Summary
विटेरोरेटिनल लिंफोमा के निदान के लिए आणविक अध्ययन करने के लिए कांच और जलीय हास्य से सेल-मुक्त डीएनए निकालने की एक प्रक्रिया यहां स्थापित की गई है। विधि नमूने के सेलुलर घटक से डीएनए को समवर्ती रूप से निकालने या सहायक परीक्षण के लिए इसे आरक्षित करने की क्षमता प्रदान करती है।
Abstract
विटेरोरेटिनल लिंफोमा (वीआरएल) एक आक्रामक लिंफोमा का प्रतिनिधित्व करता है, जिसे अक्सर प्राथमिक केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के रूप में वर्गीकृत किया जाता है जो बड़े बी-सेल लिंफोमा को फैलाता है। वीआरएल का निदान करने के लिए, कांच के हास्य और हाल ही में, जलीय हास्य जैसे नमूने एकत्र किए जाते हैं। इन नमूनों पर वीआरएल के लिए नैदानिक परीक्षण में कोशिका विज्ञान, प्रवाह साइटोमेट्री और आणविक परीक्षण शामिल हैं। हालांकि, सेलुलर डीएनए का उपयोग करके आणविक परीक्षण के साथ-साथ साइटोपैथोलॉजी और प्रवाह साइटोमेट्री दोनों को बरकरार पूरे कोशिकाओं की आवश्यकता होती है। चुनौती इस तथ्य में निहित है कि कांच और जलीय हास्य में आमतौर पर कम सेल्युलरिटी होती है, और संग्रह, भंडारण और प्रसंस्करण के दौरान कई कोशिकाएं नष्ट हो जाती हैं। इसके अलावा, ये नमूने कांच के हास्य की उच्च चिपचिपाहट और कांच और जलीय हास्य दोनों की कम मात्रा के कारण आणविक परीक्षण के लिए अतिरिक्त कठिनाइयों का सामना करते हैं। यह अध्ययन कांच और जलीय नमूनों से सेल-मुक्त डीएनए निकालने के लिए एक विधि का प्रस्ताव करता है। यह दृष्टिकोण सेलुलर डीएनए के निष्कर्षण का पूरक है या इन नमूनों के सेलुलर घटक को कोशिका विज्ञान और प्रवाह साइटोमेट्री सहित अन्य नैदानिक विधियों के लिए उपयोग करने की अनुमति देता है।
Introduction
विटेरोरेटिनल लिंफोमा (वीआरएल) एक आक्रामक लिंफोमा है जो प्राथमिक केंद्रीय तंत्रिका तंत्र फैलाना बड़े बी-सेल लिंफोमा 1,2,3 से जुड़ा है। वीआरएल आमतौर पर केंद्रीय तंत्रिका तंत्र 1,2 में शामिल होने के कारण घातक है। हालांकि दुर्लभ1,4, वीआरएल अक्सर पश्चवर्ती यूवेइटिस और अन्य विटेरोरेटिनल रोगों 4,5 के समान लक्षणों के साथ प्रस्तुत करता है। नतीजतन, यूवाइटिस के लक्षणों का प्रदर्शन करने वाले रोगियों को वीआरएल की पुष्टि या शासन करने के लिए निदान की आवश्यकता होती है।
हाल ही में, वीआरएल के निदान के लिए सर्वसम्मति मानदंड प्रकाशित किए गए थे, जिसमें नैदानिक परीक्षा औरप्रयोगशाला निष्कर्षों का संयोजन शामिल है। आमतौर पर वीआरएल का निदान करने के लिए उपयोग किए जाने वाले नमूनों में कांच का हास्य और, हाल ही में, जलीय हास्य7 शामिल हैं। कांच का हास्य पार्स प्लाना विट्रोक्टोमी नामक एक शल्य प्रक्रिया के माध्यम से प्राप्त किया जाता है, जो आंख के पीछे के खंड तक पहुंच की अनुमति देता है8.
