Summary
Denne protokollen fokuserer på alkalisk brennindusert hornhinne-neovaskularisering hos mus. Metoden genererer en reproduserbar og kontrollerbar hornhinnesykdomsmodell for å studere patologisk angiogenese og tilhørende molekylære mekanismer og for å teste nye farmakologiske midler for å forhindre hornhinde-neovaskularisering.
Abstract
Korneal neovaskularisering (CoNV), en patologisk form for angiogenese, involverer veksten av blod og lymfekar i den avaskulære hornhinnen fra limbus og påvirker gjennomsiktighet og syn negativt. Alkaliforbrenning er en av de vanligste formene for okulært traume som fører til CoNV. I denne protokollen induseres CoNV eksperimentelt ved bruk av natriumhydroksidoppløsning på en kontrollert måte for å sikre reproduserbarhet. Alkalibrenningsmodellen er nyttig for å forstå patologien til CoNV og kan utvides til å studere angiogenese generelt på grunn av tilgjengeligheten, gjennomsiktigheten og tilgjengeligheten til hornhinnen. I dette arbeidet ble CoNV analysert ved direkte undersøkelse under et dissekerende mikroskop og ved immunfarging av flatmonterte hornhinner ved bruk av anti-CD31 mAb. Lymfangiogenese ble påvist på flatmonterte hornhinner ved immunfarging med anti-LYVE-1 mAb. Hornhinneødem ble visualisert og kvantifisert ved hjelp av optisk koherenstomografi (OCT). Oppsummert vil denne modellen bidra til å fremme eksisterende neovaskulariseringsanalyser og oppdage nye behandlingsstrategier for patologisk okulær og ekstraokulær angiogenese.
Introduction
Hornhinnen er et avvaskulært vev som opprettholder sin gjennomsiktighet ved å etablere et angiogent privilegium 1,2. Skader på hornhinnen kan føre til betennelse og utvikling av blod og lymfeårer, samt fibrose3. Korneal neovaskularisering (CoNV) fører til synshemming og er den nest største årsaken til blindhet over hele verden4. CoNV påvirker rundt 1,4 millioner mennesker i USA per år5. CoNV kan induseres av ulike faktorer, inkludert kjemiske forbrenninger, infeksjoner, betennelse og hypoksi 3,6. Kjemiske forbrenninger er en av de vanligste okulære nødsituasjonene, og de står for ca 13,2% av okulære traumer og krever umiddelbar vurdering og behandling7. Kjemiske forbrenninger kan være alkali- eller syreforbrenninger, men alkaliforbrenninger forårsaker mer alvorlig skade, da alkali trenger dypere inn i vevet8.
Musemodeller av alkaliforbrenning er mye brukt til å studere CoNV og sårheling. Sammenlignet med hornhinnen lommeangiogenese modell 9,10, er alkaliforbrenningsmodeller relativt enkle å lage og kan også brukes til å studere hornhinnebetennelse, fibrose og epitelial spredning. Disse modellene er også nærmere knyttet til kliniske kjemiske forbrenninger enn hornhindesuturmodeller av angiogenese11. Med alkaliforbrenning utvikler den ellers avaskulære hornhinnen blodkar på grunn av betennelse og ubalanse i anti-angiogene og pro-angiogene faktorer 1,2. Ulempene med korneal alkaliforbrenningsmodeller er vanskelighetene med å kontrollere området og alvorlighetsgraden av alkaliforbrenningen, variasjonen i hornhinde-neovaskularisering og utilsiktet forbrenning av tilstøtende vev på grunn av overflødig alkaliløsning. Hensikten med denne studien er å beskrive en kontrollert hornhinnealkaliforbrenningsmodell hos mus ved bruk av filterpapir som er fordypet i natriumhydroksidoppløsning. Denne modellen kan brukes til å studere angiogene faktorer, anti-angiogene terapeutiske reagenser og andre faktorer og reagenser som kan modulere betennelse og fibrose.
Protocol
Alt dyrearbeid, inkludert eksperimentelle prosedyrer og eutanasi, ble godkjent av Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) ved Baylor College of Medicine med protokollnummer AN-8790.
1. Tilberedning av 1 N NaOH
- Tilsett 4 ml sterilt avionisert vann til et 15 ml sentrifugerør. Vei ut 400 mg natriumhydroksid (NaOH), og legg forsiktig til røret.
