Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Etterligner Dings rullemetode på Notexin-indusert muskelskade hos rotter

Published: August 25, 2023 doi: 10.3791/65820

Summary

Denne protokollen beskriver en enkel enhet som etterligner Dings rullemetode, etablerer en rottemodell for skjelettmuskelskade og bruker hematoksylin-eosinfarging for å observere patologien til skadet vev og enzymbundet immunosorbentanalyse for å oppdage endringer i serumskademarkører.

Abstract

Dings rullemetode er en av de mest brukte manipulasjonene i tradisjonelle kinesiske massasjeklinikker (Tuina) og en av de mest innflytelsesrike moderne Tuina-manipulasjonene i Kina. Den er basert på den tradisjonelle rullemetoden som vanligvis brukes i enfinger Zen-sjangeren og heter Dings rullemetode. På grunn av sine antiinflammatoriske og blodsirkulasjonsfremmende effekter, har Dings rullemetode lydterapeutiske effekter på myopati. På grunn av det store kraftområdet som påføres menneskelig hud, er Dings rullemetode utfordrende å utføre på forsøksdyr med små hudområder, som rotter og kaniner. I tillegg er styrken til Tuina påført menneskekroppen forskjellig fra den som brukes på forsøksdyr, så det kan hende at styrken er for høy eller for lav til å oppnå den terapeutiske effekten av Tuina under forsøket. Dette eksperimentet tar sikte på å skape en enkel massasjeapparat egnet for rotter basert på Dings rullende manipulasjonsparametere (styrke, frekvens, Tuina-varighet). Enheten kan standardisere manipulering i dyreforsøk og redusere variasjonen i Tuina-kraft som brukes på forskjellige dyr på grunn av subjektive faktorer. En rottemodell av ikke-eksinindusert skjelettmuskelskade ble etablert, og plasmaskademarkørene kreatinkinase (CK) og fettsyrebindende protein 3 (FABP3) ble brukt for å vurdere den terapeutiske effekten av Tuina på skjelettmuskelskade. Resultatene viste at denne Tuina-massøren kunne redusere nivåene av CK- og FABP3-uttrykk og redusere graden av skjelettmuskelskade. Derfor bidrar Tuina-massøren beskrevet her, som etterligner Dings rullemetode, til standardisering av Tuina-manipulasjon i eksperimentell forskning og er til stor hjelp for senere forskning på den molekylære mekanismen til Tuina for myopati.

Introduction

Muskelskader er vanlige traumatiske skader i klinisk og dagligliv, forårsaket av ytre slag (kontusjoner) eller kronisk overbelastning av muskelfibre (stammer), etc., noe som resulterer i muskeldysfunksjon og smerte, selv alvorlig påvirker pasientens livskvalitet1. Å starte rehabilitering så tidlig som mulig etter en akutt belastningsskade er nøkkelen til å redusere tiden for å komme tilbake til idrett2 og for å redusere smerte 3,4. I moderne vestlig medisin følger klinisk førstehjelp for muskelskader prinsippene om hvile, is, kompresjon og høyde (RICE) for å stoppe skadelig blødning i muskelvevet5 og ikke-steroide antiinflammatoriske legemidler for å lindre smerte6. Oppdagelsen av nye terapier som eksosomer7 og vevsteknikk8 ble potensielle behandlingsstrategier for skjelettmuskelsykdommer, og kompenserte for tidligere farmakologiske behandlingers mangler. Det kan imidlertid også øke behandlingskostnadene for pasienter, og sette dem under enormt økonomisk press9. Derfor anbefales alternative og komplementære terapier for behandling av muskel- og skjelettplager10. Tuina er mye brukt klinisk i Kina som en tradisjonell medisinsk metode og er populær blant pasienter for sin effekt og færre bivirkninger. Tuinaterapi for muskel- og skjelettlidelser kan lindre smerter og forbedre funksjonen11,12,13. Mr. Ding Jifeng, en berømt Shanghai Tuina-utøver, grunnla Dings rullemetode14. Det er en unik rulle- og knuseteknikk med et stort kraftområde, jevn og mild kraft og intens penetrasjon.

