Imágenes en directo de Drosophila melanogaster Migraciones hemocitos embrionarias
Summary
Hemocitos Drosophila se dispersan sobre la totalidad del embrión en desarrollo. Este protocolo demuestra cómo montar y la imagen de estas migraciones el uso de embriones con hemocitos marcados con fluorescencia.
Abstract
Estudios de dirección de muchas células de migración que utilizan<em> In vitro</emMétodos>, mientras que el medio ambiente fisiológicamente relevante es que del propio organismo. Aquí se presenta un protocolo para el montaje de<em> Drosophila melanogaster</em> Embriones y la imagen posterior en vivo de hemocitos marcado con fluorescencia, los macrófagos embrionario de este organismo. Utilizando el sistema Gal4-UAS<sup> 1</sup> Que conducir la expresión de una variedad de organismos genéticamente codificados, los marcadores marcados con fluorescencia en los hemocitos de seguir su dispersión a través del desarrollo del embrión. Tras la recolección de los embriones en la etapa de desarrollo deseado, el corion externo se retira y los embriones se montan en el aceite de halocarbonos entre un hidrófobo, la membrana permeable al gas y un cubreobjetos para imágenes en vivo. Además de los parámetros brutos migratorias, como la velocidad y la direccionalidad, una mayor resolución de imagen junto con el uso de los reporteros fluorescentes de F-actina y los microtúbulos puede proporcionar información más detallada sobre la dinámica de los componentes del citoesqueleto.
Protocol
Discussion
Los elementos más importantes de este procedimiento son la selección de embriones sanos con hemocitos claramente etiquetados y montarlos con cuidado, sin dañarlos. Una vez que los embriones se encuentran en el aceite de halocarbonos son resistentes a la deshidratación y una vez montado se pueden obtener imágenes durante varias horas. En nuestras manos podemos hemocitos imagen durante tres horas, con la deshidratación insignificante del embrión o del obvio foto-daño, teniendo un z-stack de imágenes cada tres min…
Acknowledgements
Este protocolo ha sido desarrollado a través de nuestro trabajo dentro y en colaboración con los laboratorios de Pablo Martín y Jacinto Antonio. Damos las gracias al Centro de archivo Bloomington por su excelente servicio y la comunidad de Drosophila para seguir compartiendo las líneas de vuelo. BS está financiado por una subvención para el proyecto BBSRC. WW es financiado por una beca de Wellcome Trust de Desarrollo Profesional.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cell strainer | BD Falcon | 352350 | 70μm pores | |
| Halcarbon oil 700 | Sigma | H8898 | ||
| Lumox/Petriperm dish | Sarstedt | 96077305 |
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