hemocytes ذبابة الفاكهة تفريق أكثر من مجمل الجنين النامية. هذا البروتوكول يوضح كيفية تحميل الصور وهذه الهجرات استخدام الاجنة مع hemocytes fluorescently المسمى.
Abstract
العديد من الخلايا باستخدام عنوان دراسات الهجرة<em> في المختبر</em> طرق ، في حين أن بيئة ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية هي الكائن الحي نفسه. هنا نقدم بروتوكول لمن تصاعد<em> ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em> الأجنة الحية والتصوير اللاحقة hemocytes fluorescently المسمى ، والضامة الجنينية من هذا الحي. باستخدام نظام Gal4 – UAS<sup> 1</sup> نحن حملة للتعبير عن مجموعة متنوعة من العلامات ، المرمزة وراثيا في الموسومة fluorescently hemocytes لمتابعة نموهم في جميع أنحاء تفريق الجنين. مجموعة التالية من الأجنة في مرحلة المرجوة من التنمية ، ويتم إزالة المشيماء والخارجي هي التي شنت ثم الأجنة في النفط الهالوكربون بين مسعور ، غشاء الغاز نفاذية وساترة زجاجية للتصوير حي. بالإضافة إلى معلمات الإجمالي المهاجرة مثل السرعة واتجاهها ، وارتفاع القرار التصوير مقرونا استخدام صحفيين الفلورسنت من طراز F – أكتين ميكروتثبول ويمكن أن توفر معلومات أكثر تفصيلا بشأن هيكل الخلية ديناميات هذه المكونات.
Protocol
إعداد الحصول على خطوط المناسبة ذبابة الفاكهة التي تحتوي على كرية دموية محددة Gal4 السائق (على سبيل المثال Gal4 SRP – 2) ومراسل المرمزة وراثيا الفلورسنت تحت السيطرة UAS (على سبيل المثال ، UAS GFP). الذباب متماث?…
Discussion
وأهم عناصر هذا الإجراء يتم اختيار الأجنة السليمة مع hemocytes المسمى بوضوح ، ويشن منها بعناية من دون تعرضها للتلف. ولا يمكن تصوير الأجنة مرة واحدة في مجال النفط والهالوكربون أنها مقاومة للجفاف وشنت مرة واحدة لعدة ساعات. في أيدينا يمكننا hemocytes صورة لمدة ثلاث ساعات ، مع الج?…
Acknowledgements
وقد تم تطوير هذا البروتوكول من خلال عملنا داخل وبالتعاون مع مختبرات بول مارتن وخاسينتو انطونيو. نشكر مركز ألبوم بلومينغتون لخدمة الممتازة والمجتمع ذبابة الفاكهة لمواصلة تبادل خطوط الطيران. وتمول حاليا من قبل BS منحة المشروع BBSRC. وتمول من قبل WW زمالة يلكوم ترست التطوير الوظيفي.
Evans, I. R., Zanet, J., Wood, W., Stramer, B. M. Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations. J. Vis. Exp. (36), e1696, doi:10.3791/1696 (2010).