Magnetische modulatie biosensing systeem wordt gebruikt om snel, gevoelig en eenvoudig te detecteren biologische assays, zoals DNA-moleculen en eiwitten.
Abstract
Een magnetische modulatie biosensing systeem (MMB) [1,2] snel en homogeen zijn ontdekt biologische doelwitten bij lage concentraties, zonder wassen of scheiding stap. Wanneer de IL-8 doelwit aanwezig was, een 'sandwich'-gebaseerde test bevestigd magnetische korrels met IL-8-capture antilichaam aan gekoppeld fluorescerende eiwit streptavidine via de IL-8 target en een gebiotinyleerde IL-8 antilichaam. De magnetische kralen zijn gemanoeuvreerd in de oscillerende beweging door het aanbrengen van een wisselend magnetisch veld gradiënt door middel van twee elektromagnetische polen. De fluorescerende eiwitten, die zijn bevestigd aan de magnetische korrels worden samengevat in de detectie gebied en hun beweging in en uit een orthogonale laserstraal produceert een periodieke fluorescent signaal dat gedemoduleerd synchrone detectie. De magnetische modulatie biosensing systeem werd vroeger gebruikt om de coderende sequenties van de niet-structurele Ibaraki virus eiwit 3 (NS3) complementair DNA (cDNA) [2] op te sporen. De technieken die in dit werk aangetoond voor externe manipulatie en condensatie van deeltjes kunnen worden gebruikt voor andere toepassingen, zoals de levering van magnetisch gekoppelde drugs<em> In-vivo</em> Of verbeteren van het contrast<em> In-vivo</em> Grafische toepassingen.
Protocol
IL-8 test: Het reactiemengsel onder meer de volgende vier onderdelen in 100 ul eindvolume van testbuffer in hun respectievelijke concentraties. 10 ul van magnetische kralen met capture-antilichaam op 100 kralen / ul eindconcentraties, 2 pi van gebiotinyleerd IL-8 antilichaam bij een nano-gram/μl uiteindelijke concentratie, een ui van streptavidine fluorescerend eiwit bij 20 nano-gram/μl uiteindelijke concentratie, en 1 ul van IL-8 doel op 0,48 pico-gram/μl. De componenten worden toegevoegd een voor een naa…
Discussion
Samengevat, we laten zien dat de MMB systeem kan worden gebruikt om de aanwezigheid van IL-8 doelwit te detecteren bij lage concentraties (0,5 pico-gram is de detectiegrens van de Bio-Plex Precision Pro cytokine assays [3,4]). Het vermogen van het systeem is niet beperkt tot IL-8 en kan gebruikt worden om andere eiwitten te detecteren. De voordelen van de MMB-systeem zijn de mogelijkheid om de doelgroep te detecteren snel en zonder enige scheiding of wasstap. Zo, het vergemakkelijkt de detectie proces en kan het systeem…
Acknowledgements
Dit werk werd mede ondersteund door het Ishaya Horowitz Fonds.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Bio-Plex Pro Human Cytokine IL-8 set
Bio-Rad
171-B5008M
Recombinant human IL-8 target
Thermo Scientific
R202625
Biotinylated monoclonal mouse anti human IL-8 antibody G265-8
Danielli, A., Porat, N., Ehrlich, M., Arie, A. Rapid Homogeneous Detection of Biological Assays Using Magnetic Modulation Biosensing System. J. Vis. Exp. (40), e1935, doi:10.3791/1935 (2010).