Summary
O protocolo descreve um método para intervenção de Tuina em um modelo de coelho de osteoartrite de joelho.
Abstract
A osteoartrite do joelho (KOA) é caracterizada principalmente por alterações degenerativas na cartilagem da articulação do joelho e nos tecidos moles circundantes. A eficácia de Tuina no tratamento de OA foi confirmada, mas o mecanismo subjacente precisa ser investigado. Este estudo visa estabelecer um modelo cientificamente viável de coelhos KOA tratados com Tuina para revelar os mecanismos subjacentes. Para isso, coelhos da raça Nova Zelândia, machos de grau normal, com 18 meses de idade, com 6 meses de idade, foram divididos aleatoriamente em grupos sham, modelo e Tuina, com 6 coelhos em cada grupo. O modelo de OA foi estabelecido injetando-se solução de papaína a 4% na cavidade articular do joelho. O grupo Tuina foi intervencionado com Tuina combinado com o método de correção rotatória da articulação do joelho por 4 semanas. Apenas a preensão e fixação padrão foram realizadas nos grupos sham e modelo. Ao final de 1 semana de intervenção, observou-se a amplitude de movimento (ADM) articular do joelho e a coloração pela hematoxilina-eosina da cartilagem (HE). O estudo mostra que Tuina pode inibir a apoptose dos condrócitos, reparar o tecido cartilaginoso e restaurar a ADM articular do joelho. Em conclusão, este estudo demonstra a viabilidade científica do tratamento com Tuina para coelhos modelo de OA, destacando sua potencial aplicação no estudo de OA e condições semelhantes relacionadas à articulação do joelho.
Introduction
A osteoartrite do joelho (OA) é uma doença degenerativa da articulação do joelho, manifestada principalmente por dor, inchaço, deformação e restrição de movimento no joelho, com alta taxa de incapacidade e maior prevalência em mulheres, com 527,81 milhões de pacientes com osteoartrite em todo o mundo em 2019 e sua prevalência global representando 60,6% da prevalência global total de OA1. Clinicamente, o tratamento da OA é usualmente dividido em terapias não cirúrgicas e cirúrgicas. As terapias não cirúrgicas incluem fisioterapia, farmacoterapia e injeção de plasma rico em plaquetas 2,3. Tuina é um método de tratamento comum, seguro, confiável e eficaz na medicina chinesa. Este estudo utiliza Tuina combinado com o método de correção rotatória da articulação do joelho para o tratamento de OA de joelho. Técnicas de Tuina, como o amassamento rotatório e o método de prensagem, podem equilibrar o tecido muscular, reduzir a dor, ajustar os níveis de fatores inflamatórios, melhorar o metabolismo tecidual e inibir a degeneração da cartilagem articular 4,5. O método de correção rotatória da articulação do joelho pode ajustar o alinhamento dos ossos e articulações dos membros inferiores, melhorar o gap articular do joelho, restaurar a linha de força normal e equilibrar a biomecânica do membro inferior 6,7,8,9. O exercício resistido pode aumentar a massa e a força muscular e promover a renovação do tecido cartilaginoso10,11. Um estudo preliminar constatou que este protocolo de Tuina é significativamente mais eficaz do que as cápsulas orais de sulfato de glucosamina no tratamento da OA, com início de ação mais rápido e inibição significativa da degeneração dos condrócitos e reparo do tecido cartilaginoso lesado12. No tratamento da OA de joelho, comparado à terapia de Tuina, os anti-inflamatórios não hormonais apresentam efeitos adversos e eficácia insatisfatória a longo prazo, riscos e custos cirúrgicos relativamente altos e requerem certas indicações para o tratamento cirúrgico, com problemas pós-operatórios e complicações periprotéticas13,14,15. Quando comparado à terapia medicamentosa e à cirurgia, o tratamento com Tuina para OA de OA oferece várias vantagens, incluindo efeitos colaterais reduzidos, menor risco, maior segurança, custo-efetividade e eficácia mais duradoura. Além disso, pode efetivamente aliviar a dor articular do joelho, o inchaço, o estalo e a restrição de movimento 6,13,16,17.
