Summary
제약 건조 분말 개발에는 신뢰할 수 있는 생체 내 테스트가 필요하며, 종종 쥐 모델을 사용합니다. 건조 분말 에어로졸을 마우스에 정확하고 재현성 있게 전달하기 위한 장치 기술은 제한적입니다. 이 연구는 마우스 관련 용량에서 폐 약물 전달을 위한 일회용 투여제를 제시하여 초기 개념 증명 연구를 지원합니다.
Abstract
건조 분말 흡입기는 안정적인 고체 약물 제형, 기기 휴대성, 볼루스 계량 및 투여, 추진제가 없는 분산 메커니즘 등 약물을 폐로 전달하는 데 있어 다양한 이점을 제공합니다. 제약 건조 분말 에어로졸 제품을 개발하려면 강력한 생체 내 테스트가 필수적입니다. 일반적으로 초기 연구에는 더 큰 동물 종에 대한 공식 연구를 수행하기 전에 예비 평가를 위해 쥐 모델을 사용하는 것이 포함됩니다. 그러나 이 접근법의 중요한 한계는 건조 분말을 작은 동물에게 정확하고 재현성 있게 전달할 수 있는 적절한 장치 기술이 부족하여 이러한 모델의 유용성을 저해한다는 것입니다. 이러한 문제를 해결하기 위해 일회용 주사기 투여기는 마우스에 적합한 용량의 건조 분말을 폐 내 전달하기 위해 특별히 개발되었습니다. 이러한 투여제는 균일한 벌크 밀도 분말 베드로부터 얻어진 미리 결정된 양의 분말을 적재하고 전달합니다. 이 개별 제어는 뭉툭한 바늘을 분말 베드에 고정된 깊이(탬핑)로 삽입하여 매번 고정된 양을 제거함으로써 달성됩니다. 특히, 이 투여 패턴은 다양한 분무 건조 분말에 효과적인 것으로 입증되었습니다. 4개의 상이한 모형 분무 건조된 분말을 포함하는 실험에서는, 투여제는 30 내지 1100 μg의 범위 내에서 투여량을 달성하는 능력을 입증하였다. 달성된 투여량은 탬프의 수, 투여기 바늘의 크기 및 사용된 특정 제형과 같은 요인에 의해 영향을 받았습니다. 이러한 투여제의 주요 이점 중 하나는 제조가 용이하여 초기 개념 증명 연구 중에 건조 분말을 마우스에 전달하기 위해 접근하기 쉽고 비용 효율적이라는 것입니다. 투여기의 일회용 특성으로 인해 재사용 가능한 시스템과 계량 재료를 세척하고 리필하는 것이 불편한 동물 시술실에서 쉽게 사용할 수 있습니다. 따라서 일회용 주사기 투여기 개발은 개념 증명 연구를 위한 쥐 건조 분말 전달의 상당한 장애물을 해결하여 연구자들이 폐 약물 전달을 위한 소동물 모델에서 보다 정확하고 재현 가능한 예비 연구를 수행할 수 있도록 했습니다.
Introduction
폐 약물 전달을 위한 건조 분말 흡입기(DPI)의 사용은 클로로플루오로카본 추진제의 전 세계적인 단계적 폐지로 인해 지난 30년 동안 상당한 관심을 끌었습니다 1,2. DPI는 정량 흡입기 및 분무기와 같은 다른 폐 전달 시스템에 비해 제형 안정성, 휴대성, 사용 편의성 및 추진제가 없는 분산 메커니즘을 포함하여 많은 이점을 제공합니다2. 그러나 DPI 제품을 임상 번역으로 전환하기 전에 몇 가지 전임상 연구를 수행해야 하며, 그 중 다수는 처음에 쥐 모델을 사용하여 완료됩니다. 그럼에도 불구하고 건조 분말을 작은 동물에게 정확하고 재현성 있게 전달하는 데 사용할 수 있는 기술은 제한적입니다.