- Løs opp NaOH ved sakte omrøring av løsningen ved hjelp av en glassstang. Øk volumet til 10 ml ved å tilsette sterilt avionisert vann til røret, og bland igjen ved å forsiktig snu røret opp og ned. Lukk hetten tett og oppbevar oppløsningen ved romtemperatur.
- Forbered den friske oppløsningen hver måned fordi konsentrasjonen av NaOH-oppløsningen kan reduseres ved at løsningen absorberer karbondioksid i luften.
- Bland alltid NaOH-oppløsningen forsiktig før bruk.
FORSIKTIG: Klargjør oppløsningen inne i en kjemisk hette, og bruk egnet personlig verneutstyr (PPE).
2. Fremstilling av 4% paraformaldehyd (PFA) oppløsning
- Tilsett 30 ml 1x fosfatbufret saltvann (PBS) til et glassbeger. Vei ut 4 g paraformaldehyd (PFA), og legg det til begeret.
- Hold begeret på en kokeplate ved 60 °C under omrøring. Tilsett 1 N NaOH-oppløsningen dråpevis for å øke pH til oppløsningen er klar.
- Kontroller og juster pH til 7,4 ved bruk av 1 N saltsyre (HCl). Juster det endelige volumet til 50 ml med 1x PBS.
- Avkjøl og filtrer løsningen. Oppbevar oppløsningen ved 4 °C.
FORSIKTIG: Klargjør oppløsningen i en avtrekkshette mens du bruker egnet personlig verneutstyr.
3. Klargjøre ketamin/xylazincocktailen
- Forbered ketamin/xylazincocktailen ved å tilsette 0,8 ml ketamin (stamkonsentrasjon: 100 mg/ml) og 0,16 ml xylazin (lagerkonsentrasjon: 100 mg/ml) til 9,4 ml saltvann.
- Oppbevar cocktailen i sterile injeksjonsflasker ved romtemperatur (RT).
4. Alkaliforbrenning på mushornhinnen
- Injiser meloksikam (4-6 mg/kg kroppsvekt) subkutant 30 minutter før prosedyren for smertelindring. Bedøv musene (C57BL/6J, 6-8 ukers alder, hann) ved hjelp av en i.p. injeksjon av ketamin/xylazincocktailen (ketamin 80 mg/kg og xylazin 16 mg/kg kroppsvekt).
- Kontroller refleksresponsen (pedaluttak) ved å klemme tærne på musen, og bekreft fraværet av refleksen. Påfør en dråpe aktuell bedøvelse, 0,5% proparakain, på hornhinnen overflaten av ett øye, og en dråpe kunstige tårer på det andre øyet.
- Bruk en 2 mm biopsistans, stans ut Whatman-filterpapirplater.
- Tilsett 2 μL 1N NaOH i en ren petriskål. Sett 2 mm filterpapirplaten på 1 N NaOH-dråpen, og la den trekke i 15 s.
- Plukk opp filterpapiret med tang, og påfør filterpapiret på det proparakainbehandlede øyet i midten av hornhinnen i 30 sekunder.
MERK: Filterpapiret må bare berøre midten av hornhinnen, og det må utvises forsiktighet for å unngå bevegelse av filterpapiret når det er plassert, da flytting av filterpapiret kan forårsake forbrenning i tilstøtende vev. - Vask øyet ved å skylle med 20 ml steril saltoppløsning i en steril sprøyte.
MERK: Det må tas hensyn til at hornhinnen, sammen med konjunktivalsekken, vaskes grundig for å sikre at det ikke oppstår ytterligere skade på hornhinnen eller omgivende vev. Vasking av konjunktivalsekken vil ytterligere forhindre symblepharon. - Tørk overflødig saltvann forsiktig fra øynene og omgivelsene ved hjelp av engangs myke kluter. Etterpå holder musene i et gjenopprettingsbur på en varm varmepute til ambulerende.
MERK: Mus overvåkes daglig etter alkaliforbrenningen i 3 dager. Hvis symptomer på smerte eller stress observeres, administreres meloksikam (4-6 mg / kg kroppsvekt) subkutant.
5. Undersøkelse og vurdering av neovaskularisering og fortetning
- I bedøvede mus, undersøke øynene under et disseksjonsmikroskop på dag 10 etter brenningen, og få bilder ved hjelp av et kamera festet til disseksjonsomfanget for å score opasiteten og neovaskulariseringen.