No entanto, o mecanismo de Tuina para o tratamento de OA precisa ser esclarecido, o que limita a melhora e a perfeição do protocolo de tratamento para OA. Portanto, estudar o mecanismo de intervenção de Tuina em OA através de experimentos com animais é um método eficaz. Os coelhos, em comparação com os ratos, têm um temperamento dócil e articulações do joelho maiores. A estrutura anatômica e os índices bioquímicos da cartilagem são semelhantes aos dos seres humanos, sendo um tema adequado para o estudo do mecanismo de doença articular do joelho por Tuina18. O modelo de OA estabelecido pela injeção de papaína na cavidade articular do joelho de coelhos tem as vantagens de curto tempo de modelagem, trauma reduzido, alta taxa de sucesso, alta taxa de sobrevida e mecanismo patológico semelhante ao OA19. Este estudo tem como objetivo estabelecer um protocolo experimental animal cientificamente viável para a intervenção de Tuina em OA e investigar o mecanismo de Tuina.
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Protocol
O estudo foi aprovado pelo comitê de ética do Hospital Afiliado da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Shandong (número de aprovação: 2020-29).
1. Animais de experimentação
- Criar coelhos da Nova Zelândia machos de grau normal de 18 e 6 meses de idade (2,75 ± 0,25 kg) em gaiolas simples padrão (ciclo claro/escuro de 12 h, temperatura 20-24 °C, umidade do ar 40%-60%).
2. Método de agrupamento
- Selecione 6 dos 18 coelhos da Nova Zelândia como grupo simulado usando o método de números aleatórios e atribua os 12 coelhos restantes ao grupo de modelagem.
- Após a modelagem bem-sucedida, dividimos os coelhos do grupo modelagem em modelos e Tuina de acordo com o método dos números aleatórios, com 6 coelhos em cada grupo.
- Realizar a intervenção Tuina no grupo Tuina. Realize a mesma preensão e fixação no grupo sham e modelo sem Tuina. Operar em dias alternados por 4 semanas (Figura 1).
3. Estabelecimento do modelo KOA
- Realizar alimentação adaptativa para coelhos na condição padrão na semana 1. Acesso ad libitum à água e aos alimentos. Coloque os coelhos do lado direito nas caixas de fixação dos coelhos para acalmá-los por 15 minutos por dia. Fixe suas cabeças nas placas de fixação da cabeça. Fixe as placas e parafusos de fixação para que os coelhos não possam se mover. Usar luvas de proteção ao agarrar e fixar os coelhos (Figura 1).
- Nos dias 1, 4 e 7 da semana 2, colocar todos os 18 coelhos do lado direito nas caixas de fixação dos coelhos (Figura 1). Execute as operações abaixo mencionadas.
- Injetar pentobarbital sódico a 3% (1 ml/kg) na veia marginal da orelha do coelho. Faça a barba da articulação do joelho esquerdo do coelho com um barbeador de animais, resultando em nenhum pelo na pele exposta.
- Desinfetar a articulação do joelho esquerdo do coelho de dentro para fora com iodóforo médico e álcool a 75% (Figura 2A).
- Flexionar a articulação do joelho esquerdo do coelho a 60°. Insira uma agulha (22G, 0,7 mm x 30 mm) da Waixiyan. Injetar solução de papaína a 4% (0,1 mL/kg, 0,275 mL em média para um animal de 2,5 kg) na cavidade articular do joelho do grupo modelador. Injetar uma quantidade igual de solução de cloreto de sódio a 0,9% no grupo simulado. Essa dose de injeção é bem tolerada pelo animal, sem causar evidência de dor ou angústia (Figura 2B).
NOTA: Waixiyan (EX-LE5) está localizado no recesso lateral do ligamento patelar e Neixiyan (EX-LE4) está localizado no recesso medial do ligamento patelar20,21,22. - Pressione o orifício por 2 min para evitar o derramamento da solução.