Ulike dyremodeller er basert på forskjellige etiologier. De har fordeler og ulemper, og valg av riktige og hensiktsmessige dyremodeller er av stor betydning for grunnleggende eksperimenter, som bidrar til å forstå de cellulære og molekylære signalveiene for regenerering og reparasjon etter skjelettmuskelskade for å utvikle nye terapier for behandling av skjelettmuskelsykdommer. Kjemisk induserte modeller av muskelskade er mye brukt, med injeksjoner av skjelettmuskulatur som forårsaker myofibernekrose og produserer regenererte områder som effektivt kan regenerere innen 2 uker15. Både notexin og bupivakain kan forårsake muskelskader. Notexin kan imidlertid forårsake mer alvorlig myotoksisk skade på skjelettmuskulatur enn bupivakain, og naturlig funksjonell restitusjon er relativt langsommere16. Drug intramuskulær sprøytestøping tar ikke bare mindre tid, men har også kontrollerte effekter og omfang av skjelettmuskulaturskader. Denne kvantifiserbare kontrollen gjør vellykket støping mindre vanskelig15,17.

Inflammatorisk respons er en viktig biologisk respons som har blitt grundig studert i sammenheng med myopati18,19. I de tidlige stadiene av skjelettmuskelskade forstyrrer myofibernekrose lokal muskelhomeostase, og mange inflammatoriske celler infiltrerer skadestedet og utskiller mange proinflammatoriske cytokiner19. Kreatinkinase (CK) er en tradisjonell serumbiomarkør for vurdering av skjelettmuskelskade. Imidlertid mangler den vevsspesifisitet20 og sensitivitet21, noe som begrenser evnen til å vurdere omfanget av legemiddelindusert muskelskade og indirekte rapportere omfanget av muskelgjenoppretting etter skade. Nye biomarkører, inkludert fettsyrebindende protein 3 (FABP3), har nylig vist relativt høy vevsspesifisitet og følsomhet i gnagermodeller av skjelettmuskelskade. FABP3 er en familie av bindende proteiner uttrykt primært i hjerte- og skjelettmuskelceller og involvert i fettsyremetabolisme, transport og signalering22. Derfor valgte vi en kombinasjon av to biomarkører, CK og FABP3, for å vurdere omfanget av noteksinindusert skjelettmuskelskade og restitusjon etter behandling.

Hos gnagere er musklene grunne, og hudområdet er lite, noe som også bestemmer at de forskjellige parametrene for massasje hos gnagere ikke vil være de samme som hos mennesker, for eksempel i dyreterapi, bør massasjeterapeuten behandle dem med mindre kraft ved hjelp av Dings rullemetode, og kan ikke bidra til driften av denne teknikken på grunn av den lille størrelsen på det skadede området, som til slutt kan føre til en reduksjon i effektiviteten av massasjen. Derfor benyttet eksperimentet den rullende massøren laget internt, som samsvarer med egenskapene til Dings rullemetode, for å gripe inn og evaluere den terapeutiske effekten av den notexininduserte skjelettmuskelskademodellen hos rotter, noe som bidrar til å standardisere parametrene til Tuina i eksperimentelle dyreforsøk for å undersøke den molekylære virkningsmekanismen til Tuina, en tradisjonell kinesisk medisin behandlingsmetode, på muskuloskeletale sykdommer.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Prosedyrer som involverer dyr er godkjent av Institutional Care and Use Committee ved Hunan University of Chinese Medicine.

1. Montering av rullende massasjeapparat

  1. Velg en massasjeenhet som består av en gummirulle, gaffelholder, fjær, grensebaffel, justeringsskinne, skrue og akrylhåndtak (figur 1). Forsikre deg om at gummirullen måler 3 cm lang og 1,6 cm i diameter, fjæren måler 3 cm lang og 0,9 cm i diameter, grensebaffelen er 3 cm lang og 2 cm bred, og håndtaket måler 12 cm lang og 0,9 cm i diameter.
  2. Kraftkontroll: Ifølge litteraturresultatene23 ble Dings rullemetode nedadgående trykk funnet å være ca. 10% av kroppsvekten, så trykket som påføres under utformingen av fremoverrulling er ca. 10% av rottens kroppsvekt (0,2-0,3 N). Test massasjeenhetens maksimale trykk på veiekontrolleren til å være ca. 0,3 N ved å justere vinkelen på grensebaffelen. Dette trykkbehovet oppfyller rottens behov.
  3. Sørg for at minimumstrykket er ca. 0,08 N når du ruller tilbake (figur 2). Sørg for at trykket er nøyaktig i samsvar med kravet i Dings rullemetode om at forholdet mellom forover- og bakoverkreftene er 3:1.
  4. Før behandling, be operatøren om å jobbe med metronomprogramvaren for å kontrollere rullefrekvensen til 140 ruller / min og øve dette mer enn 3x i pre-eksperimentet for å sikre at operasjonen er standardisert.