마우스와 같은 작은 동물에게 건조 분말을 전달하는 일반적인 방법에는 수동 흡입 3,4,5,6,7 및 직접 투여 8,9,10,11,12,13이 포함됩니다. 수동 흡입에는 일반적으로 충분한 에어로졸 구름을 준비하기 위해 다량의 분무 건조 분말을 사용하는 맞춤형 챔버가 필요합니다. 마우스는 의무적인 코 호흡기(14)이기 때문에, 수동 흡입에 의한 전달은 분말이 코와 목을 통과하여 폐에 도달해야 하며, 이는 충분한 입자 공기역학적 특성을 갖는 에어로졸 구름의 유지를 필요로 한다 7,8. 정상적인 호흡의 결과로 인한 흡입으로 인한 직접 전달보다 생리학적으로 더 관련성이 있는 유용한 기술이지만,14 분말 질량이 제한적인 초기 연구에는 적합하지 않을 수 있다.
대안적으로, 직접 건조 분말 전달을 위한 다수의 기관내 전달 장치가 8,9,10,11,12,13으로 보고되었다. 기관내 장치는 코와 목을 우회하여, 분말을 폐에 직접 전달하고, 전달된 투여량을 보다 세밀하게 제어할 수 있도록 한다14. 또한, 일부 장치, 특히 탬핑 로딩 절차(tamping loading procedure)9를 사용하여 제조된 장치는 소량으로 준비할 수 있으며, 이는 초기 개념 증명 연구에서 중요한 고려 사항이다. 보편적으로 이용 가능한 기관내 전달 장치의 부족은 사용 가능성을 저해하여 가용성을 제한하고 실험실 간 차이를 초래했다14. 이 연구에서는 건조 분말 에어로졸 개발에서 개념 증명 쥐 연구에 활용할 수 있는 기관 내 전달을 위한 간단하고 저렴한 일회용 투여제를 제안합니다.
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Protocol
모든 동물실험은 동물복지법과 실험동물의 인도적 관리 및 이용에 관한 보건복지 정책에 따라 수행되었습니다. 연구 프로토콜은 테네시 대학 보건 과학 센터의 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 받았습니다. 생후 6~8주령의 건강한 암컷 BALB/c 마우스는 스펙티나미드 1599 건조 분말을 사용한 약동학 연구를 위해 폐내 에어로졸 전달에 의해 1회 투여제의 건조 분말 함량을 투여하였다9. 동물은 상업적 출처에서 얻었다( 자료표 참조).
1. 투여제 및 충전 성분의 준비
- 정밀 절단 톱(재료 표 참조) 또는 벨트 샌더를 사용하여 2.54cm(1인치) 뭉툭한 스테인리스 스틸 바늘(21-25G)의 플라스틱 루어 부분을 플라스틱 루어가 남을 때까지 자릅니다(그림 2A 및 그림 2A).
알림: 벨트 샌더를 사용하는 경우 발생할 수 있는 장애물을 제거하기 위해 더 작은 바늘이나 와이어를 사용하여 스테인리스 스틸 바늘을 청소해야 할 수 있습니다. - 0.6mL 원추형 원심분리기 튜브의 팁(1.5-0.6cm)을 잘라냅니다. 튜브 끝에 30-35mg의 분말을 채웁니다.
참고: 본 연구에 사용된 예제 분말에 대한 자세한 내용은 대표 결과를 참조하십시오. 분말 에어로졸 성능은 USP General Chapter <601>( 재료 표 참조)에 설명된 표준 방법론에 따라 이 응용 분야에서 사용하기 전에 평가해야 합니다. - 분말을 보관 및/또는 운송하는 경우 튜브 캡(절단)을 사용하여 바이알을 닫습니다. 보관 및/또는 운송 시 분말이 주변 습기에 노출되는 것을 최소화하기 위해 파라핀 필름으로 밀봉하십시오.
