一,准备进行分馏本节介绍了聚- L -赖氨酸涂层显微镜的盖玻片和细胞附着之前分馏的准备。如果需要的细胞可以瞬时转染与蛋白表达载体之前或之后附件。 A.制备聚- L -赖氨酸涂布盖玻片准备一个1mg/ml的聚- L -赖氨酸的蒸馏水溶液。 清洁盖玻片大衣与聚- L -赖氨酸孵化摇椅平台上至少1小时的解决方案,在22 ° C。 用无菌蒸馏水冲洗涂?…
Discussion
共同的问题和建议:
在清洗过程中的全部或大部分细胞都将丢失。在洗涤步骤中的液体必须避免盖玻片的6孔板边缓慢加入。同样的液体,应仔细倾斜板中删除,并慢慢地移液多余的液体。使用聚- L -赖氨酸涂布盖玻片,可提高细胞粘附。
Sawasdichai, A., Chen, H., Abdul Hamid, N., Jayaraman, P., Gaston, K. In situ Subcellular Fractionation of Adherent and Non-adherent Mammalian Cells. J. Vis. Exp. (41), e1958, doi:10.3791/1958 (2010).