प्रस्तुत प्रोटोकॉल में, दोनों जलीय हास्य और कांच का हास्य नमूने सेलुलर और cfDNA निष्कर्षण के लिए एकत्र किए गए थे. रोगियों को एनेस्थेटाइज़ करने और कॉर्नियल लिंबस से लगभग 4 मिमी ट्रोकार्स रखने के बाद, कॉर्नियल लिंबस में 1 एमएल ट्यूबरकुलिन सिरिंज का उपयोग करके लगभग 100-200 माइक्रोन का एक जलीय हास्य नमूना प्राप्त किया गया था। स्यूडोफैकिक रोगियों के लिए, जलसेक में बाँझ हवा को पेश करके undiluted vitreous प्राप्त किया गया था, जिससे बड़ी मात्रा में undiluted vitreous (3.5 mL तक) का संग्रह सक्षम हो गया। फाकिक रोगियों में, संतुलित नमक समाधान के जलसेक को चालू करने से पहले लगभग 500 से 1000 माइक्रोन undiluted vitreous को हटा दिया गया था। कुछ मामलों में, द्वितीयक रूप से पतला कांच का (500 से 2,000 μL) जलसेक को तरल पदार्थ में बदलकर और इस नमूने को प्राप्त करने के लिए विट्रेक्टर को कांच की स्कर्ट के भीतर रखकर एकत्र किया गया था। सर्जरी के अंत में कैसेट बैग (पूरक चित्रा 1) को संरक्षित करके सबसे पतला कांच का अंश एकत्र किया गया था। एक बार जब यह बैग पैथोलॉजी विभाग में पहुंच गया, तो बाद में डीएनए निष्कर्षण के लिए शंक्वाकार ट्यूबों में इस बैग से तरल पदार्थ निकालने से पतला कांच प्राप्त किया गया।
कांच के तरल पदार्थ के साइटोपैथोलॉजी को अक्सर स्वर्ण मानक9 माना जाता है। हालांकि, कई अध्ययनों ने प्रसंस्करण और न्यूनतम सेल्युलरता10,11,12 के कारण सीमित संवेदनशीलता का प्रदर्शन किया है। फ्लो साइटोमेट्री क्लोनल बी-कोशिकाओं की पहचान करने में सहायता कर सकती है, लेकिन कम सेल्युलरिटी और बड़े लिम्फोमा कोशिकाओं की नाजुकता13,14,15द्वारा भी सीमित किया जा सकता है। साइटोपैथोलॉजी और फ्लो साइटोमेट्री दोनों को बरकरार पूरे कोशिकाओं की आवश्यकता होती है। इनमें से कई कोशिकाएं संग्रह, भंडारण और प्रसंस्करण के दौरान नष्ट हो जाती हैं। जब आणविक परीक्षण बरकरार कोशिकाओं (सेलुलर डीएनए) से निकाले गए डीएनए का उपयोग करके किया जाता है, तो यह इसी सीमा से ग्रस्त होता है। इसके अलावा, इन सभी परीक्षणों के लिए सीमित कांच के नमूने को विभाजित करने से प्रत्येक परीक्षण के लिए उपलब्ध सामग्री की मात्रा कम हो जाती है।
सेल-फ्री डीएनए (सीएफडीएनए) डीएनए के एक अन्य स्रोत का प्रतिनिधित्व करता है जिसे बरकरार कोशिकाओं की आवश्यकता नहीं होती है। कांच के नमूनों से cfDNA वीआरएल 16,17 के साथ-साथ यूवील मेलेनोमा18 का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया गया है। इस प्रोटोकॉल में, सेलुलर और सेल मुक्त डीएनए वीआरएल का पता लगाने के लिए कांच और जलीय तरल पदार्थ से निकाला जाता है।
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Protocol
वर्तमान प्रोटोकॉल मानव देखभाल दिशानिर्देशों का पालन करता है और मिशिगन विश्वविद्यालय के संस्थागत समीक्षा बोर्ड (आईआरबी) के अनुमोदन के साथ। आईआरबी से इसके लिए सूचित सहमति की छूट प्राप्त की गई थी। शामिल रोगियों के लिए कोई प्रासंगिक समावेश या बहिष्करण मानदंड नहीं हैं।
1. सेलुलर और सेल मुक्त घटकों का पृथक्करण
