin hazırlanması Tg (globin: GFP) hücreleri: Heparin (1unit/ul) ponksiyon balıkların solungaç arkasında kaplı 10ul pipet kullanarak yetişkin donör balık yerleştirir. , Kırmızı kan hücreleri aspire ve hücre tampon dağıtmak (0.9X PBS +% 5 FBS +% 1 Kalem / Strep). Filtre hücresi 40uM örgü üzerinde süspansiyon ve hemasitometre kullanarak, daha önce LeBlanc ve ark açıklandığı gibi hücre konsantrasyonunu belirlemek….
Discussion
Yetişkin zebrafish retroorbital enjeksiyon, kan dolaşımına enjekte edilen malzeme teslimi en yüksek verimi en düşük ölüm insidansı verir. Çünkü enjeksiyon yerinde doğa, delinme, enfeksiyon ve kan kaybı miktarı oluşumunu azaltarak, çabuk iyileşmek için görünür. Bu site bile defalarca, örneğin, günlük ilaç enjeksiyonları için kısa bir süre içinde enjekte edilebilir.
Büyük miktarda uyuşturucu sadece dalmış ve ilgi ilaç içeren suya batırılmış balık y…
Acknowledgements
Bu çalışma, Howard Hughes Tıp Enstitüsü ve embriyonik hematopoez çalışmaları için bir hibe NIH tarafından desteklenmektedir.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa