लाइव सेल इमेजिंग और भ्रूणीय उपकला कोशिकाओं के मात्रात्मक विश्लेषण में Xenopus laevis</em
Summary
Xenopus भ्रूण epithelia एक आदर्श मॉडल प्रणाली सेल polarity और उपकला morphogenesis के दौरान आकार बदलने के विकास के रूप में इस तरह के व्यवहार का अध्ययन कर रहे हैं. तय नमूनों की पारंपरिक ऊतक विज्ञान तेजी से रहते सेल confocal इमेजिंग द्वारा पूरित किया जा रहा है. यहाँ हम मेंढक ऊतकों को अलग करने और जीना उपकला कोशिकाओं और उनके cytoskeleton रहते सेल confocal माइक्रोस्कोपी का उपयोग कर कल्पना तरीकों का प्रदर्शन.
Abstract
भ्रूण उपकला कोशिकाओं जहां बहु सेलुलर ऊतकों में कोशिका की सतह क्षेत्र और सेल ऊंचाई में परिवर्तन के रूप में में उनके ज्यामिति में परिवर्तन से गुजरना morphogenesis अध्ययन के लिए एक आदर्श मॉडल के रूप में सेवा है, और जहां कोशिकाओं को पिंजरे का बँटवारा गुजरना और विस्थापित. इसके अलावा, उपकला कोशिकाओं को भी आसन्न ऊतकों में morphogenetic आंदोलनों को विनियमित कर सकते हैं<sup> 1</sup>. उपकला कोशिकाओं और ऊतकों के अध्ययन के लिए एक पारंपरिक विधि रासायनिक निर्धारण और histological तरीकों सेल आकारिकी या ब्याज की विशेष प्रोटीन का स्थानीयकरण का निर्धारण शामिल है. इन तरीकों के लिए उपयोगी हो सकता है और सेल आकार और ऊतक वास्तुकला के "स्नैपशॉट" प्रदान जारी रखने के लिए, तथापि, बहुत कैसे कोशिकाओं को विशिष्ट आकार के अधिग्रहण, कैसे विभिन्न प्रोटीन चाल या विशिष्ट पदों के लिए स्थानीय बनाना, और पथ कोशिकाओं ओर उनके अंतिम पालन के बारे में समझा जा रहता है विभेदित भाग्य. उच्च संकल्प जीना इमेजिंग पारंपरिक तरीकों पूरक और भी गतिशील सेलुलर गठन, रखरखाव, multicellular उपकला शीट के morphogenesis में शामिल प्रक्रियाओं में और अधिक प्रत्यक्ष जांच की अनुमति देता है. यहाँ हम जानवर टोपी ऊतकों से अलगाव से प्रयोगात्मक विधियों का प्रदर्शन<em> Xenopus laevis</em> उपकला कोशिकाओं और सरल माप दृष्टिकोण है कि एक साथ उपकला morphogenesis की आणविक और सेलुलर अध्ययन बढ़ाने कर सकते हैं confocal इमेजिंग भ्रूण.
Protocol
Discussion
हम नियमित रूप से हमारी प्रयोगशाला में छवि शिखर सेल प्रांतस्था और oscillating Xenopus भ्रूण में उपकला कोशिकाओं के कोशिका झिल्ली में गतिशील बदलते cytoskeleton के लिए इस्तेमाल किया प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम के स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान (R01-HD044750), राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन से कैरियर अनुदान, और अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन (अनुदान में सहायता की शुरुआत) से समर्थन द्वारा समर्थित किया गया. आण्विक जीव विज्ञान और synthesizing के mRNA में उसकी सहायता के लिए हरियाणा किम, एम. वॉन Dassow और जे झोउ (दैनिक जिम्मेदारियों के साथ प्रयोगशाला मदद के लिए), और लिन झांग: लेखक डेविडसन लैब के सदस्यों को धन्यवाद. हम सभी मेंढक (विशेष रूप से रे केलर और डौग DeSimone) प्रयोगशालाओं, जो इस प्रोटोकॉल के कुछ भाग के लिए योगदान दिया है, विकास और वर्षों से विभिन्न तरीकों के परीक्षण के द्वारा, से प्रयोगात्मक प्रयासों को स्वीकार करते हैं. हम अपने सदस्य GFP और moesin GFP plasmids क्रमशः की तरह उपहार के लिए रिचर्ड Harland और जॉन Wallingford धन्यवाद.
References
- Ninomiya, H., Winklbauer, R. Epithelial coating controls mesenchymal shape change through tissue-positioning effects and reduction of surface-minimizing tension. Nat Cell Biol. 10 (1), 61-61 (2008).
- Kay, B. K., Peng, H. B. . Xenopus laevis: Practical Uses in Cell and Molecular Biology. , (1991).
- Cross, M. K., Powers, M. Obtaining eggs from Xenopus laevis females. J Vis Exp. , (2008).
- Cohen, S., Au, S., Pante, N. Microinjection of Xenopus laevis oocytes. J Vis Exp. , (2009).
- Nieuwkoop, P. D., Faber, J. . Normal Tables of Xenopus laevis (Daudin). , (1967).
- Davidson, L. A., Ezin, A. M., Keller, R. Embryonic wound healing by apical contraction and ingression in Xenopus laevis. Cell Motil Cytoskeleton. 53 (3), 163-163 (2002).
- Joshi, S. D., Dassow, M. v. o. n., Davidson, L. A. Experimental control of excitable embryonic tissues: three stimuli induce rapid epithelial contraction. Exp Cell Res. 316 (1), 103-103 (2010).
