Imagerie des cellules vivantes et de l'analyse quantitative des cellules embryonnaires épithéliales Xenopus laevis</em
Summary
Xenopus embryonnaire épithéliums sont un système modèle idéal pour étudier les comportements cellulaires tels que le développement de polarité et changer de forme lors de la morphogenèse épithéliale. Histologie classique d'échantillons fixe est de plus en plus complétée par des cellules vivantes imagerie confocale. Ici nous démontrons méthodes pour isoler les tissus de grenouilles et de visualiser en direct les cellules épithéliales et de leur cytosquelette des cellules vivantes en utilisant la microscopie confocale.
Abstract
Embryonnaire des cellules épithéliales servir de modèle idéal pour étudier la morphogenèse où multi-cellulaires des tissus subissent des changements dans leur géométrie, comme des changements dans la surface cellulaire et la hauteur de cellule, et où les cellules subissent la mitose et la migration. Par ailleurs, les cellules épithéliales peuvent aussi réguler les mouvements morphogénétiques dans les tissus adjacents<sup> 1</sup>. Une méthode traditionnelle pour étudier les cellules épithéliales et tissus entraînent une fixation chimique et méthodes histologiques pour déterminer la morphologie cellulaire ou la localisation des protéines d'intérêt particulier. Ces approches continuer à être utile et fournir des «instantanés» de formes cellulaires et l'architecture tissulaire, cependant, beaucoup reste à comprendre comment les cellules acquièrent des formes spécifiques, comment les protéines se déplacer ou de localiser différents à des postes spécifiques, et ce que les cellules suivent des chemins vers leur destination finale le destin différenciées. Imagerie haute résolution en direct complète des méthodes traditionnelles et permet aussi une enquête plus directe dans les processus dynamiques cellulaires impliqués dans la formation, l'entretien et la morphogenèse des feuilles multicellulaires épithéliaux. Ici nous démontrons des méthodes expérimentales de l'isolement des tissus animaux de bouchon<em> Xenopus laevis</em> Embryons à l'imagerie confocale de cellules épithéliales et les approches de mesure simple qui, ensemble, peuvent augmenter les études moléculaires et cellulaires de la morphogenèse épithéliale.
Protocol
Discussion
Nous avons présenté les protocoles expérimentaux utilisés régulièrement dans notre laboratoire à l'image du cytosquelette qui change dynamiquement dans le cortex cellulaire apicale et oscillant membranes cellulaires des cellules épithéliales dans les embryons de Xénope. On ne devrait utiliser ces protocoles comme point de départ pour live-imagerie de formes de cellules épithéliales, l'optimisation de ce protocole est essentiel et certains paramètres changent selon le type d'un système…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par un National Institutes of Health (R01-HD044750), une subvention de carrière de la National Science Foundation, et le soutien de l'American Heart Association (Début Grant-in-Aid). Les auteurs remercient les membres Davidson Lab: HY Kim, M. von Dassow et J. Zhou (pour l'aide aux responsabilités quotidiennes d'un laboratoire), et Lin Zhang pour son aide dans la biologie moléculaire et de l'ARNm de synthèse. Nous reconnaissons les efforts expérimentaux de tous les laboratoires de grenouille (en particulier Ray Keller et Doug DeSimone) qui ont contribué à une certaine partie de ce protocole, en développant et testant des méthodes différentes au fil des ans. Nous remercions Richard Harland et John Wallingford pour leurs dons en nature des mem-gfp et moésine-GFP plasmides respectivement.
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