MERK: Et vanlig disseksjonsomfang med et kamera festet er tilstrekkelig. - Mens du observerer hornhinnen gjennom disseksjonsmikroskopet, scorer du opasiteten etter brenningen basert på følgende skala12:
0 = Ingen opasitet; Klar hornhinne
1 = Mild opasitet; liten haziness i iris og elevområder; Iris og pupill lett synlig
2 = Moderat opasitet; Iris og pupill knapt synlig
3 = Alvorlig opasitet; iris eller pupill ikke synlig
4 = Ugjennomsiktig hornhinne; Iris og elev ikke synlig - Mens du observerer hornhinnen gjennom disseksjonsmikroskopet, scorer du CoNV basert på følgende skala12:
0 = Ingen neovaskularisering; Ingen nye fartøy fra Limbus
1 = Mild neovaskularisering; Nye fartøy med utspring i limbus
2 = Moderat neovaskularisering; Blodkar stammer fra limbus og vokser mot midten av hornhinnen
3 = Alvorlig neovaskularisering; blodkar som stammer fra limbus og når og / eller krysser midten av hornhinnen - Bruk en Student t-test for statistisk å sammenligne opasitet og neovaskularisering score mellom alkali brenne og friske øyegrupper.
- Avlive musene på dag 10 ved isofluran eksponering ved 5% til 1 min etter pustestopp, etterfulgt av cervikal dislokasjon, og samle hornhinnene for flatmontert avbildning.
6. Optisk koherenstomografi (OCT) avbildning
- Ta OCT-bilder av det fremre segmentet av øynene i bedøvede mus på dag 10 etter brenningen. Utfør OCT-bildeopptak som en volumskanning ved hjelp av IR + OCT-modus med et synsfelt på 30° og en IR-intensitet på 100 %.
- Kvantifiser tykkelsen på hornhinnene ved hjelp av ImageJ-programvare.
- For å måle tykkelsen, bruk linjevalgverktøyet i ImageJ-programvaren for å lage en rett linje mellom de fremre og bakre overflatene ved den sentrale hornhinnen.
- Klikk på Analyser > mål i programvareverktøyene for å overføre verdiene til datavinduet.
- Kopier verdiene til en regnearkfil, og sammenlign statistisk hornhinnenes tykkelse mellom alkaliforbrenning og sunne øyegrupper ved hjelp av en Student t-test.
MERK: Tykkelsen på hornhinnen er avstanden fra et punkt på den fremre hornhinnen, overflaten til nærmeste punkt på den bakre hornhinnen, overflaten ved hornhinnen.
7. Immunfarging for CoNV på flatmonterte hornhinner
- Avlive musene på dag 10 etter alkaliforbrenning, og enucleate øynene ved stump disseksjon.
- Trekk øyelokkene fra hverandre med tommelen og pekefingrene, og plasser tang under øyekulen. Lukk tangen, og trekk øyebollet forsiktig av fra bane.
- Plasser øyebollene i 1x PBS. For hvert øyeboll, fjern hornhinnen fra øyekulen ved først å lage et snitt med en 30 G nål under limbusområdet.
- Klipp rundt limbusområdet ved hjelp av hornhinnen mikrosaks, med snittet som utgangspunkt, og separer sakte hornhinnen og limbus fra kloden.
- Rengjør hornhinnene forsiktig med en fin pensel for å fjerne iris. Fest hornhinnene i 4% paraformaldehyd i 1 time.
- Vask hornhinnene tre ganger i 20 minutter hver i 1x PBS ved romtemperatur (RT).
- Inkuber i en blokkeringsbuffer (1x PBS supplert med 0,1 % Triton-X 100 og 5 % bovint serumalbumin [BSA]) i 1 time ved RT.
- Overfør hornhinnene til en antistoffoppløsning som inneholder primære antistoffer. Klargjør antistoffoppløsningen i 1x PBS supplert med 1 % BSA, 0,1 % Triton-X 100, Dylight550-konjugert anti-CD31 mAb (1:100) og Alexa Fluor488-konjugert anti-LYVE-1 mAb (1:100).
- Inkuber i 3 dager ved 4 °C. Vask hornhinnene i 1x PBS tre ganger i 20 minutter hver.
- Beis kjernene med Hoechst flekkløsning (1:1,000) i 5 minutter i mørket.
- Flat hornhinnene med radiale kutt, og monter dem på et forrenset glassglass ved hjelp av monteringsmedium og deksler. Forsegl dekslene med klar neglelakk, og tørk lysbildene over natten i mørket før analyse ved konfokalmikroskopi.