नोट: वीआरएल नैदानिक परीक्षण के लिए तीन प्रकार के नमूने प्राप्त किए जा सकते हैं: कांच का (undilute; जलसेक शुरू करने से पहले एकत्र किए गए विट्रोक्टोमी से तरल पदार्थ), एक कैसेट बैग (चित्रा 1) के भीतर पतला कांच का, और जलीय हास्य (आंख के पूर्वकाल कक्ष से तरल पदार्थ)।
- undiluted कांच का तरल पदार्थ के लिए, जो बहुत चिपचिपा है, पाइपिंग की सुविधा के लिए 3-5 एमएल पीबीएस के साथ पतला।
- कैसेट बैग (पूरक चित्रा 1) के भीतर पतला कांच के लिए, 50 एमएल शंक्वाकार ट्यूबों (तरल पदार्थ के प्रत्येक 45 एमएल के लिए एक) में तरल पदार्थ नाली।
- जलीय हास्य मात्रा में बहुत कम है (<200 μL)। कोशिकाओं की अधिकतम वसूली सुनिश्चित करने के लिए, नमूना को 1.5 एमएल ट्यूब में स्थानांतरित करें, मूल 500 माइक्रोन माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब को कुल्ला नमूना पीबीएस की बराबर मात्रा के साथ एकत्र किया गया था, और 1.5 एमएल ट्यूब में जोड़ें।
- कमरे के तापमान पर 15 मिनट के लिए 3,000 x ग्राम पर अपकेंद्रित्र कांच का या जलीय द्रव।
- ध्यान से एक विंदुक का उपयोग सतह पर तैरनेवाला हटा दें, सावधान किया जा रहा है कि गोली कोशिकाओं को परेशान न करें।
2. सेलुलर घटक से डीएनए निष्कर्षण
- सेल lysis समाधान की एक उचित राशि जोड़ें (छोटे गोली के लिए 300 माइक्रोन, बड़ी गोली के लिए 1 एमएल या अधिक) ( सामग्री की तालिकादेखें). ऊपर और नीचे पाइप करके मिलाएं।
- जब पूरी तरह से lysed है, प्रोटीन अवक्षेप समाधान (300 μL lysate के लिए 100 माइक्रोन) ( सामग्री की तालिकादेखें) की कुल मात्रा जोड़ें.
- भंवर 20-30 एस के लिए जोरदार। कमरे के तापमान पर 3,000 x ग्राम पर 3 मिनट के लिए स्पिन करें।
- एक साफ माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब में आइसोप्रोपेनॉल के पिपेट 300 माइक्रोन। ध्यान से isopropanol ट्यूब के लिए पिछले कदम से सतह पर तैरनेवाला विंदुक.
- एमएल ग्लाइकोजन (300 माइक्रोन लाइसिस के लिए) ( सामग्री की तालिकादेखें) के 1.5 माइक्रोन जोड़ें।
- उलटा द्वारा अच्छी तरह से मिलाएं, तो डीएनए वर्षा में सहायता के लिए रात भर के लिए 1 घंटे के लिए एक -20 डिग्री सेल्सियस फ्रीजर में नमूना जगह.
- कमरे के तापमान पर 3,000 x ग्राम पर 5 मिन के लिए 1.5 एमएल ट्यूब को सेंट्रीफ्यूज करें। आइसोप्रोपेनॉल से पिपेट।
- 70% इथेनॉल के 0.5 एमएल जोड़ें और गोली धोने के लिए ट्यूब पलटना.
- कमरे के तापमान पर 3,000 x ग्राम पर 1 मिनट के लिए स्पिन करें और इथेनॉल को छान लें। एक बार इथेनॉल धोने दोहराएं।
- समाधान को निकालने के लिए साफ धुंध पर ट्यूब को उल्टा करें और गोली या छानने के लिए सुखाएं। जल्दी से एक microcentrifuge में डीएनए स्पिन और विंदुक एक ठीक टिप डिस्पोजेबल पिपेट टिप के साथ इथेनॉल की शेष बूंद (एक बार कोई अवशिष्ट इथेनॉल ट्यूब में छोड़ दिया है, डीएनए सूखी और 5-10 मिनट में हाइड्रेट करने के लिए तैयार होना चाहिए).
- सूखे डीएनए गोली के लिए डीएनए जलयोजन समाधान ( सामग्री की तालिकादेखें) के 45 माइक्रोन जोड़ें.
