ショウジョウバエの血球は胚の全体にわたって分散させる。このプロトコルは、蛍光標識した血球で胚を使用してこれらの移行をマウントし、イメージする方法を示します。
使用して多くの研究のアドレスの細胞遊走<em> in vitroで</em>の方法は、生理学的に関連する環境に対し、生物自体のことです。ここでは、取り付けのためのプロトコルを提示<em>キイロショウジョウバエ</em>胚と蛍光標識血球のその後のライブイメージング、この生物の胚マクロファージ。 GAL4 – UASシステムを使用する<sup> 1</sup>我々は胚全体に彼らの発達分散に従うことを血球に遺伝的に符号化された、蛍光標識マーカーの様々な発現を駆動する。開発の目的の段階で胚のコレクションに続いて、外側の絨毛膜が除去され、胚は、その後疎水性、ガス透過膜とライブイメージング用ガラスカバースリップ間のハロカーボンのオイルにマウントされます。このような速度と方向性として総渡り鳥のパラメータに加えて、蛍光F -アクチンの記者と微小管の使用と相まって、高解像度のイメージングは、これらの細胞骨格成分の動態に関するより詳細な情報を提供することができます。
この手順の最も重要な要素は明記された血球との健全な胚の選択であり、それらを傷つけることなく慎重にそれらをマウントする。一度胚は、脱水に耐性があると一度にマウントされている数時間のためにイメージングすることができるハロカーボンのオイルになります。私たちの手では40倍の目標と私たちのツァイスLSM510共焦点顕微鏡で3分ごとに画像のz -スタックを取っ胚やフォトダメー?…
このプロトコルは、ポールマーティンとアントニオサンジャシントの研究室とのコラボレーションの中でとの我々の仕事を通じて開発されています。我々は、フライラインを共有し続けるための素晴らしいサービスとショウジョウバエコミュニティのためのブルーミントンストックセンターに感謝します。 BSは現在BBSRCプロジェクトの助成金によって賄われています。 WWは、ウェルカムトラストのキャリア開発奨学金によって運営されている。