2. 선적 및 모이는 dosators
- 원하는 용량에 도달하기 위해 필요한 만큼 0.6mL 원뿔형 원심분리기 튜브 팁의 분말 베드에 트리밍된 스테인리스 스틸 바늘을 담그십시오(그림 2B). 보풀이 적은 와이퍼로 스테인리스 스틸 바늘의 측면을 부드럽게 닦아 과도한 가루를 제거합니다(그림 3).
- 장전된 스테인리스 스틸 바늘을 3.81cm(1.5인치) 폴리프로필렌 또는 5.08cm(2인치) 폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE) 바늘(16-20G)에 부드럽게 삽입하여 분말이 빠지지 않도록 합니다(그림 1B, C 및 그림 2C).
3. 작동 투여기
- 일회용 주사기를 용도에 따라 다를 수 있는 원하는 부피로 다시 빼냅니다.
참고: 마우스의 폐 내 투여의 경우 일반적으로 0.15-0.6mL가 적절합니다 8,9. - 주사기를 폴리프로필렌 또는 PTFE 바늘의 루어 잠금 장치에 부착합니다(그림 2D).
- 투여기의 바늘 끝을 원하는 대상에 삽입합니다. 분말 함량 및 재현성을 분석하기 위해 구멍이 뚫린 고무 격막 또는 파라핀 필름을 통해 소량(예: 1-5mL)의 물 및/또는 유기 용매(예: 에탄올)가 들어 있는 바이알에 바늘을 삽입하며, 용매 식별 및 부피는 활성 제약 성분(API)의 물리적 특성 및 정량화 방법에 따라 달라집니다.
- 마우스에 전달하기 위해 확립된 프로토콜 9,15에 따라 마취된 마우스의 기관의 첫 번째 기관지 분기까지 바늘을 삽입합니다.
- 주사기를 세게 눌러 장치에서 분말을 수집 바이알로 배출합니다(그림 2E).
알림: 분말을 쥐 폐에 전달할 때도 동일한 기술을 따라야 합니다. - 수집 바이알의 함량 및 재현성을 분석하기 위해 UV 가시광선(UV-Vis) 분광광도법 또는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)와 같은 특정 API에 적합한 분석 방법을 활용하십시오.
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Representative Results
다양한 분무 건조 분말의 에어로졸 성능은 이 연구에서 사용하기 전에 확립되었습니다. 공기역학적 입도 분포(APSD)는 50번째 백분위수(d50)에서 분포를 둘로 나누는 크기를 나타내는 질량 중앙값 공기역학적 직경(MMAD)과 분포의 폭을 반영하는 기하학적 표준 편차(GSD)로 설명되었습니다. GSD는 80번째 백분위수에서 공기역학적 직경의 제곱근을 16번째 백분위수(d84/d16)1/2로 나눈 값으로 정의되며, 백분위수는 입자 크기에 대한 질량의 로그 정규 분포에 대한 평균의 양쪽에서 하나의 표준 편차를 나타냅니다.
4개의 대표적인 분무 건조 분말을 본원에 기술된 투여제를 사용하여 전달하기 위해 고려하였다. 티게사이클린(SD-1)3, 카프레오마이신 설페이트(SD-2)16, 스펙티나미드 1599(SD-3)9 및 부형제가 포함된 알부테롤 설페이트(SD-4) API를 포함한 분무 건조(SD) 분말은 다양한 응용 분야를 위해 개발된 다양한 항균 및 기관지 확장제 제형을 나타냅니다. 투여제에 사용하기 전에, USP General Chapter <601>( 재료 표 참조)에 따라 저저항 건조 분말 흡입기 및 고성능 캐스케이드 임팩터를 사용하여 4가지 분말에 대한 공기역학적 입자 크기 분포를 측정했습니다. SD-1, SD-2, SD-3 및 SD-4의 MMAD는 각각 2.6 ± 0.1μm(GSD = 2.1 ± 0.1), 1.7 ± 0.1μm(GSD = 2.4 ± 0.1), 1.7 ± 0.4μm(GSD = 2.7 ± 0.5), 2.2 ± 0.2μm(GSD = 2.1 ± 0.3)였다. 4 개의 분말은 방출 선량에 대해 SD-1, SD-2, SD-3 및 SD-4에 대해 각각 68 % ± 1 %, 82 % ± 1 %, 77 % ± 1 %, 68 % ± 2 %의 미세 입자 분율 (<4.46 μm)을 나타냈다. 4개의 분말은 그림 4의 주사 전자 현미경을 사용하여 시각화됩니다.