- Se for deg de flatmonterte hornhinnene ved hjelp av konfokalmikroskopi ved å sy sammen individuelle Z-stack-bilder; Bruk et 10x objektiv, 488 nm og 561 nm lasere, og en oppløsning på 512 piksler x 512 piksler per stykke på ikke-resonante Galvano skannere.
- Kvantifiser tettheten av CD31+ blod og LYVE-1+ lymfekar ved hjelp av ImageJ-programvare.
- For å bestemme vaskulær tetthet, konverter de konfokale bildene til et 8-biters bilde.
- Velg vaskulær tetthet fra pluginene.
- Velg interesseområdet på bildet, og klikk på OK. Målingene åpnes i et nytt datavindu.
- Kopier verdiene til en regnearkfil, og sammenlign statistisk vaskulær tetthet mellom alkaliforbrenning og friske øyegrupper ved hjelp av en Student t-test.
MERK: CD31, også kalt blodplateendotelcelleadhesjonsmolekyl-1 (PECAM-1), er et celleadhesjonsmolekyl involvert i angiogenese og uttrykkes sterkt i endotelceller i tidlige og modne blodkar13. LYVE-1 (lymfekar endotelial hyaluronan reseptor-1) er en celleoverflatemarkør på lymfatiske endotelceller og kan brukes som lymfangiogenesemarkør14.
Representative Results
Denne studien beskriver en metode for å indusere hornhindeangiogenese i museøyet ved alkaliforbrenning. Bildene tatt med disseksjonsmikroskopet (figur 1A,B) viste signifikant forhøyet neovaskulariserings- og opasitetsscore i hornhinnene i alkaliforbrenningsgruppen (P < 0,05; Figur 1C,D). Hornhinnene som ble samlet inn dag 10 ble videre immunfarget med henholdsvis anti-CD31 mAb for blodkar og anti-LYVE-1 mAb for lymfekar (figur 2A-I). Alkaliforbrenningsgruppen viste signifikant høyere tettheter av blod og lymfekar etter 10 dager (henholdsvis P < 0,001 og P < 0,05; Figur 2J,K). Tykkelsen på hornhinnen, som avbildet og kvantifisert ved bruk av OCT (figur 3A,B), ble observert å være signifikant høyere i gruppen med alkaliforbrenning (P < 0,01; Figur 3C).
Figur 1 Alkalibrannindusert hornhinneneovaskularisering og fortetning. (A,B) Korneal neovaskularisering spiret fra limbuskarene mot hornhinnen i (B) alkalibrent museøye (A), men ikke sunt øye 10 dager etter skaden. (C,D) Kvantifisering av (C) hornhinneneovaskularisering og (D) opasitet i panelene A og B (± SEM; t-test; *P < 0,05; n = 3 øyne, 1 øye/mus). De røde pilene representerer limbus, og den gule pilen indikerer spirende nye fartøy. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2 Hornhinneneovaskularisering og lymfangiogenese forårsaket av alkaliforbrenning. Immunhistokjemi viste (A,D,G) blod og (B,E,H) lymfekar ved bruk av henholdsvis anti-CD31 og anti-LYVE-1 mAbs. (AC) Den sunne musehornhinnen. (D-I) Den alkalibrente hornhinnen 10 dager etter skaden. (C,F,I) Overlagrede bilder av CD31- og LYVE-1-signaler. (VG Nett) Zoomede bilder for paneler D-F. Skalastenger = (A-F) 200 μm og (G-I) 500 μm. (J,K) Kvantifisering av blod og lymfekartetthet i panel A-F, som angitt (± SEM; t-test; *P < 0,05; ***P < 0,001; n = 3 øyne, 1 øye/mus). Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 3: Økning i hornhinnetykkelse forårsaket av alkaliforbrenning . (A) Et OCT-bilde av et sunt museøye. (B) Et OCT-bilde av musehornhinnen 10 dager etter alkaliforbrenning. (C) Kvantifisering av hornhinnens tykkelse i panel A og B, målt i midten av hornhinnen (± SEM; t-test; **P < 0,01; n = 3 øyne, 1 øye/mus). Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Discussion
Hornhinnen er et utmerket vev for å studere angiogenese og betennelse fordi den er tilgjengelig og avaskulær, noe som betyr at neovaskularisering enkelt kan oppdages og dokumenteres. Hornhinneforbrenning hos kaniner, rotter og mus har blitt brukt til å studere hornhinneangiogenese, betennelse og opasitet, sårdannelse, perforering av hornhinnen og fibrose15,16,17. Videre er musemodellen av hornhinneforbrenning verdifull for å teste ulike terapeutiske strategier for angiogenese og betennelse fordi mus har et immunsystem som er nært knyttet til det hos mennesker18. Tilgjengeligheten av teknikker for å genetisk manipulere musegenomet gjør også arten til et utmerket valg for denne typen studier19. Utfordringen i denne forskningen har vært å utvikle en metode for hornhinneforbrenning som gir konsistent, reproduserbar patofysiologi.