2. Etablering av en rottemodell for skjelettmuskelskade

  1. Del tilfeldig 24 hannrotter, Sprague-Dawley-rotter (veier 200-250 g) i tre grupper på åtte rotter hver, inkludert kontroll (C), notexin (NTX) og notexin med Tuina (NTX + Tuina), og mate på en standard diett. Oppretthold på en 12 t lys / 12 h mørk syklus, hus ved 20-25 ° C og 50% -70% fuktighet.
  2. Bedøve med 1% pentobarbitalnatrium (40 mg / kg) ved intraperitoneal injeksjon og fjern deretter hår fra høyre underekstremitet med hårfjerningskrem. Etter å ha fjernet pelsen, tørk den resterende kremen med saltvann. Bekreft tilstrekkelig anestesi ved tåklemmerespons. Påfør oftalmisk salve for å fukte øynene mens dyret er under anestesi. Gi termisk støtte gjennom hele prosedyren.
  3. Alternativ huddesinfeksjon for høyre underekstremitet med iodophor desinfiserende løsning og 75% alkohol før injeksjon. Berør en bomullspinne gjennomvåt i iodophor desinfiserende løsning til midten av huden i underekstremiteten og påfør i en sirkulær bevegelse utover. Gjenta med en etanol-gjennomvåt bomullspinne.
  4. Etablere skjelettmuskelskademodeller i henhold til referansemetode24. Injiser notexin i bare ett ben (for å hindre dobbel notexin injeksjon). Trekk 200 μL notexinoppløsning (10 μg / ml notexinoppløsning fremstilt ved å tilsette 100 μg notexin til 10 ml normalt saltvann i et 15 ml sentrifugerør) i en 1 ml sprøyte med en 30G nål og injiser notexinoppløsningen intramuskulært inn i gastrocnemius-muskelen for å produsere muskelskade.
  5. Injiser notexinet langsomt og vent i 3 timer før kanylen trekkes ut (for å injiseres fullstendig).
    FORSIKTIG: Notexin er et giftig kjemikalie som krever umiddelbar skylling med rikelig med vann ved kontakt med et åpent sår og øyeblikkelig legehjelp om nødvendig.
  6. Injiser rottene i kontrollgruppen med 200 μL saltoppløsning. Flytt bedøvede rotter til tomme bur med rent sengetøy. Pass på å fjerne polstringen rundt rottenes nese og munn for å holde pusten klar. Visuelt observere vevsfarge og respirasjonsfrekvens på slutten av injeksjonen til rottene gjenvinne tilstrekkelig bevissthet.
  7. Returner rotter til hjemmeburet og oppdrett dem vanligvis i 24 timer.

3. Tuina terapi

  1. Plasser en SD-rotte i utsatt stilling med hodet dekket med en svart klut på den eksperimentelle plattformen desinfisert med 75% alkohol for å avsløre gastrocnemius-muskelen. Ikke dekk for tett.
  2. Bruke Tuina-massasjeenheten til NTX+Tuina-gruppen: Hold massasjeenheten og legg rullen på gastrocnemius-muskelen til rotta og rull fremover til våren kommer i kontakt med grensebaffelen. Trekk deretter kraften tilbake og gå tilbake til sin opprinnelige posisjon, og derved frem- og tilbakegående bevegelse (figur 3).
  3. Rull massasjeren med en hastighet på 140 ruller per min, og utfør hver operasjon i 3 minutter. Utfør massasjene en gang om morgenen og en gang om ettermiddagen i 3 påfølgende dager.
  4. Returner rotter til hjemmeburet etter hver behandling og faste i 8 timer etter siste behandling.