각 분말을 별도의 30-35mg 분취액으로 제조하고, 투여제의 스테인리스강 바늘(21G)을 분말 베드에 1 내지 4회 탬핑하였다. 투여제(21G 스테인리스강 내부 바늘 및 16G 폴리프로필렌 외부 바늘)를 5mL의 물이 들어 있는 밀봉된 바이알에 작동시켰습니다. 부드러운 혼합 후 용액을 UV 가시광선 분광광도법(SD-1, SD-2, SD-3 및 SD-4의 경우 각각 λ = 351nm, 268nm, 271nm 및 230nm)을 통해 분석하여 투여제에서 방출되는 분말의 선량을 모니터링했습니다. 분말 베드의 tamps 수의 함수로서 전달된 선량은 그림 5에 표시되어 있습니다. 특히, 모든 분무 건조 분말은 이러한 투여제로 1 내지 4 tamps의 선형 용량-반응(R2 > 0.97)을 나타냈다. SD-1의 경우, 한 번의 탬프로 인해 209 ± 99 μg의 분말 전달이 이루어졌으며, 각 후속 탬프는 ~130 μg을 추가했습니다(그림 5A). 다른 분말도 비슷한 경향을 보였는데, 첫 번째 탬프는 후속 탬프보다 더 많은 양의 파우더를 발생시켰습니다. SD-2 (그림 5B), SD-3 (그림 5C) 및 SD-4 (그림 5D)의 경우, 한 번의 탬프로 268 ± 88 μg, 332 ± 95 μg, 412 ± 72 μg의 전류가 전달되었으며, 각 후속 탬프는 더 적은 양의 170-230 μg을 추가했습니다. 각 분말에 대한 선형 반응은 SD-1, SD-2, SD-3 및 SD-4의 4가지 분말을 사용하여 약물 로딩을 제어할 수 있으며, 각각 210-570μg, 270-780μg, 330-870μg 및 410-1120μg의 달성 가능한 범위를 보여줍니다. 모두 선형적이고 재현 가능하지만, 한 분무 건조 분말에서 다른 분무 건조 분말로 볼 때 나타나는 차이는 관심 있는 특정 건조 분말에 대해 투여기에서 방출되는 용량을 특성화해야 할 필요성을 강조합니다.