Alkalibrenningsmodellen er spesielt nyttig for farmakologisk screening av legemidler som modulerer angiogenese, betennelse og fibrose. De minimale kravene til reagenser og ressurser, enkelheten ved å utføre alkaliforbrenningen, og fordelene med protokollens korte varighet og direkte observasjon av resultatene, gjør alkaliforbrenning på musehornhinnen til et primært valg for farmakologisk legemiddelscreening. Noen forholdsregler bør imidlertid vurderes når denne prosedyren utføres for å sikre konsistens og reproduserbarhet. For det første må filterpapiret plasseres i midten av hornhinnen for å unngå å brenne andre områder av øyet, spesielt limbus, øyelokk og bindehinne; For det andre bør volumet og konsentrasjonen av NaOH være hensiktsmessig for å oppnå konsistente resultater fra alkaliforbrenningen på hornhinnen. Filteret må ikke være dryppende vått, men skal ha blitt dynket i NaOH-oppløsningen. Filterstørrelsen og filtertypen og normaliteten og volumet av løsningen som brukes i denne metoden er optimalisert for å unngå overløp av NaOH. Ved hjelp av en annen størrelse filterpapir eller et høyere eller lavere volum av NaOH ville føre til inkonsekvenser i neovaskularisering. For det tredje er det viktig å forhindre at NaOH-oppløsningen absorberer CO2 i romluften ved umiddelbart å stramme oppløsningens slangehette etter bruk og redusere forholdet mellom luft og oppløsning. Det må tas hensyn til bruk av friske alkaliske løsninger for å forhindre inkonsekvenser i neovaskulariseringen og for å unngå hornhinnenesår. Endelig er omfattende vask av all NaOH-løsningen fra øyet og bindehinnen med saltvann nødvendig for å forhindre ytterligere skade på hornhinnen og omkringliggende vev i øyet. Grundig vask av hornhinnen og tilstøtende vev vil også forhindre symblepharon.
Protokollen beskrevet her er en effektiv og pålitelig metode for å studere patofysiologien av hornhindeangiogenese. Denne protokollen kan videre brukes til å studere hornhinnebetennelse, fibrose og sårheling.
Disclosures
Forfatterne oppgir ingen interessekonflikter.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av SRB Charitable Corporation, National Institutes of Health (NIH) P30EY002520, og et ubegrenset institusjonelt tilskudd fra Research to Prevent Blindness (RPB) til Institutt for oftalmologi, Baylor College of Medicine. WL er støttet av The Knights Templar Eye Foundation Endowment in Ophthalmology.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.9% Sodium Chloride Injection | Hospira | KL-7302 | |
| 30 G Needle | McKesson | 16-N3005 | |
| A1R Confocal | Nikon Instruments | ||
| Anti-CD31 | Novus Biologicals | NB100-1642R | |
| Anti-LYVE-1 | Life technologies | 53-0443-82 | |
| ASM Module | Heidelberg Engineering | Anterior segment objective | |
| Biopsy Punch | McKesson | 16-1309 | |
| BSA | Thermoscientific | 9048-46-8 | |
| Coverslip | VWR International | 22X22-1-601640G | |
| Dissection Microscope | AmScope | SM-4TZ-30WY-10M3 | |
| Fluoromount-G | Electron Microscopy Sciences | 17984-25 | |
| Forceps | Fine Science Tools | 15000-02 | |
| Forceps | Fine Science Tools | 11049-10 | |
| Forceps | Fisherbrand | 12-000-157 | |
| Forceps | Roboz | RS-4905 | |
| Gonak Hypromellose | Akorn | 17478006412 | |
| GraphPad Prism 9 | GraphPad Sotware, Inc | ||
| Heating pad | K&H Pet Products | 100213018 | |
| Hoescht | Life Technologies | 62249 | |
| HRA + OCT Spectralis | Heidelberg Engineering | ||
| Insulin Syringe | Mckesson | 102-SN310C31516P | |