4. Innsamling av blod og vev fra rotter etter forsøket

  1. I henhold til kravene fra den relevante etiske komiteen for dyreforsøk, bedøves rotter ved intraperitoneal injeksjon av 1% pentobarbitalnatrium (40 mg/kg, intraperitoneal injeksjon). Bekreft tilstrekkelig anestesi ved tåklemmerespons. Avlive rotter ved abdominal aorta blodbad etter blodinnsamling.
  2. Alternativ hud desinfeksjon med iodophor desinfiserende løsning og 75% alkohol før injeksjon. Berør en bomullspinne gjennomvåt i povidon-jod til midten av bukhuden og påfør i en sirkulær bevegelse utover. Gjenta med en etanol-gjennomvåt bomullspinne. Gjenta desinfeksjon 3x.
  3. Be assistenten om å bruke to hemostater for å løfte huden midt i magen. Som operatør, bruk en skalpell for å skjære gjennom magehuden og musklene fra raphe til kjønnssymfysen.
  4. Etter å ha åpnet bukhulen, skille tarmen med sterile bomullsballer for å avsløre abdominal aorta i bakre bukvegg.
  5. Finn abdominal aorta, ta 5 ml rotteblod inn i blodoppsamlingsrør, og oppnå plasmaet i 1,5 mikrorør ved sentrifugering ved 3000 x g i 10 minutter etter stående blod i 1 time. Oppbevares i plasma ved -80 °C.
  6. Klipp opp huden med kirurgisk saks langs den nedre bukåpningen mot det laterale aspektet av høyre underekstremitet, utsett musklene i underekstremitetene, og etter forsiktig separering av fascia med tang, kutt skalpellen for å fjerne den intakte gastrocnemius-muskelen.
  7. Vask gastrocnemius-muskelen i steril saltoppløsning for å fjerne klebende hår og blod.
  8. Plasser den fjernede gastrocnemiusmuskelen i et 15 ml sentrifugerør inneholdende 4% paraformaldehyd.

5. Påvisning av plasma CK og FABP 3 nivåer av ELISA

  1. Beregn og bestem antall ferdigpakkede plater som kreves for ett eksperiment. Fjern de nødvendige platene, plasser dem i rammen med 96 brønner, legg de resterende mikroplatene tilbake i aluminiumsfolieposen for forsegling, og oppbevar dem ved 4 °C.
  2. Avkjøl settene og prøvene ved romtemperatur (25-28 °C) i 120 minutter, helt likevekt til romtemperatur.
    MERK: Likevekt av settet og prøven er kritisk og må likevektes til tilstrekkelig tid.
  3. Angi standard, prøve og tomme brønner. Tilsett 50 μL CK eller FABP3 standard ved forskjellige konsentrasjoner (100, 50, 25, 12,5, 6,25, 0 ng / ml) til standardbrønnene. Gjenta hver standard en gang, opptar totalt 12 brønner.
  4. Fyll prøvebrønner med 40 μL prøvefortynningsmiddel (0,8 g NaCl, 0,02 g KH 2 PO 4, 0,29 g Na 2 HPO 4 12H2O, 0,02 g KCl, 0,01 g NaN3i 100 ml dobbelt destillert vann, pH7,4), etterfulgt av 10 μL av prøven som skal testes. Gjenta hver prøve en gang, opptar 48 brønner totalt.
  5. Bortsett fra de tomme brønnene som ligger to brønner bak den siste prøvebrønnen, tilsett 100 μL HRP-merket anti-human CK eller FABP3 antistoff (enzymmerket antistoff) til hver standard og prøv godt.
  6. Forsegle brønnene med tetningsfilm og rug i et vannbad eller termostat på 37 °C i 60 minutter.
  7. Kast væsken, klapp tørk på absorberende papir, fyll hver brønn med vaskevæske, la stå i 20 s, rist av vaskevæsken, klapp tørr på blottpapir og gjenta å vaske tallerkenen 5x (eller bruk en tallerkenvasker).
  8. Tilsett 50 μL kromogenoppløsning A (20 mg tetrametylbenzidin 10 ml etanol i 100 ml dobbeltdestillert vann) og 50 μl kromogenoppløsning B (0,1 M/l sitronsyre, 0,2 M/l natriumdihydrogenfosfatbuffer, pH 5,0-5,4) til hver brønn. Holdes borte fra lys i 15 minutter ved 37 °C.
  9. For standardbrønner, prøvebrønner og blanke brønner, legg til 50 μL termineringsløsning til hver brønn, og mål den optiske tetthetsverdien for hver brønn til 450 nm innen 15 minutter.

