Дрозофилы гемоциты расходиться по совокупности развивающегося эмбриона. Этот протокол демонстрирует, как монтировать и изображение этих миграций использованием эмбрионов с флуоресцентно меченных гемоциты.
Многие адреса исследования миграции клеток использованием<em> В пробирке</em> Методы, в то время как физиологически соответствующих среды является то, что самого организма. Здесь мы приводим протокол для монтажа<em> Дрозофилы</em> Эмбрионов и последующее жить изображений флуоресцентно меченных гемоциты, эмбриональные макрофагов этого организма. Использование Gal4-UAS системы<sup> 1</sup> Мы едем экспрессии различных генетически закодированы, флуоресцентно меткой маркеры в гемоциты следить за их развитием разгон всей эмбриона. После сбора эмбрионов в нужном этапе развития, внешней хориона удаляется и эмбрионов затем монтируется в галоидоуглеводородов нефти между гидрофобным, газ мембрану и стекло покровное для живого изображения. В дополнение к валовому миграционных параметров, таких как скорость и направление, более высокое разрешение изображения в сочетании с использованием флуоресцентных журналистам F-актина и микротрубочек может предоставить более подробную информацию о динамике этих цитоскелета компонентов.
Важнейшими элементами этой процедуры выбора здоровых эмбрионов с четкой маркировкой гемоциты и монтировать их тщательно, не повреждая их. Как только эмбрионы в галоидоуглеводородов нефти они устойчивы к обезвоживанию и как только установлен могут быть отображены на несколько часов. …
Этот протокол был разработан благодаря нашей работе внутри, так и в сотрудничестве с лабораториями Пол Мартин и Антонио Хасинто. Мы благодарим Центр Блумингтон фондовую его отличный сервис и сообщества дрозофилы для продолжения поделиться летать линий. БС в настоящее время финансируется СИББН грантового проекта. WW финансируется Карьера Wellcome стипендий фонда развития.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Cell strainer | BD Falcon | 352350 | 70μm pores | |
Halcarbon oil 700 | Sigma | H8898 | ||
Lumox/Petriperm dish | Sarstedt | 96077305 |