- ट्यूब को 50 डिग्री सेल्सियस पर हीटिंग ब्लॉक में रखें और इसे 1-2 घंटे के लिए घुलनशील करने दें। हाइड्रेशन प्रक्रिया को तेज करने के लिए डीएनए को ऊपर और नीचे पिपेट करें।
नोट: अधिक डीएनए जलयोजन समाधान जोड़ें यदि नमूना बहुत चिपचिपा दिखाई देता है।
3. सेल मुक्त डीएनए निष्कर्षण
- चरण 1.5 से सतह पर तैरनेवाला की मात्रा परिवर्तनशील है. सतह पर तैरनेवाला के प्रत्येक मिलीलीटर के लिए कंडीशनिंग बफर ( सामग्री की तालिकादेखें) के 70 माइक्रोन जोड़ें।
- भंवर द्वारा मोतियों को अच्छी तरह मिलाएं। प्रसंस्करण करते समय मोतियों को साफ़ करने के 10 माइक्रोन जोड़ें <सेल मुक्त सतह पर तैरनेवाला के 14 एमएल, 20 माइक्रोन यदि प्रसंस्करण 14-40 एमएल।
- भंवर द्वारा नमूना / मनका मिश्रण अच्छी तरह मिलाएं। कमरे के तापमान पर 15 मिनट के लिए 3,000 x ग्राम पर अपकेंद्रित्र।
- गोली को परेशान किए बिना, 100 माइक्रोन के पीछे छोड़ने वाले सतह पर तैरनेवाला को विंदुक बाहर निकालें यदि समाशोधन मोतियों के 10 माइक्रोन का उपयोग किया जाता है, और 200 माइक्रोन यदि समाशोधन मोतियों के 20 माइक्रोन का उपयोग किया जाता है।
- मूत्र गोली पाचन बफर की एक बराबर मात्रा जोड़ें ( सामग्री की तालिकादेखें) गोली करने के लिए और भंवर या pipetting द्वारा गोली अच्छी तरह से resuspend.
- पुन: निलंबित गोली में प्रोटीनेज के (5% (वी/वी)) जोड़ें (उदाहरण के लिए, प्रोटीनेज के 10 माइक्रोन को 200 माइक्रोन मिश्रण में जोड़ें) और कोमल भंवर द्वारा अच्छी तरह मिलाएं।
- 30 मिनट के लिए 55 डिग्री सेल्सियस पर गोली मिश्रण सेते हैं.
- पाचन मिश्रण में जीनोमिक लाइसिस बफर (सामग्री की तालिकादेखें) की एक मात्रा जोड़ें (उदाहरण के लिए, पाचन मिश्रण के 210 माइक्रोन से 210 माइक्रोन जीनोमिक लाइसिस बफर) और भंवर द्वारा मिलाएं।
- व्यावसायिक रूप से उपलब्ध स्पिन कॉलम ( सामग्री की तालिकादेखें) को एक नए संग्रह ट्यूब में स्थानांतरित करें।
- स्पिन कॉलम में मूत्र डीएनए तैयारी बफर के 200 माइक्रोन जोड़ें, कमरे के तापमान पर 1 मिनट के लिए ≥ 16,000 x ग्राम पर अपकेंद्रित्र, और प्रवाह के माध्यम से त्यागें।
- स्तंभ में मूत्र डीएनए धोने बफर के 700 माइक्रोन जोड़ें, कमरे के तापमान पर 1 मिनट के लिए ≥ 16,000 x ग्राम पर अपकेंद्रित्र और प्रवाह के माध्यम से त्यागें।
- 200 माइक्रोन मूत्र डीएनए धोने बफर के साथ कदम दोहराएँ.
- स्पिन कॉलम को DNase/RNase-मुक्त माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब में स्थानांतरित करें।
- सीधे कॉलम मैट्रिक्स पर डीएनए क्षालन बफर (आणविक परीक्षणों के आधार पर) की उचित मात्रा जोड़ें और इसे कमरे के तापमान पर 3-5 मिनट के लिए खड़े होने दें।
नोट: उदाहरण के मामलों में क्षालन बफर के 30 माइक्रोन का उपयोग किया गया था। अतिरिक्त परीक्षण की आवश्यकता होने पर अधिक क्षालन बफर का उपयोग किया जाता है। - सेल मुक्त डीएनए प्राप्त करने के लिए 1 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर ≥ 16,000 x ग्राम पर अपकेंद्रित्र।
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Representative Results
इन निष्कर्षण विधियों को कांच (चार) और जलीय (चार) नमूनों से सेलुलर डीएनए की तुलना में सेल-मुक्त डीएनए की पर्याप्त उपज और प्रवर्धन सुनिश्चित करने के लिए सीमित संख्या में मामलों पर प्रदर्शन किया गया था। इन नमूनों से, इन तरल पदार्थों के सेल-मुक्त घटक से डीएनए पैदावार सेलुलर घटक(तालिका 1)के समान होती है। इन नमूनों से सेलुलर और cfDNA का मूल्यांकन आणविक परीक्षण का उपयोग करके भी किया गया था, जैसे कि VRL से जुड़े उत्परिवर्तन MYD88 L265P के लिए। MYD88 L265P (चित्र 1) के लिए एक एलील-विशिष्ट रीयल-टाइम पीसीआर सेलुलर डीएनए और सीएफडीएनए दोनों में इस वीआरएल-जुड़े उत्परिवर्तन का पता लगाने को दर्शाता है। इस उदाहरण में, सेल-मुक्त घटक में बीमारी का बोझ अधिक प्रतीत होता है, जैसा कि कम (चक्र थ्रेशोल्ड (सीटी) द्वारा दिखाया गया है। ये आंकड़े बताते हैं कि इस पद्धति का उपयोग करके कांच और जलीय हास्य से निकाले गए सीएफडीएनए के परिणामस्वरूप डीएनए का एक स्रोत होता है जिसे नैदानिक आणविक परीक्षण पर भी लागू किया जा सकता है।
चित्र 1: MYD88 L265P एलील-विशिष्ट रीयल-टाइम पीसीआर। सेलुलर और सेल-मुक्त डीएनए के लिए MYD88 L265P एलील-विशिष्ट रीयल-टाइम पीसीआर दिखा रहा प्रतिनिधि प्रवर्धन प्लॉट (प्रत्येक पीसीआर प्रतिक्रिया डुप्लिकेट में की गई)। चक्र थ्रेशोल्ड (सीटी) के लिए दहलीज हरी रेखा द्वारा इंगित की जाती है। जिन बिंदुओं पर सीएफडीएनए (नीले और भूरे रंग के निशान) और सेलुलर डीएनए (लाल और हरे निशान) का प्रवर्धन - प्रत्येक डुप्लिकेट में किया जाता है - दहलीज तक पहुंचता है। पृष्ठभूमि प्रतिदीप्ति 1.00e-003 के पास मौजूद है। सेल-मुक्त घटक में एक उच्च उत्परिवर्तन बोझ मौजूद है, जैसा कि कम सीटी द्वारा प्रदर्शित किया गया है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
| कोशिका-निर्मित | सेल मुक्त | |
| कांच का 1 | 130.5 | 67.5 |
| कांच का 2 | 337.5 | 105 |
| कांच का 3 | 150 | 168 |
| कांच का 4 | 1816 | 654 |
| जलीय 1 | 58.5 | 40.5 |
| जलीय 2 | 153 | 225 |
| जलीय 3 | 117 | 454.5 |
| जलीय 4 | टीएल | 27 |
तालिका 1: सेलुलर और सेल मुक्त डीएनए निष्कर्षण पैदावार। फ्लोरोमेट्रिक डीएनए मात्रा के आधार पर चार अलग-अलग व्यक्तियों से चार undiluted vitreous और चार जलीय हास्य (पूर्वकाल कक्ष) तरल पदार्थ के लिए डीएनए उपज (एनजी में)। TL = मात्रा निर्धारित करने के लिए बहुत कम।
पूरक चित्रा 1: कांच का कैसेट बैग। कांच का कैसेट बैग का उदाहरण जिसमें पतला कांच का तरल पदार्थ होता है। कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.
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Discussion
विटेरोरेटिनल लिंफोमा (वीआरएल) एक आक्रामक बड़े बी-सेल लिंफोमा 1,2,3 है जिनके लक्षण अन्य विटेरोरेटिनल रोगों की नकल कर सकते हैं 4,5. कांच का आणविक परीक्षण और, हाल ही में, जलीय हास्य वीआरएल का निदान करने या इसे खारिज करने के लिए एक महत्वपूर्ण तरीका बन गया है। हालांकि, ये तरल पदार्थ मात्रा में बहुत कम होते हैं और अक्सर कम सेल्युलरिटी होती है। इन तरल पदार्थों के भीतर कोशिकाओं में से कई भी संग्रह, भंडारण, और13,14,15 प्रसंस्करण के दौरान क्षतिग्रस्त हो सकता है. नतीजतन, इन नमूनों से डीएनए की पैदावार अक्सर कम होती है। इसके अलावा, इन तरल पदार्थों से कोशिकाओं को साइटोपैथोलॉजी और प्रवाह साइटोमेट्री सहित अन्य नैदानिक विधियों के साथ साझा किया जाना चाहिए। इन तरल पदार्थों के भीतर सेल-फ्री डीएनए (सीएफडीएनए) डीएनए का एक और स्रोत प्रदान करता है जिसे बरकरार कोशिकाओं की आवश्यकता नहीं होती है।
यह प्रोटोकॉल कांच या जलीय द्रव के सेलुलर और सेल-मुक्त घटकों को अलग करता है। कांच का तरल पदार्थ पीबीएस के साथ पतला होता है ताकि इसकी चिपचिपाहट के कारण पाइपिंग को सक्षम किया जा सके। इस बहुत कम मात्रा वाले तरल पदार्थ की अधिकतम वसूली सुनिश्चित करने के लिए जलीय द्रव को संभाला जाता है।
इन दो घटकों के डीएनए पैदावार की तुलना से पता चलता है कि पर्याप्त अतिरिक्त न्यूक्लिक एसिड सेल-मुक्त घटक से प्राप्त किया जा सकता है। सीएफडीएनए का आणविक परीक्षण, जैसे कि MYD88 L265P एलील-विशिष्ट रीयल-टाइम पीसीआर, दर्शाता है कि वीआरएल को कांच और जलीय हास्य के साथ-साथ सेलुलर घटक के सेल-मुक्त घटक में भी पता लगाया जा सकता है। कई मामलों में, वीआरएल की सापेक्ष मात्रा सेलुलर (चित्रा 1) की तुलना में सेल-मुक्त घटक में अधिक है।
कांच और जलीय द्रव के सेल-मुक्त घटक का निष्कर्षण इन तरल पदार्थों के एक घटक के आणविक मूल्यांकन को सक्षम बनाता है जिसे अन्यथा त्याग दिया जाएगा। क्योंकि वीआरएल को सेलुलर और सेल-मुक्त घटकों में दर्शाया जाता है, सेलुलर डीएनए और सीएफडीएनए को इन सीमित नमूनों से उपलब्ध डीएनए को अधिकतम करने के लिए जोड़ा जा सकता है। वैकल्पिक रूप से, इन तरल पदार्थों के सेल-मुक्त घटक का उपयोग आणविक परीक्षण के लिए किया जा सकता है, और सेलुलर घटक का उपयोग परीक्षण के लिए किया जा सकता है जिसके लिए बरकरार कोशिकाओं, यानी साइटोपैथोलॉजी और प्रवाह साइटोमेट्री की आवश्यकता होती है। यह दृष्टिकोण प्रत्येक परीक्षण के लिए आवंटित किए जा रहे इन तरल पदार्थों के अलग-अलग एलिकोट से बच जाएगा जो वीआरएल का पता लगाने के लिए प्रत्येक परीक्षण की संवेदनशीलता से समझौता कर सकते हैं। कांच और जलीय नमूनों में इस विधि की सफलता को देखते हुए, आणविक परीक्षण के लिए उपलब्ध डीएनए की मात्रा को बढ़ाने के लिए यह विधि अन्य सीमित तरल पदार्थों में भी उपयोगी हो सकती है।
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Disclosures
लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।
Acknowledgments
टिमोथी डेनियल, एमएलएस (एएससीपी), एमबी, क्यूएलएस, और हेल्मुट वीगेलिन, एमएलएस (एएससीपी) हमारी प्रयोगशाला के भीतर इस निष्कर्षण विधि को स्थापित करने में सहायक थे।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2-Propanol (Isopropanol) | Fischer | A415-500 | |
| DNA Clean & Concentrator-10 | Zymo Research | D4011 | |
| DNA Clean & Concentrator-5 | Zymo Research | D4003 | |
| Gentra Puregene Cell Lysis Solution | Qiagen | 158906 | |
| Gentra Puregene DNA Hydration Solution | Qiagen | 158916 | |
| Gentra Puregene Protein Precipitation Solution | Qiagen | 158912 | |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Sigma | P-4417 | |
| Quick-DNA Urine Kit | Zymo Research | D3061 | Conditioning buffer; also includes clearing beads, Proteinase K and spin columns |
| Ultrapure Glycogen, 20 µg/µL (20 mg/mL) | Thermo Fisher/Invitrogen | 10814010 |
References
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