6. Histologisk analyse av notexinindusert gastrocnemius muskelskade hos rotter

  1. Forbered 5 μm tykke parafinseksjoner farget med hematoksylin og eosin for lett mikroskopisk undersøkelse som beskrevet i25.

7. Bildebehandling og dataanalyse

  1. Les og analyser bildene som er tatt av bildesystemet med analyseprogramvare. Flytt det valgte bildesynsfeltet til midten av skjermen med musen, klikk 40x, og klikk deretter Ta øyeblikksbilde.
  2. Registrer OD-verdiene fra ELISA i et regneark og beregn rotte CK- og FABP3-nivåene i prøvene ved hjelp av standardkurven.
  3. Bruk statistisk analyseprogramvare for de statistiske analysene. Ekspress målinger som gjennomsnitt ± standardavvik (Equation 1), og analyser sammenligningene mellom grupper ved enveis ANOVA, med LSD-testen når variansen var jevn, og Tamhane T2-metoden når variansen ikke var jevn. Forskjellen ble ansett som statistisk signifikant ved en p-verdi mindre enn 0,05.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

For å observere de morfologiske egenskapene til rotteskjelettmuskulatur etter skade, ble gastrocnemiusmuskelen farget med hematoksylin og eosin, og de fargede bildene ble lest med et analyseprogram som beskrevet i protokollen for 8 rotter per gruppe. Hos rotter med gastrocnemius muskelskade indusert av notexin (NTX-gruppen) ble mange muskelceller sprukket, atrofiske, nekrotiske og uregelmessig arrangert. Det var også høy infiltrasjon av nøytrofile granulocytter og lymfocytter rundt affisert område (figur 4B). Etter Tuina-behandling med rullende massasjeapparat ble imidlertid den patologiske tilstanden til muskelceller i NTX + Tuina-gruppen forbedret, med færre rupturede, atrofiske og nekrotiske celler, og bare et lite antall inflammatoriske celler som infiltrerte sammenlignet med NTX-gruppen (figur 4C). I kontrollgruppen var muskelcellene hos rotter jevnt store, tett ordnet og uten inflammatorisk celleinfiltrasjon (figur 4A).

For ytterligere å bekrefte den terapeutiske effekten av Tuina på gastrocnemius-skade hos rotter som bruker Dings rullende massasjeapparat, brukte vi ELISA til å oppdage nivåene av skjelettmuskelskademarkører CK og FABP3 for 8 rotter per gruppe. Sammenlignet med kontrollgruppen var CK- og FABP3-nivåene signifikant økt i NTX-gruppen, og både CK- og FABP3-nivåene var markert redusert i NTX+Tuina-gruppen sammenlignet med NTX-gruppen (figur 5). Disse resultatene tyder på at injeksjon av notexin forårsaket alvorlig skade på gastrocnemiusmuskelen hos rotter, mens Tuina kan redusere denne skaden.

