इस वीडियो और पूरक सामग्री में, हम पुरानी लिए एक प्रोटोकॉल दिखा<em> Vivo में</em> बरकरार मस्तिष्क की तैयारी thinned – खोपड़ी का उपयोग इमेजिंग.
Abstract
दो photon लेजर स्कैनिंग माइक्रोस्कोपी (2PLSM) का उपयोग vivo इमेजिंग में रहने वाले बरकरार मस्तिष्क कोशिकाओं और neuronal प्रक्रियाओं के अध्ययन की अनुमति देता है. यहाँ प्रस्तुत तकनीक सूक्ष्म वृक्ष के समान spines जो छोटे संरचनाओं कि CNS में postsynaptic उत्तेजक साइटों के बहुमत का प्रतिनिधित्व करते हैं रहे हैं पर नज़र रखने की अनुमति संकल्प के साथ कई बार अंक (पुरानी इमेजिंग) में मस्तिष्क के एक ही क्षेत्र के इमेजिंग की अनुमति देता है. स्पष्ट रूप से कई बार अंक पर ठीक cortical संरचनाओं को सुलझाने की क्षमता कई फायदे हैं, विशेष रूप से मस्तिष्क plasticity में जो synapses और सर्किट remodeling के morphological परिवर्तन मदद मिल सकती है अंतर्निहित तंत्र को समझाने के अध्ययन में. इस वीडियो और पूरक सामग्री में, हम बरकरार मस्तिष्क का उपयोग कर एक thinned – खोपड़ी तैयारी के vivo इमेजिंग में जीर्ण के लिए एक प्रोटोकॉल है दिखाते हैं . तैयारी thinned खोपड़ी एक न्यूनतम इनवेसिव दृष्टिकोण है, जो dura और / या प्रांतस्था संभावित क्षति से बचा जाता है, इस प्रकार एक भड़काऊ प्रतिक्रिया की शुरुआत को कम करने है. जब इस प्रोटोकॉल सही ढंग से किया जाता है, यह संभव है करने के लिए स्पष्ट रूप से समय की एक लम्बी अवधि में बरकरार मस्तिष्क में वृक्ष के समान रीढ़ की विशेषताओं में परिवर्तन की निगरानी.
Protocol
बरकरार दो photon माइक्रोस्कोपी, एक तैयारी है जहां न्यूरॉन्स फ्लोरोसेंट मार्करों के साथ लेबल रहे हैं का उपयोग कर मस्तिष्क में न्यूरॉन्स की कल्पना प्रयोग किया जाता है. प्रयोगों में यहाँ प्रस्तुत हम GFP-M ट्रांसजेन?…
Discussion
जीर्ण दो photon माइक्रोस्कोपी का उपयोग इमेजिंग रूपात्मक plasticity 2-5 के दौरान ट्रिगर परिवर्तन के अध्ययन के लिए एक तेजी से लोकप्रिय तकनीक बनता जा रहा है. यहाँ हम एक thinned – खोपड़ी अलग इमेजिंग दिन पर बरकरार माउस मस…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम बायोमेडिकल साइंसेज (AKM) में Burroughs Wellcome कैरियर पुरस्कार द्वारा समर्थित किया गया था (, व्हाइटहॉल फाउंडेशन अनुसंधान अनुदान (AKM), स्लोअन फाउंडेशन फैलोशिप (AKM), एनआईएच EY019277 (AKM), और एक Nei वित्त पोषित, विजन प्रशिक्षण अनुदान, EY013319 EAK).
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Fentanyl Citrate
In-house pharmacy
Fentanyl Cocktail: Anesthesic Cocktail;
IP Dose: 0.0125 ml/g
Final cocktail conc.: 0.05 mg/kg
Medetomindine Hydrochloride
In-house pharmacy
Fentanyl Cocktail: Anesthesic Cocktail;
IP Dose: 0.0125 ml/g
Final cocktail conc.: 0.05 mg/kg
Midazolam HCL
In-house pharmacy
Fentanyl Cocktail: Anesthesic Cocktail;
IP Dose: 0.0125 ml/g
Final cocktail conc.: 0.05 mg/kg
2,2,2-tribromoethanol
Avertin Cocktail: Anesthetic;
IP Dose: 0.0075 cc/ g
Final cocktail conc.: 1%
2-methyl-2-butanol (Final concentration: 0.775%)
Avertin Cocktail: Anesthetic;
IP Dose: 0.0075 cc/ g
Final cocktail conc.: .775%
TC-1000 Temp. Control System for Mice
CWE, Inc.
TC-1000 Mouse
Body Temp. Regulation
Toberadex
In-house pharmacy
Eye Ointment
10% Ferric Chloride
Ricca Chemical, Inc.
3120-32
Thin-skull preparation
Microsurgical Blade
Sable Industries
S-6400
Thin-skull preparation
Cyanoacrylate 404,401
Loctite
P/N 46551
Thin-skull preparation
Cyanoacrylate 401
Loctite
P/N 40140
Thin-skull preparation
Zip Kicker Glue Accelerator
Pacer Technology
PT-29
Thin-skull preparation
Micro Drill Steel Burrs 0.7mm tip diameter
Fine Science Tools
19008-07
Thin-skull preparation
Microtorque Control Box and Tech2000 Handpiece
Ram Products, Inc.
TECH2000ON/OFF
Thin-skull preparation
#6-0 (0.7 metric ) silk suture
Ethicon
K8894H
Taper C-1
Eye Dressing Forceps, 10cm, tip width 0.5mm, curved
Surgical Tools
Fine Science Tools
11152-10
Extra Fine Bonn Scissors, 8.5cm, straight tip, cutting edge 13mm
Surgical Tools
Fine Science Tools
14084-08
Standard Pattern Forceps, straight, 2.5mmx1.35mmtip, 12cm
Kelly, E. A., Majewska, A. K. Chronic Imaging of Mouse Visual Cortex Using a Thinned-skull Preparation. J. Vis. Exp. (44), e2060, doi:10.3791/2060 (2010).