| Kimwipe | Kimberly Clark Professional | 34155 | |
| Micro Cover Glass | VWR | 48366-067 | |
| Microscissors | Roboz | RS-5110 | |
| Microscopic Slide | Fisherbrand | 12-550-15 | |
| NaOH | Sigma Aldrich | 55881-500G | |
| Neomycin and Polymyxin B Sulfates and Dexamethasone | Bausch & Lomb | 24208-0795-35 | |
| Normal Serum | Jackson Immuno | 008-000-121 | |
| Paraformaldehyde | Sigma Aldrich | 158127-500G | |
| PBS | Gibco | 20012-027 | |
| Proparacaine HCl | Bausch & Lomb | 24208073006 | |
| Saline | Henry Schein | 1531042 | |
| SMZ125 | Nikon Instruments | ||
| Syringe 10 mL | McKesson | 16-S10C | |
| Triton X-100 | Sigma Aldrich | TX1568-1 | |
| Whatmann Filter Paper | Cytiva | WHA1003323 |
References
- Ellenberg, D., et al. Novel aspects of corneal angiogenic and lymphangiogenic privilege. Progress in Retinal and Eye Research. 29 (3), 208-248 (2010).
- Azar, D. T. Corneal angiogenic privilege: Angiogenic and antiangiogenic factors in corneal avascularity, vasculogenesis, and wound healing (an American Ophthalmological Society thesis). Transactions of the American Ophthalmological Society. 104, 264-302 (2006).
- Rolfsen, M. L., et al. Corneal neovascularization: A review of the molecular biology and current therapies. Expert Review of Ophthalmology. 8 (2), 167-189 (2013).
- Skobe, M., Dana, R.
- Lee, P., Wang, C. C., Adamis, A. P. Ocular neovascularization: An epidemiologic review. Survey of Ophthalmology. 43 (3), 245-269 (1998).
- Su, W., et al. Efficacious, safe, and stable inhibition of corneal neovascularization by AAV-vectored anti-VEGF therapeutics. Molecular Therapy - Methods & Clinical Development. 22, 107-121 (2021).
- Lasagni Vitar, R. M., et al. Epidemiology of corneal neovascularization and its impact on visual acuity and sensitivity: A 14-year retrospective study. Frontiers in Medicine. 8, 733538 (2021).
- Said, D. G., Dua, H. S. Chemical burns acid or alkali, what's the difference. Eye. 34, 1299-1300 (2020).
- Muthukkaruppan, V. R., Auerbach, R.
- Kenyon, B. M., et al. A model of angiogenesis in the mouse cornea. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 37 (8), 1625-1632 (1996).
- Cursiefen, C., Maruyama, K., Jackson, D. G., Streilein, J. W., Kruse, F. E. Time course of angiogenesis and lymphangiogenesis after brief corneal inflammation. Cornea. 25 (4), 443-447 (2006).
- Yoeruek, E., et al. penetration and efficacy of topically applied bevacizumab: Evaluation of eyedrops in corneal neovascularization after chemical burn. Acta Ophthalmologica. 86 (3), 322-328 (2008).
- DeLisser, H. M., et al.
- Johnson, L. A., Prevo, R., Clasper, S., Jackson, D. G. Inflammation-induced uptake and degradation of the lymphatic endothelial hyaluronan receptor LYVE-1. The Journal of Biological Chemistry. 282 (46), 33671-33680 (2007).
- Choi, H., et al. Comprehensive modeling of corneal alkali injury in the rat eye. Current Eye Research. 42 (10), 1348-1357 (2017).
- Chung, J. H., Fagerholm, P., Lindström, B. The behaviour of corneal epithelium following a standardized alkali wound. Acta Ophthalmologica. 65 (5), 529-537 (1987).
- Chang, J. H., Gabison, E. E., Kato, T., Azar, D. T.
- Alves da Costa, T., Lang, J., Torres, R. M., Pelanda, R. The development of human immune system mice and their use to study tolerance and autoimmunity. Journal of Translational Autoimmunity. 2, 100021 (2019).
- vander Weyden, L., White, J. K., Adams, D. J., Logan, D. W. The mouse genetics toolkit: Revealing function and mechanism. Genome Biology. 12 (6), 224 (2011).