더 작은 직경의 투여제는 또한 더 작은/더 어린 마우스에서의 사용을 평가하기 위해 준비되었습니다. 이전 단락에서 설명한 초기 디자인은 16G 폴리프로필렌 외부 바늘(외경 = 1.7mm)을 사용하여 준비되었습니다. 이러한 투여기에 사용된 21G 스테인리스강 바늘은 Stewart 등에서 보고한 바와 같이 20G PTFE 외부 바늘(외경 = 1.2mm)과도 호환됩니다.9 그림 6A 는 분말 제형 SD-1과 함께 21G 스테인리스강/20G PTFE 투여기의 사용을 보여줍니다. 21G 스테인리스강/16G 폴리프로필렌 투여제에 비해 달성 가능한 투여량이 약간 감소하는 것이 관찰되며, 초기 탬프는 111 ± 62μg의 투여량을 초래하고 각 후속 탬프는 ~96μg을 추가합니다(그림 6A). 폴리프로필렌 바늘(5.08cm)에 비해 PTFE 바늘(3.81cm)의 길이가 길어지고 바늘의 유연성이 높아 분말 손실이 발생할 수 있습니다. 더 작은 직경의 폴리프로필렌 외부 바늘도 평가되었지만 더 작은 직경의 스테인리스 스틸 내부 바늘이 필요했습니다. 18G(외경 = 1.3mm) 및 20G(외경 = 1.0mm) 폴리프로필렌 바늘에는 각각 22G 및 25G 스테인리스 스틸 내부 바늘이 필요합니다. 예상대로 내부 바늘 직경을 줄이면 달성 가능한 선량이 감소했습니다. 그림 6B에 표시된 22G 스테인리스강/18G 폴리프로필렌 투여제는 하나의 탬프로 82 ± 31μg의 SD-1 투여량을 보여주었으며, 각 후속 탬프는 투여량을 ~41μg씩 증가시켰습니다. 그림 6C에 표시된 25G 스테인리스강/20G 폴리프로필렌 투여제는 29 ± 17μg의 더 작은 SD-1 투여량을 보여주었으며, 추가 탬프는 전달된 투여량을 최소한으로 증가시켰습니다(~4μg/tamp). 도 6D 는 분말 제형 SD-1의 4 tamps를 사용할 때 본원에서 평가된 4개의 투여제 시스템의 비교를 나타내며, 투여제 시스템이 투여량 요구 사항 및 동물의 연령/크기를 충족하도록 맞춤화될 수 있음을 강조한다.
그림 1: 수정된 바늘 준비. (A) 플라스틱 루어 잠금 부분이 2-3mm로 잘린 수정된 스테인리스 스틸 바늘. (BC) 폴리프로필렌 바늘에 수정된 스테인리스 스틸 바늘 삽입. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 2: 분말 로딩 및 작동 개략도. (A-E) 분말 로딩, 투여기 조립 및 조립된 투여기로부터의 작동 개략도. 공기는 내부 스테인리스 스틸 바늘을 통해 강제로 배출되어 투여기에서 분말을 분배합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 3: 내부 바늘 외부에서 분말 잔여물 제거 . (A) 분말 베드에 탬핑 후 바늘 외부에 분말이 남아 있는 수정된 스테인리스 스틸 바늘. (B) 보푸라기가 적은 와이퍼로 부드럽게 닦은 후 표면이 깨끗한 수정된 스테인리스 스틸 바늘. (C) 분말을 함유한 바늘 내부의 시각화. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 4: 분무 건조 분말. 4개의 개별 API로 준비된 분무 건조 분말의 대표적인 주사 전자 현미경 이미지. 건조 분말에는 (A) SD-1, (B) SD-2, (C) SD-3 및 (D) SD-4가 포함됩니다. 모든 이미징은 10,000x 배율로 수행되었으며 스케일 바는 5μm입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 5: 전달된 분말의 정량화. (A) SD-1, (B) SD-2, (C) SD-3 및 (D) SD-4(n ≥ 3, 평균 ± 표준 편차를 포함)를 포함한 4개의 분무 건조 분말의 분말 베드에 탬핑의 함수로 투여기(21G 스테인리스 스틸 내부 바늘 및 16G 폴리프로필렌 외부 바늘)에서 전달되는 분말의 질량. 