Figure 1
Figur 1: Rullende massasjeapparat, fysisk kart. Den består hovedsakelig av en gummirulle, gaffelholder, fjær, grensebaffel, justeringsskinne, skrue og akrylhåndtak. Skala bar = 1 cm. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Figure 2
Figur 2: Måling av rullende massørkraft. Maksimalt trykk for fremoverrulling er 0,3 N, og minimumstrykket er ca. 0,08 N når du ruller tilbake. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Figure 3
Figur 3: Tuinaterapi med rullende massasjeapparat. Plasser rullen på gastrocnemius-muskelen til rotta og rull fremover til fjæren kommer i kontakt med grensebaffelen, trekk deretter kraften tilbake og gå tilbake til sin opprinnelige posisjon, og derved frem- og tilbakegående bevegelsen. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Figure 4
Figur 4: Representative bilder av HE-farget tverrsnitt av rotte gastrocnemius muskel. (A) Gastrocnemiusmuskelen i kontrollgruppen rotter ble ikke signifikant skadet etter saltvannsinjeksjon. (B) Notexininjeksjon i gastrocnemiusmuskelen hos rotter i notexin (NTX) -gruppen forårsaket alvorlig muskelskade, noe som resulterte i myocyttatrofi, nekrose og varierende størrelser, ledsaget av en massiv infiltrasjon av nøytrofiler og lymfocytter. (C) Gastrocnemius muskelskade ble svekket i notexin og Tuina (NTX + Tuina) gruppen av rotter, og antall atrofiske og nekrotiske myocytter, nøytrofiler og lymfocytter ble redusert. Skala bar = 100 μm. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Figure 5
Figur 5: CK- og FABP3-uttrykk. Plasma ble høstet etter at Tuina var fullført, og konsentrasjonene av CK og FABP3 i plasma hos rotter i kontroll (C), noteksin (NTX) og noteksin og tuina (NTX+Tuina) ble detektert av ELISA. *P < 0,05, **P < 0,01 ved bruk av enveis ANOVA med post-hoc LSD-test. Verdier er gjennomsnittlige ± SEM, n = 8 i alle grupper. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Her beskrev vi en protokoll for Tuina-behandling av skjelettmuskelskade hos rotter og analyserte deretter graden av skjelettmuskelskade etter behandling for å verifisere effektiviteten av metoden. Spesielt kan modeller for skjelettmuskelskader hos rotter, inkludert, men ikke begrenset til, legemiddelinduksjon (notexin, bupivakain)16, stump kontusjon 26, knus 27 og iskemi-reperfusjon28, interveneres med Tuina. Gjennom HE-farging for å observere histopatologiske forandringer og ELISA-deteksjon for å bestemme markørene for skjelettmuskelskade, er det intuitivt vist at notexinet forårsaker alvorlig skade på gastrocnemiusmuskelen hos rotter, mens massasjeenheten som simulerer Dings rullemetode kan redusere muskelskaden. Disse gir overbevisende bevis for effektiviteten av Tuina i behandling av skjelettmuskulaturskader.

Det er flere nødvendige prosedyrer som bør vurderes når du utfører Tuina på rotter som etterligner Dings rullemetode. Før behandlingen bør Tuina-operatøren på forhånd få opplæring i å bruke rullemassøren minst 3x, justere vinkelen på lydskjermen ved hjelp av trykksensoren for riktig kraftkontroll, og å kontrollere frekvensen til Tuina ved 140 ruller/min. I mellomtiden må du holde rottene stille ved å dekke hodet med en svart bandana uten å være unødig stram for å sikre at de kan puste fritt. Hvis rotta plutselig sliter med å være aktiv i Tuina-prosessen, vent til det er stille før du fortsetter Tuinaen.

Begrensningen av dette eksperimentet er at denne massasjeren er egnet for rotter i stedet for mindre dyr, som mus. For andre dyr enn rotter kan noen instrumentkonfigurasjoner endres. Slik som størrelsen på rullene, vinkelen på baffelen, fjærens styrke og naturligvis må trykksensoren brukes til å teste rullekraften. Vi har bare laget en Tuina-massasje som simulerer Dings rullemetode her. Imidlertid, som en ikke-farmakologisk terapi av tradisjonell kinesisk medisin, er det forskjellige Tuina-manipulasjoner, for eksempel å skyve, fukte, presse og elte. Alle disse manipulasjonene kan gjøres i henhold til driftsparametrene til relevante berømte Tuina-mestere for å produsere et instrument som er mer egnet for dyreforsøk for å standardisere eksperimentell operasjon og la eksperimentelle resultater være mer nøyaktige og troverdige.

Avslutningsvis gir vi en detaljert beskrivelse av produksjonsmetoden til rullemassøren som effektivt simulerer Dings rullemetode under dyreforsøk. Massasjeren har betydelig terapeutisk effekt på skjelettmuskelskade hos rotter og legger grunnlaget for videre forskning på standardisering av tunina.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ingenting å avsløre.