- Coloque as mãos acima e abaixo da articulação do joelho esquerdo do coelho. Flexionar suave e passivamente a articulação do joelho do coelho e estender 10 vezes dentro da amplitude de movimento (ADM) fisiológica para infiltrar-se uniformemente na cavidade articular do joelho15. Observe o coelho a cada 8 h durante a modelagem. Administrar buprenorfina SR (0,18 mg/kg) quando os coelhos apresentarem sinais de ocultação, tremor de membros, respiração superficial e rápida, ou mesmo morder e coçar.
- Na 7ª semana, observar o joelho esquerdo do coelho em posição de flexão edemaciado, com aumento do tônus muscular ao redor do joelho com nódulos e estrias, aumento da resposta dolorosa local à irritação, diminuição da ADM do joelho, marcha coxa e desvio do centro de gravidade para o lado saudável. Isso determina o sucesso do modelo de OA (Figura 1, Figura 2C)23,24.
4. Manipulação de Tuina
- Realizar treinamento utilizando o instrumento de determinação de parâmetros da técnica de Tuina antes da manipulação de Tuina. Treine por 1 h por dia durante 1 mês pelo mesmo profissional.
- Realizar o método de amassamento e prensagem rotatória com o polegar sobre a plataforma de simulação de manipulação de Tuina com força de 5 N e frequência de 60 vezes/min (Figura 3A,C).
- Analise a força em três direções dos eixos X, Y e Z pelo software de processamento de parâmetros de manipulação Tuina e verifique a magnitude, frequência e tempo de ação da força exibidos na tela (Figura 3B, D).
- Avaliar os parâmetros mecânicos da manipulação de Tuina e padronizar a manipulação de Tuina utilizando o software durante o treinamento. Manter o método de amassamento e prensagem rotatório padronizado com o polegar com uma força de 5 N, uma frequência de 60 vezes/min e um tempo de operação contínua de 10 min. Veja a forma de onda quantitativa padronizada da manipulação na Figura 3B,D 25,26,27.
- Coloque o coelho do lado direito na caixa de fixação do coelho. Acaricie suavemente o coelho por 10s para acalmar e relaxar o coelho21. Em seguida, realize a intervenção Tuina.
- Realizar o amassamento rotatório com o polegar sobre a rigidez dos músculos peri-joelho esquerdo do coelho, nós tendinosos e patela, com manipulação para cima e para baixo em ida e volta com uma força de 5 N e uma frequência de 60 vezes/min por 5 min.
- Use a extremidade do polegar para pressionar Yanglingquan (GB 34), Yinlingquan (SP 9), Waixiyan (EX-LE5), Neixiyan (EX-LE4), Heding (EX-LE2), Xuehai (SP 10), Liangqiu (ST 34) e Weizhong (BL 40)20,21,22, com uma força de 5 N e uma frequência de 60 vezes/min, e opere em cada ponto por 30 s.
- Realizar o método de correção rotatória na articulação do joelho do coelho e realizar este 3x separadamente para cada animal do grupo.
- Fixe o fêmur com uma mão. Coloque a outra mão atrás da articulação do joelho primeiro, depois fixe os côndilos tibiais lateral e medial com os dedos polegar e anular, respectivamente. Fixar a fossa poplítea com os dedos indicador e médio. Aplique tração e força de torção.
- Fixe o fêmur com uma mão. Fixe as bordas medial e lateral da patela com os dedos polegar e mínimo da outra mão. Fixe a base patelar com os dedos indicador, médio e anelar. Aplique força de torção.
- Mantenha a direção da força de tração paralela ao longo eixo da tíbia, e a direção da força de torção em linha com a direção do Xiyan inferior. Use os dedos para manter a pele no lugar para evitar o atrito entre a pele e os dedos.
5. Mensuração da ADM articular do joelho
OBS: Antes da medição, acalme o coelho. O estatístico de medição e o operador são diferentes um do outro.
- Medir a mobilidade da articulação do joelho esquerdo dos coelhos de cada grupo no início e no final de cada semana.
