Live-камера и цифровой обработки изображений Количественный анализ эмбриональных эпителиальных клеток в Xenopus laevis</em
Summary
Xenopus эмбрионального эпителия являются идеальной системой модель для изучения ячейки поведения, таких как развитие полярности и изменением формы во время эпителиальных морфогенеза. Традиционные гистологии основных образцов все чаще дополняется жить-клеточной конфокальной микроскопии. Здесь мы показываем, методы, чтобы изолировать лягушки тканей и визуализировать жить эпителиальных клеток и их цитоскелета с использованием живых-клеточной конфокальной микроскопии.
Abstract
Эмбриональные клетки эпителия служить идеальной моделью для изучения морфогенеза, где многоклеточной ткани претерпевают изменения в их геометрии, например, изменения в клеточной поверхности и высоту ячейки, и где клетки подвергаются митоза и миграции. Кроме того, эпителиальные клетки могут также регулируют морфогенетические движения в прилегающих тканях<sup> 1</sup>. Традиционный метод исследования эпителиальных клеток и тканей включают фиксацию химических и гистологических методов для определения морфологии клеток или локализации частности белков, представляющих интерес. Эти подходы продолжают быть полезными и обеспечить "моментальные снимки" клеточных форм и тканей архитектуры, тем не менее, многое еще предстоит понять о том, как клетки приобретают конкретные формы, как различные белки перенести или локализовать конкретные позиции, и какие пути клетки следовать к своей окончательной дифференцированных судьбы. Высокое разрешение жить изображений дополняет традиционные методы, а также позволяет более прямой расследование динамических клеточных процессов, участвующих в формировании, технического обслуживания и морфогенез многоклеточных эпителиальных листов. Здесь мы показываем, экспериментальные методы изоляции тканей животных колпачок с<em> Xenopus laevis</em> Эмбрионов конфокальной микроскопии эпителиальных клеток и простые подходы к измерению, что вместе может увеличить молекулярных и клеточных исследований эпителиальных морфогенеза.
Protocol
Discussion
Мы представили экспериментальные протоколы регулярно используются в нашей лаборатории, чтобы изображение динамично меняющейся цитоскелета в апикальной коры клетки и осциллирующие клеточные мембраны эпителиальных клеток в эмбрионы Xenopus. Надо использовать эти протоколы в качес?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддержана Национальным институтом здоровья (R01-HD044750), КАРЬЕРА грант от Национального научного фонда, и поддержка со стороны Американской ассоциации сердца (начало Грант-в-помощь). Авторы выражают благодарность Дэвидсон Лаборатория Участники: HY Ким, М. фон Dassow и Дж. Чжоу (за помощь в повседневных заботах и лаборатории), и Лин Жанг за ее помощь в области молекулярной биологии и синтеза мРНК. Мы признаем, экспериментальных усилий со стороны всех лягушка лабораторий (особенно Ray Келлера и Дуг DeSimone в), которые внесли свой вклад в какую-то часть этого протокола, путем разработки и тестирования различных методов за последние годы. Мы благодарим Ричард Харланд и Джон Уоллингфорд за их добрые дары чле-GFP и GFP-moesin плазмид соответственно.
References
- Ninomiya, H., Winklbauer, R. Epithelial coating controls mesenchymal shape change through tissue-positioning effects and reduction of surface-minimizing tension. Nat Cell Biol. 10 (1), 61-61 (2008).
- Kay, B. K., Peng, H. B. . Xenopus laevis: Practical Uses in Cell and Molecular Biology. , (1991).
- Cross, M. K., Powers, M. Obtaining eggs from Xenopus laevis females. J Vis Exp. , (2008).
- Cohen, S., Au, S., Pante, N. Microinjection of Xenopus laevis oocytes. J Vis Exp. , (2009).
- Nieuwkoop, P. D., Faber, J. . Normal Tables of Xenopus laevis (Daudin). , (1967).
- Davidson, L. A., Ezin, A. M., Keller, R. Embryonic wound healing by apical contraction and ingression in Xenopus laevis. Cell Motil Cytoskeleton. 53 (3), 163-163 (2002).
- Joshi, S. D., Dassow, M. v. o. n., Davidson, L. A. Experimental control of excitable embryonic tissues: three stimuli induce rapid epithelial contraction. Exp Cell Res. 316 (1), 103-103 (2010).