Acknowledgments

Denne forskningen ble støttet av tilskudd fra National Natural Science Foundation of China (Grant Nos.82174521), Innovasjonsprosjekt for studenter ved Hunan University of Chinese Medicine (2022CX109)

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1 mL syringe JIANGXI FENGLIN 20220521
1.5 microtubes  Servicebio EP-150X-J
15 mL centrifuge tube Servicebio EP-1501-J
30G needle CONPUVON 220318
5 mL blood collection tube Servicebio QX0023
Acrylic handle Guangdong Guangxingwang Plastic Materials Co., Ltd 65643645
Adjustment splint CREROMEM 20220729
Cotton Swab INOHV 22080215
Enzyme-labeled Instrument Rayto RT-6100 
Ethanol INOHV 211106
Fork holder Yongkang Kangzhe Health Technology Co., Ltd JL001
Hair removal cream Veet, France LOTC190922002
Hematoxylin dyeing solution set Wuhan Google Biotech G1005
Imaging system  Nikon, Japan Nikon DS-U3
IODOPHOR disfecting solution Hale&Hearty 20221205
Light microscope Nikon, Japan Nikon Eclipse E100
Limit baffle CREROMEM 20220724
Notexin Latoxan S.A.S. L8104-100UG
Pentobarbital sodium Merck KGaA P3761
Rat creatine kinase (CK) ELISA kit LunChangShuoBiotech YD-35237
Rat fatty acid-binding protein 3 (FABP3) ELISA kit LunChangShuoBiotech YD-35730
Rubber roller Hebei Mgkui Chemical Technology Co.,Ltd 202207
Screw Weiyan Hardware B05Z122
Sprague Dawley rats Hunan Slake Kingda Laboratory Animal Co. SYXK2019-0009
Spring Bingzhang Hardware TH001
Surgical blade Covetrus #23
Weigh controller Iyoys HY-XSQ