- Posicione o coelho do lado direito na caixa de fixação do coelho e fixe o fêmur esquerdo com uma mão.
- Alinhe o centro do círculo do artroscópio médico com o centro lateral da articulação do joelho esquerdo do coelho. Estenda o braço de fixação de forma que ele fique paralelo à extensão da linha que liga o centro do círculo ao trocânter maior. Estenda o braço móvel de forma que fique paralelo ao eixo longitudinal da tíbia.
- Coloque a outra mão no eixo longitudinal da tíbia, a aproximadamente 9 cm da articulação do joelho. Aplicar manualmente aproximadamente 750-850 g de torque a uma velocidade angular de 3°/s28.
- Execute isso até que a articulação do joelho do coelho não esteja mais se movendo. Registre o número de graus que o goniômetro exibe quando a articulação para de se mover; esta é a ADM da articulação do joelho. Durante a leitura, verifique se a linha de visão está perpendicular à superfície da régua.
- Meça a ADM para cada joelho 3x e tome o valor médio28.
6. Coloração pela hematoxilina-eosina (HE)
- Coleta de amostras
- À 1 semana do final da intervenção (Figura 1), coloque o coelho do lado direito na caixa de fixação do coelho (os coelhos têm maior probabilidade de permanecer relaxados quando deitados do lado direito). Injetar pentobarbitona (100 mg/kg) na veia marginal da orelha do coelho para eutanásia humanizada29,30.
- Abra a cavidade do joelho esquerdo rapidamente com bisturi, tesoura e pinça hemostática para remover o tecido mole aderido ao redor da cartilagem do fêmur distal.
- Coletar uma peça cartilaginosa-óssea de aproximadamente 1 cm x 1 cm do fêmur distal com pinça de mordida e colocá-la em soro fisiológico para limpeza.
- Fixação e descalcificação
- Colocar a cartilagem em solução de paraformaldeído a 4% e fixar por 72 h.
- Enxágue em água corrente por 12 h. Descalcificar em solução de descalcificação do ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) por 6 semanas. Troque a solução de descalcificação com EDTA a cada 3 dias. Determinar o ponto final da descalcificação quando o tecido ósseo se torna macio e flexível, pode ser facilmente dobrado e perfurado suavemente com uma agulha31.
- Desidratação de seções embutidas
- Coloque o espécime em um desidratador automático para desidratação.
- Coloque o tecido encerado e aparado no fundo de um recipiente quadrado com cera de parafina dissolvida por 1 h. Leve ao forno de resfriamento até esfriar e solidificar em blocos duros. Cortar o bloco de tecido embebido em parafina em um corte até uma espessura de 4 μm.
- Desdobre as seções na máquina de água sanitária, depois coloque-as em lâminas adesivas, numere-as e seque-as com uma máquina de assar fatias e forno.
- Desenceramento e hidratação
- Asse as seções a 65 °C por 60 min.
- Mergulhe as seções em xileno por 7 min, seguido por mais 2 rodadas de imersão em xileno fresco por 7 min cada.
- Mergulhe a fatia em etanol anidro por 5 min, seguido de imersão por 2 min cada em etanol 95%, etanol 85% e etanol 75%.
- Deixe as seções de molho em água destilada por 2 min.
- Coloração hematoxilina: cortes coratórios com hematoxilina por 20 s. Enxágue as seções em água corrente. Seções de imersão em fracionamento de etanol de ácido clorídrico por 3 s. Enxágue as seções em água corrente por 5 min.
- Recoloração de eosina: cortes de coloração com eosina por 30 s. Enxágue as seções com água da torneira.
- Desidratação para transparência da amostra
- Colocar seções em etanol 95% duas vezes por 3 s cada, seguido de colocar em etanol anidro por 3 s.
- Novamente, coloque as fatias em etanol anidro por 1 min, seguido de 2 rodadas de xileno lavadas por 1 min cada.
- Vedação das fatias: Retire as fatias, solte o selador de goma neutra, cubra com uma lamínula e deixe as fatias secarem em uma coifa até ficarem inodoras.
- Fotografar a amostra: Observar e fotografar sob o campo de visão de um microscópio de luz a 100x.
- Avaliação: Avaliar o tecido cartilaginoso pelo escore de Mankin para cada grupo32.
7. Análise dos dados
- Analisar estatisticamente os dados experimentais utilizando software de análise. Quando os dados foram submetidos a uma distribuição normal, comparar dois grupos de amostras pelo teste t e múltiplos grupos por ANOVA one-way.
- Expresse os resultados em média ± desvio padrão (DP). Representar resultados como gráficos estatísticos usando software comercial. As diferenças foram estatisticamente significantes com p < 0,05.
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Representative Results
O grau de restrição de movimento do joelho e o dano ao tecido cartilaginoso refletem a gravidade da OA. A ADM da articulação do joelho reflete o grau de restrição do movimento articular do joelho. Quanto menor a ADM articular do joelho, mais grave é a limitação do movimento articular do joelho. Ao contrário, quanto maior a ADM articular do joelho, mais normal é o grau de movimento do joelho. A coloração HE para observar a morfologia e estrutura do tecido cartilaginoso reflete o grau de dano do tecido cartilaginoso. Quanto mais irregular a superfície do tecido cartilaginoso, maior a existência de fissuras e defeitos, menor o número de condrócitos, mais fina a espessura da camada cartilaginosa, mais desordenado o arranjo das células, mais desigual a distribuição das células, mais obscuras as camadas, menos clara e completa a linha de maré, quanto maior o escore de Mankin, mais grave é o dano ao tecido cartilaginoso da articulação do joelho e, ao contrário, mais normal é o tecido cartilaginoso32. Ao estabelecer o modelo de OQ, o sucesso da modelagem pode ser determinado pela observação do grau de restrição do movimento articular do joelho de coelhos23,24. A eficácia de Tuina pode ser determinada observando-se a melhora do grau de limitação do movimento articular do joelho e do grau de dano do tecido cartilaginoso quando a articulação do joelho do coelho é intervencionada por Tuina12.
Após a semana 7, a comparação da articulação do joelho esquerdo dos dois grupos de coelhos revelou que os músculos do grupo modelagem estavam mais rígidos e com movimento limitado, com ADM de 74,67° ± 1,21°, menor que os 140,17° ± 1,33° do grupo sham, sugerindo sucesso na modelagem (Figura 2C, Figura 4).
Após a 12ª semana de mensuração e análise, a ADM articular do joelho do grupo sham, do grupo modelo e do grupo Tuina foi de 140,33° ± 1,37°, 76,33° ± 1,37° e 134,33° ± 1,51°, respectivamente, e a mobilidade articular do joelho do grupo Tuina foi significativamente maior do que a do grupo modelo (p < 0,01), indicando que Tuina poderia melhorar a função articular do joelho de coelhos com OA (Figura 5).
A coloração HE da cartilagem da articulação do joelho esquerdo dos coelhos de cada grupo mostrou que a superfície do tecido cartilaginoso do grupo sham estava lisa e intacta, o número de condrócitos foi de 331,67 ± 13,98, a espessura da camada de cartilagem foi de 259,42 ± 41,97 μm, as células estavam bem dispostas e uniformemente distribuídas, os níveis eram claros, as linhas de maré eram claras, contínuas e completas, e a pontuação de Mankin foi de 0,33 ± 0,52. Em comparação com o grupo sham, a superfície do tecido cartilaginoso do grupo modelo era irregular com defeitos e fissuras, o número de condrócitos foi de 29,50 ± 8,04, a espessura da camada de cartilagem foi de 103,15 ± 24,64 μm, as células estavam desordenadas, distribuídas de forma desigual, as camadas não eram claras, as linhas de maré não eram claras e incompletas, e o escore de Mankin foi de 9,33 ± 1,03. Em comparação com o grupo modelo, a cartilagem do grupo Tuina apresentou superfície regular, com menos defeitos e fissuras, o número de condrócitos foi de 291,83 ± 8,18, a espessura da camada de cartilagem foi de 183,58 ± 15,34 μm, as células estavam mais ordenadas, ligeiramente desigualmente distribuídas, as camadas eram mais claras e as linhas de maré eram relativamente claras e completas, e o escore de Mankin foi de 3,00 ± 0,63 (Figura 6)15,23,33. O número de células, a espessura da camada cartilaginosa e o escore de Mankin no grupo Tuina foram significativamente melhores do que no grupo modelo (p < 0,001), indicando que Tuina poderia reparar o tecido cartilaginoso danificado.
Figura 1: Protocolo para o estabelecimento e Tuina de coelhos modelo KOA. Após alimentação adaptativa de coelhos por 1 semana, construir o modelo de KOA na articulação do joelho esquerdo de coelhos por 6 semanas, com injeções de solução de papaína a 4% nos dias 1, 4 e 7 do início da modelagem. Intervir a articulação do joelho esquerdo dos coelhos por Tuina por 4 semanas, 1 vez a cada dois dias. Após 1 semana de alimentação, medir a ADM da articulação do joelho esquerdo dos coelhos e colher amostras. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2: Estabelecimento do modelo de KOA . (A) A articulação do joelho esquerdo dos coelhos foi preparada e desinfetada. (B) A agulha foi inserida a partir de Waixiyan, e solução de papaína a 4% e solução de cloreto de sódio a 0,9% foram injetadas na cavidade articular do joelho dos grupos modelador e sham de coelhos, respectivamente. (C) Coelhos modelo KOA moldados com sucesso com limitação de movimento da articulação do joelho esquerdo. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3: Treinamento para as técnicas de Tuina utilizando o instrumento de determinação de parâmetros da técnica de Tuina. (A) Treine para o método de amassamento rotativo com o polegar. (B) A curva do método de amassamento rotatório com um polegar. (C) Treine o método de prensagem com a extremidade do polegar. (D) A curva do método de prensagem com a extremidade do polegar. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 4: ADM articular do joelho esquerdo em coelhos antes e após a modelagem. Os dados foram processados pelo teste t sobre os grupos sham e modelagem, e os resultados foram expressos como média ± DP. ns p > 0,05,***p < 0,001. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 5: ADM articular do joelho esquerdo de coelhos. Para os grupos sham, modelo e Tuina, os dados foram processados por ANOVA, e os resultados foram expressos como média ± DP. Na semana 1, a ADM aumentou ligeiramente nos três grupos. Em comparação com o grupo sham, a ADM diminuiu gradualmente nos grupos modelo e Tuina no momento da modelagem (p < 0,001). Em contraste com o grupo modelo, a ADM aumentou gradualmente após a intervenção no grupo Tuina (p < 0,001). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 6: Coloração HE da cartilagem da articulação do joelho do coelho . (A) A coloração HE do grupo sham. (B) A coloração HE do grupo modelo. (C) A coloração HE do grupo Tuina. (D) Comparação do número de condrócitos entre os grupos. (E) Comparação da espessura da camada de cartilagem entre os grupos. (F) Comparação do escore de Mankin entre os grupos. Os dados foram processados por ANOVA, e os resultados foram expressos como média ± DP. Após 12 semanas, como visto pela coloração HE, o tecido cartilaginoso do grupo estava estruturalmente intacto, com número e arranjo celular normais; o tecido cartilaginoso do grupo modelo foi estruturalmente destruído com baixo número de células e arranjo desordenado; o tecido cartilaginoso do grupo Tuina estava intacto, com número e arranjo celular relativamente normais. ***p < 0,001. Barra de escala = 100 μm. N =6. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
O desenho do protocolo experimental é particularmente importante para investigar o mecanismo de Tuina no tratamento de OA hospitalar. A modelagem com OA foi realizada em coelhos por injeção de papaína em Waixiyan. Waixiyan está localizado na cripta lateral do ligamento patelar, que é fácil de localizar, e o espaço articular entre o fêmur e a tíbia é grande aqui durante a flexão do joelho, o que facilita a injeção na cavidade articular do joelho e evita danos aos tecidos circundantes, por isso é fácil estabelecer o modelo de KOA34. Durante a intervenção de Tuina em coelhos KOA, os coelhos modelo foram adequadamente posicionados para facilitar a administração de Tuina. Os coelhos foram colocados na caixa de fixação do coelho em seu lado saudável, com a cabeça fixa, e suas emoções foram aliviadas para relaxar todo o corpo e não lutar. Para padronizar a força e a frequência de Tuina e melhorar a homogeneidade das intervenções de Tuina, Tuina é realizada por um operador que passou por um treinamento rigoroso em manipulação de Tuina pelo instrumento de determinação de parâmetros da técnica Tuina.
O passo chave neste protocolo é o uso de Tuina combinado com o método de correção rotatória da articulação do joelho para tratar OA. Antes da operação, o membro inferior afetado do coelho foi palpado do quadril ao tornozelo, focando na área ao redor da articulação do joelho, sondando nós tendinosos e rigidez muscular e, em seguida, flexionando e estendendo a articulação do joelho para observar a altura de Neixiyan e Waixiyan para manipulação precisa da Tuina. O método de amassamento e prensagem rotatória pode liberar tensão muscular e espasmo, melhorar a circulação sanguínea na articulação do joelho, promover o metabolismo de substâncias inflamatórias e reduzir o inchaço e a dor35,36. Os pontos de acupuntura são os pontos de resposta e tratamento da doença, e os GB 34 e EX-LE2 são os pontos com alta sensibilidade para o tratamento da OA e, estimulando-os, podem atuar nos mastócitos, afetando a liberação de 5-hidroxitriptamina, triptase e histamina37. A mineração de dados revelou que GB 34, SP 9, EX-LE5, EX-LE4, EX-LE2, SP 10, ST 34 e BL 40 são pontos de acupuntura comumente utilizados na prática clínica38,39. Esses pontos têm efeito de aliviar tendões e nós, ativar a circulação sanguínea e aliviar a dor38,39. Estudos têm demonstrado que a estimulação dos acupontos acima pode reduzir os níveis séricos de fatores inflamatórios como fator de necrose tumoral-α e interleucina-1β e inibir a destruição do esqueleto dos condrócitos, tratando assim a OA 39,40,41.
O método de correção rotatória da articulação do joelho realizado sob exercícios de resistência ativa com níveis de força ajustáveis é de fácil execução e evita o risco potencial de lesão na regulação da estrutura do joelho em comparação com técnicas de movimento passivo como flexão e compressão. O ângulo afeta o torque, e um desequilíbrio entre o torque de fechamento interno da articulação do joelho e o torque de abdução pode aumentar a carga articular anormal, o que pode desencadear OAB42,43,44,45. Alguns estudos demonstraram que a intervenção de Tuina com exercício resistido regular pode melhorar a densidade óssea, liberar espasmos musculares, restaurar a massa e a força musculares, reduzir a dor e tratar efetivamente a OA 46,47,48,49,50. Como o joelho de coelho é menor que o joelho humano e não pode realizar movimentos voluntários de resistência, a Tuina original de duas pessoas foi alterada para uma Tuina de duas mãos para garantir melhor eficácia e facilidade de operação do método de correção rotatória da articulação do joelho sob resistência12. Agora, ao fixar o fêmur do coelho com uma mão para simular o movimento de resistência, a outra mão é usada para realizar o método de correção rotatória da articulação do joelho, aplicando força de torção e tração no Xiyan inferior para que Waixiyan e Neixiyan estejam na mesma altura e a altura relativa do platô tibial medial e lateral seja ajustada. A articulação do joelho também pode ser ajustada para dentro e para fora para regular seus torques internos e externos, promover o alinhamento axial, ajustar o alinhamento das articulações femorotibial e femoropatelar, restaurar a estrutura de força normal da articulação do joelho, reduzir a carga articular do joelho, aumentar a estabilidade articular do joelho e restaurar a mobilidade normal e a função fisiológica da articulação do joelho42, 43,44,45.
Os estudos clínicos anteriores da equipe mostraram a eficácia desse método no tratamento de KOA, e estudos em animais mostraram que ele é mais eficaz do que o sulfato de glucosamina no tratamento de KOA12. Tuina pode mediar as vias de sinalização interleucina 1β (IL-1β) e quinase 1/2 regulada por sinal extracelular (ERK1/2)-fator de transcrição nuclear κB (NF-κB), reduzir a concentração de IL-1β no soro periférico e fluido articular de coelhos, aumentar o nível de expressão de linfoma de células B-2 (Bcl-2) e diminuir os níveis de expressão de ERK1/2, proteína x associada a Bcl-2, NF-κB p65 e protease 3 de aspartato de cisteína. Isso ajuda a regular a apoptose e proliferação de condrócitos e a equilibrar o ambiente interno desordenado dos condrócitos, melhorando as alterações patológicas na cartilagem12.
A limitação deste método é que a intervenção de Tuina é realizada por um ser humano em vez de uma máquina, e é difícil para o operador alcançar homogeneidade completa na força e frequência de Tuina.
Em conclusão, Tuina pode efetivamente reduzir a inflamação das articulações do joelho, inibir a degeneração da cartilagem do joelho e restaurar gradualmente a mobilidade fisiológica normal, e este estudo pode fornecer um protocolo de pesquisa científico e viável para o mecanismo de tratamento de Tuina das doenças articulares do joelho.
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Disclosures
Os autores declaram não haver conflitos de interesse.
Acknowledgments
Este trabalho foi apoiado pelo Projeto de Ciência e Tecnologia de Medicina Tradicional Chinesa da Província de Shandong (2021Q080) e pelo Projeto de Herança da Escola Acadêmica de Medicina Tradicional Chinesa da Escola Qilu [Lu-Wei-Letter (2022) 93].
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.9 % sodium chloride injection | Sichuan Keren Pharmaceutical Co. | Z22121903 | |
| -20°C refrigerator | Haier | BD-328WL | |
| 4 % fixative solution | Solarbio | P1110 | |
| 4°C refrigerator | Haier | SC-315DS | |
| Anhydrous ethanol | Sinopharm | ||
| Automatic tissue dewatering machine | Dakowei (Shenzhen) Medical Equipment Co. | HP30 | |
| Blast drying oven | Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co. | DHG-9070A | |
| Coverslip | Biyuntian | FCGF50 | |
| Electric thermostat water bath | Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co. | HWS-26 | |
| Embedding freezing table | Changzhou Paishijie Medical Equipment Co. | BM450 | |
| Embedding machine | Changzhou Paishijie Medical Equipment Co. | BM450A | |
| Ethylenediaminetetraacetic acid decalcification solution | Servicebio | G1105-500ML | |
| Fluorescent inverted microscope | Leica | Leica DM IL LED | |
| Hematoxylin-eosin staining kit | Cisco Jet | EE0012 | |
| Hydrochloric acid | Laiyang Economic and Technological Development Zone Fine Chemical Plant | ||
| Medical joint goniometer | KOSLO | ||
| Neutral gum | Cisco Jet | EE0013 | |
| Normal-grade male New Zealand rabbit | Jinan Xilingjiao Breeding and Breeding Center | SCXK (Lu) 2020 0004 | |
| Papain(3000 U/mg) | Bioss | D10366 | |
| Pathological tissue bleaching and drying instrument | Changzhou Paishijie Medical Equipment Co. | PH60 | |
| Pet electric clippers | Codos | CP-3180 | |
| Rabbit fixing box | any brand | ||
| Rotating Slicer | Leica | 531CM-Y43 | |
| Tuina technique parameter determination instrument | Shanghai DuKang Instrument Equipment Co. Ltd. | ZTC- |
|
| Ventilator | TALY ELECTRIC | C32 | |
| Xylene | Fuyu Reagent |
References
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