하중 tamp당 분산된 분말의 질량을 보여주는 기울기와 선형 곡선에 대한 적합도(R2)가 포함됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 6: 더 작은 직경의 바늘로 전달된 분말의 정량화. (A) 20G PTFE 외부 바늘이 있는 21G 스테인리스 스틸 내부 바늘, (B) 18G 폴리프로필렌 외부 바늘이 있는 22G 스테인리스 스틸 내부 바늘 및 (C) 20G 폴리프로필렌 외부 바늘이 있는 25G 스테인리스 스틸 내부 바늘(n ≥3, 평균 ± 표준 편차)을 포함하여 더 작은 직경의 바늘을 사용하여 제조된 투여제에서 전달되는 SD-1 분말의 질량. 하중 tamp당 분산된 분말의 질량을 보여주는 기울기와 선형 곡선에 대한 적합도(R2)가 포함됩니다. y축은 각 Figure의 데이터에 맞게 스케일링됩니다. 분말 베드에 4 tamps 후 모든 투여제 유형에서 전달되는 SD-1의 투여량 비교는 (D)에 나와 있습니다. 약어는 다음과 같습니다 : SS, 스테인레스 스틸; PP, 폴리프로필렌; PTFE, 폴리테트라플루오로에틸렌. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
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Discussion
마우스는 의무적인 코 호흡기이기 때문에 초기 개념 증명 연구를 위한 수동 흡입을 통한 전달은 분말이 입자 특성 및 분말 분산 효율에 따라 달라지는 방식으로 코와 목을 통과해야 하기 때문에 효율성 및 용량 추정을 어렵게 만듭니다 7,8,14. 본원에서 개발된 투여제의 사용은 제1 기관지 분기점(9)에 삽입된 투여제와 함께 코와 목을 우회하고, 전체 투여량을 마우스의 폐에 직접 전달하여, 초기 연구를 위한 보다 정확한 투여량을 조절할 수 있게 한다. 이러한 투여제는 마우스에 대한 기관 내 투여 및 분말 성능의 시험관 내 평가를 위한 재현 가능하고 맞춤형 전달 방법을 나타냅니다.
21G 스테인리스강 및 16G 폴리프로필렌 바늘을 사용하는 투여제는 제형 및 탬프 수에 따라 200-1100μg을 로딩 및 전달할 수 있었으며, 이는 일반적으로 마우스에 적합한 용량입니다. 분말 분산을 최대 5 tamps까지 유지하는 SD-1 및 SD-2와 같은 특정 제형의 경우 4 tamps 이상의 로딩이 가능했지만, SD-3 및 SD-4와 같은 제형의 경우 4 tamps를 초과하여 로딩하는 것이 어려웠습니다. 추가 탬핑 후 분말이 내부 바늘에 너무 많이 뭉치면 0.15-0.6mL의 공기 덩어리가 분말을 제거하고 분산시키기에 충분하지 않았습니다. 1-2 mL의 더 큰 부피가 이러한 적재된 분말을 분산시킬 수 있는 반면, 이러한 부피는 마우스에 외상을 유발할 수 있으므로 피해야 합니다 8,15. 모든 경우에 tamp이 효과를 최소화하기 위해 부드럽게 수행해야 합니다. 결과적으로, 이 효과는 제형에 따라 600-1100 mg 이상의 부하를 제한합니다. 마우스에 적합하지만, 더 큰 용량10을 필요로 하는 동물에는 더 큰 저장소형 투여제를 사용해야 한다. 더 작은 직경의 투여제(외경 1.0-1.3mm)도 개발되어 SD-1로 평가되었습니다. 21G 스테인리스강 내부 바늘과 20G PTFE 외부 바늘을 결합할 때 축소된 크기의 투여제에 대한 최대 투여량이 관찰되었습니다. 생쥐에 대한 약동학 연구는 이전에 Stewart et al.에 의해 이 투여 시스템으로 수행되었으며, 성공적인 사용을 강조했습니다9. 폴리프로필렌 외부 바늘을 사용하여 더 작은 투여량도 가능했지만 달성 가능한 투여량이 낮아져 시스템의 한계가 강조되었습니다. 투여량은 바늘 직경의 영향을 크게 받으며, 21G 스테인리스강/16G 폴리프로필렌 투여제에 대해 보고된 더 많은 용량은 너무 작거나 어린 마우스에 사용하지 못할 수 있습니다.
투여기 시스템은 본원에서 논의된 4개의 분무 건조 분말에 걸쳐 작동하는 것으로 확인된다. 그러나 이 연구의 모든 입자 시스템은 균일한 부피 밀도를 갖는 저밀도 엔지니어링 입자입니다. 분말 베드의 균일성을 보장할 수 없는 다른 입자 시스템에서의 효능은 아직 평가되지 않았으며 재현 가능한 전달을 초래하지 않을 수 있습니다. 투여기 시스템을 사용하기 전에 사례별로 추가 평가가 필요합니다.
내부 투여기 바늘을 준비하기 위해 정밀 절단 톱의 사용을 설명하지만 벨트 샌더를 제자리에 사용할 수 있습니다. 벨트 샌더를 사용하는 경우 더 작은 바늘이나 와이어를 내부 스테인리스 스틸 바늘에 밀어 넣어 바늘이 열려 있고 공정에서 막히지 않도록 하는 것이 중요합니다. 이것은 정밀 절단 톱을 사용할 때 문제로 발견되지 않았습니다.
투여제의 저렴한 비용과 준비의 용이성은 일회용 전달 장치로 사용을 용이하게 하며, 장치를 다시 로드하고 사용 사이에 세척/멸균할 필요가 없습니다. 건조 분말의 베드는 API 및 제형 보관 요구 사항에 따라 사전 충진 및 보관할 수 있으므로 사용자는 조립 및 작동 전에 바늘을 분말에 탬핑하기만 하면 됩니다. 분말 베드 튜브의 충진은 저울 및 후드를 이용할 수 있는 실험실 설정에서 수행될 수 있으며, 동물 절차 실험실(10)에 최소한의 장비가 존재할 것을 요구한다. 투여제는 마우스의 예비 개념 증명 연구를 위해 설계되었으며 정확하고 재현 가능한 로딩을 보여줍니다.
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Disclosures
저자는 이해 상충이 없음을 선언합니다.
Acknowledgments
저자는 미국 국립보건원(National Institutes of Health, R01AI155922)의 자금 지원에 감사를 표하고자 합니다. 현미경 검사법은 채플 힐 분석과 Nanofabrication 실험실 (CHANL)에, 국가 나노 과학 재단, 보조금 ECCS-1542015에 의해 지원되는 노스 캐롤라이나 연구 삼각형 나노 기술 네트워크, RTNN의 일원, 국가 나노 기술 협조한 기반시설, NNCI의 한 부분으로 실행되었습니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.6 mL microcentrifuge tubes | Fisher Scientific | 05-408-120 | |
| Analytical balance | Mettler Toledo | AR1140 | Any analytical balance with sufficient range can be used |
| Blunt stainless-steel needle, 1 inch, 21 G | McMaster-Carr | 75165A681 | |
| Blunt stainless-steel needle, 1 inch, 22 G | McMaster-Carr | 75165A683 | |
| Blunt stainless-steel needle, 1 inch, 25 G | McMaster-Carr | 75165A687 | |
| Disposable syringe with luer lock (1 mL) | Fisher Scientific | 14-823-30 | 3-mL syringes can also be used |
| Female BALB/c mice | Charles River, Wilmington, MA, USA | ||
| High-performance cascade impactor | Next Generation Impactor | Apparatus 5 | |
| Lab film (e.g., Parafilm) | Fisher Scientific | S37440 | |
| Low-lint wiper (e.g., Kimwipes) | Kimberly-Clark Professional | 34133 | |
| Low-resistance dry powder inhaler | RS01 mod 7 | ||
| Polypropylene needle, 1.5 inch, 16 G | McMaster-Carr | 6934A111 | |
| Polypropylene needle, 1.5 inch, 18 G | McMaster-Carr | 6934A53 | |
| Polypropylene needle, 1.5 inch, 20 G | McMaster-Carr | 6934A55 | |
| Precision sectioning saw | TedPella | 812-300 | Belt sander can be used as an alternative |
| PTFE needle, 2 inch, 20 G | McMaster-Carr | 75175A694 | |
| USP General Chapter <601> | http://www.uspbpep.com/usp31/v31261/usp31nf26s1_c601.asp |
References
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