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Lempainen, L., et al. Management of anterior thigh injuries in soccer players: practical guide. BMC Sports Science, Medicine and Rehabilitation. 14 (1), 41 (2022).
  2. Bayer, M. L., Mackey, A., Magnusson, S. P., Krogsgaard, M. R., Kjær, M. Treatment of acute muscle injuries (in Danish). Ugeskrift for Laeger. 181 (8), V11180753 (2019).
  3. Serner, A., et al. Progression of Strength, Flexibility, and Palpation Pain During Rehabilitation of Athletes with Acute Adductor Injuries: A Prospective Cohort Study. The Journal of Orthopaedic and Sports Physical Therapy. 51 (3), 126-134 (2021).
  4. Gozubuyuk, O. B., Koksal, C., Tasdemir, E. N. Rehabilitation of a patient with bilateral rectus abdominis full thickness tear sustained in recreational strength training: a case report. Physiotherapy Theory and Practice. 38 (13), 3216-3225 (2022).
  5. Hotfiel, T., et al. Current Conservative Treatment and Management Strategies of Skeletal Muscle Injuries. Zeitschrift für Orthopädie und Unfallchirurgie. 154 (3), 245-253 (2016).
  6. de Sire, A., et al. Pharmacological Treatment for Acute Traumatic Musculoskeletal Pain in Athletes. Medicina. 57 (11), 1208 (2021).
  7. Connor, D. E., et al. Therapeutic potential of exosomes in rotator cuff tendon healing. Journal of Bone and Mineral Metabolism. 37 (5), 759-767 (2019).
  8. Martins, A. L. L., Giorno, L. P., Santos, A. R. Jr Tissue Engineering Applied to Skeletal Muscle: Strategies and Perspectives. Bioengineering. 9 (12), 744 (2022).
  9. Horgan, D., et al. Clouds across the new dawn for clinical, diagnostic and biological data: accelerating the development, delivery and uptake of personalized medicine. Diagnosis. , (2023).
  10. Urits, I., et al. A Comprehensive Review of Alternative Therapies for the Management of Chronic Pain Patients: Acupuncture, Tai Chi, Osteopathic Manipulative Medicine, and Chiropractic Care. Advances in Therapy. 38 (1), 76-89 (2021).
  11. Lee, N. W., et al. Chuna (or Tuina) Manual Therapy for Musculoskeletal Disorders: A Systematic Review and Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2017, 8218139 (2017).
  12. Xie, J., Deng, D. X., Chen, Y., Peng, L. Progress in the intervention of massage techniques on skeletal muscle injury. Hunan Journal of Traditional Chinese Medicine. 34 (04), 199-201 (2018).
  13. Yuan, Y., Zhang, H., Zhang, G. H., Xue, X. N. Research progress on microstructure changes and rehabilitation treatment of exercise-induced skeletal muscle injury. Massage and Rehabilitation Medicine. 14 (6), 29-33 (2023).
  14. Zhao, Y. The Establishment of Famous Tuina Master Ding Jifeng and Wei Fa - Commemorating the 100th Anniversary of Mr. Ding Jifeng's Birthday. Traditional Chinese Medicine Culture. 9 (6), 18-21 (2014).
  15. Hardy, D., et al. Comparative Study of Injury Models for Studying Muscle Regeneration in Mice. PloS one. 11 (1), e0147198 (2016).
  16. Plant, D. R., Colarossi, F. E., Lynch, G. S. Notexin causes greater myotoxic damage and slower functional repair in mouse skeletal muscles than bupivacaine. Muscle & Nerve. 34 (5), 577-585 (2006).
  17. Tierney, M. T., Sacco, A. Inducing and Evaluating Skeletal Muscle Injury by Notexin and Barium Chloride. Methods in Molecular Biology. 1460, 53-60 (2016).
  18. Torres-Ruiz, J., Alcalá-Carmona, B., Alejandre-Aguilar, R., Gómez-Martín, D. Inflammatory myopathies and beyond: The dual role of neutrophils in muscle damage and regeneration. Frontiers in Immunology. 14, 1113214 (2023).
  19. Tu, H., Li, Y. L. Inflammation balance in skeletal muscle damage and repair. Frontiers in Immunology. 14, 1133355 (2023).
  20. Castro, C., Gourley, M. Diagnosis and treatment of inflammatory myopathy: issues and management. Therapeutic Advances in Musculoskeletal Disease. 4 (2), 111-120 (2012).
  21. Dabby, R., et al. Asymptomatic or minimally symptomatic hyperCKemia: histopathologic correlates. The Israel Medical Association Journal: IMAJ. 8 (2), 110-113 (2006).
  22. Khodabukus, A., et al. Tissue-Engineered Human Myobundle System as a Platform for Evaluation of Skeletal Muscle Injury Biomarkers. Toxicological Sciences. 176 (1), 124-136 (2020).
  23. Zhou, X. W., Jin, W. D., Zhu, L., Liu, X. H., Zhou, B. H. Experimental observation on the influence of different frequency, intensity and action time of Ding rolling manipulation on hemodynamics. Shanghai Journal of Traditional Chinese Medicine. (06), 42-44 (1998).
  24. Pablos, A., et al. Protective Effects of Foam Rolling against Inflammation and Notexin Induced Muscle Damage in Rats. International Journal of Medical Sciences. 17 (1), 71-81 (2017).
  25. Wisner, L., Larsen, B., Maguire, A. Enhancing Tumor Content through Tumor Macrodissection. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (180), e62961 (2022).
  26. Deng, P., et al. Contusion concomitant with ischemia injury aggravates skeletal muscle necrosis and hinders muscle functional recovery. Experimental Biology and Medicine. 247 (17), 1577-1590 (2022).
  27. Dobek, G. L., Fulkerson, N. D., Nicholas, J., Schneider, B. S. Mouse model of muscle crush injury of the legs. Comparative Medicine. 63 (3), 227-232 (2013).
  28. Armstrong, D. M., et al. Sildenafil citrate protects skeletal muscle of ischemia-reperfusion injury: immunohistochemical study in rat model. Acta Cirúrgica Brasileira. 28 (4), 282-287 (2013).

Tags

Etterligning av Dings rullemetode Notexin-indusert muskelskade kinesisk massasje Tuina-manipulasjon rullemetode terapeutiske effekter myopati forsøksdyr rotter kaniner betennelsesdempende blodsirkulasjon massasjeapparat manipulasjonsparametere styrke frekvens tuninavarighet rottemodell skjelettmuskelskade plasmaskademarkører kreatinkinase (CK) fettsyrebindende protein 3 (FABP3) terapeutisk effekt
Etterligner Dings rullemetode på Notexin-indusert muskelskade hos rotter
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Huang, B., Ruan, L., Wang, L., Xue,More

Huang, B., Ruan, L., Wang, L., Xue, H., Sun, M., Duan, M., Peng, L. Mimicking Ding's Roll Method on Notexin-Induced Muscle Injury in Rats. J. Vis. Exp. (198), e65820, doi:10.3791/65820 (2023).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter