Summary

مزمنة التصوير ماوس القشرة البصرية باستخدام إعداد ضعفت - الجمجمة

Published: October 25, 2010
doi:

Summary

في هذا الفيديو والمواد التكميلية ، وتبين لنا بروتوكول للالمزمنة<em> في الجسم الحي</em> تصوير الدماغ سليمة باستخدام إعداد ضعفت – الجمجمة.

Abstract

المجراة في التصوير باستخدام اثنين من الفوتون المجهري المسح الضوئي ليزر (2PLSM) يسمح لدراسة الخلايا الحية وعمليات الخلايا العصبية في الدماغ سليمة. التقنية المقدمة هنا يسمح التصوير من نفس المنطقة من الدماغ في الوقت عدة نقاط (التصوير المزمنة) مع قرار السماح للالمجهرية تتبع في العمود الفقري شجيري التي هي هياكل الصغيرة التي تمثل الغالبية العظمى من المواقع مثير بعد المشبكي في الجهاز العصبي المركزي. القدرة على حل بوضوح الهياكل القشرية غرامة على نقاط عدة مرات العديد من المزايا ، وتحديدا في دراسة الدماغ في اللدونة التي تغيرات شكلية في نقاط الاشتباك العصبي ، وإعادة تشكيل الدوائر قد يساعد في تفسير الآليات الكامنة. في هذا الفيديو والمواد التكميلية ، وتبين لنا بروتوكول للمزمنة في الجسم الحي من تصوير الدماغ سليمة باستخدام إعداد ضعفت – الجمجمة. إعداد ضعفت – الجمجمة هو نهج مينيملي ، الذي يتجنب احتمال حدوث تلف و / أو قشرة الجافية ، وبالتالي تقليل ظهور رد فعل للالتهابات. عندما يتم تنفيذ هذا البروتوكول بشكل صحيح ، فمن الممكن لرصد التغيرات في الخصائص بوضوح شجيري العمود الفقري في الدماغ سليمة على مدى فترة طويلة من الزمن.

Protocol

لتصور الخلايا العصبية في الدماغ سليمة باستخدام اثنين من الفوتون المجهري ، والتحضير حيث وصفت الخلايا العصبية مع علامات الفلورسنت المستخدمة. في التجارب المقدمة هنا نستخدم الماوس المعدلة وراثيا GFP – M الذي تسميات خط طبقة الخلايا الهرمية 5 1. طبقة 5 خلاي…

Discussion

التصوير المزمنة باستخدام اثنين من الفوتون المجهري أصبحت تقنية شعبية متزايدة لدراسة التغيرات المورفولوجية أثار خلال اللدونة 2-5. هنا علينا أن نظهر استعدادا ضعفت – الجمجمة لمتابعة العمود الفقري شجيري التي تم تحديدها في مخ الفأر سليمة في أيام التصوير المختلفة. في …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

وأيد هذا العمل من قبل جائزة بوروز ويلكوم شهادة في العلوم الطبية الحيوية (AKM) ، ومؤسسة البحوث وايتهول غرانت (AKM) ، زمالة مؤسسة سلون (AKM) ، NIH EY019277 (AKM) ، وNEI الممولة ، والرؤية المنح التدريبية وEY013319 ( EAK).

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Fentanyl Citrate   In-house pharmacy   Fentanyl Cocktail: Anesthesic Cocktail;
IP Dose: 0.0125 ml/g

Final cocktail conc.: 0.05 mg/kg
Medetomindine Hydrochloride   In-house pharmacy   Fentanyl Cocktail: Anesthesic Cocktail;
IP Dose: 0.0125 ml/g

Final cocktail conc.: 0.05 mg/kg
Midazolam HCL   In-house pharmacy   Fentanyl Cocktail: Anesthesic Cocktail;
IP Dose: 0.0125 ml/g

Final cocktail conc.: 0.05 mg/kg
2,2,2-tribromoethanol       Avertin Cocktail: Anesthetic;
IP Dose: 0.0075 cc/ g

Final cocktail conc.: 1%
2-methyl-2-butanol (Final concentration: 0.775%)       Avertin Cocktail: Anesthetic;
IP Dose: 0.0075 cc/ g

Final cocktail conc.: .775%
TC-1000 Temp. Control System for Mice   CWE, Inc. TC-1000 Mouse Body Temp. Regulation
Toberadex   In-house pharmacy   Eye Ointment
10% Ferric Chloride   Ricca Chemical, Inc. 3120-32 Thin-skull preparation
Microsurgical Blade   Sable Industries S-6400 Thin-skull preparation
Cyanoacrylate 404,401   Loctite P/N 46551 Thin-skull preparation
Cyanoacrylate 401   Loctite P/N 40140 Thin-skull preparation
Zip Kicker Glue Accelerator   Pacer Technology PT-29 Thin-skull preparation
Micro Drill Steel Burrs 0.7mm tip diameter   Fine Science Tools 19008-07 Thin-skull preparation
Microtorque Control Box and Tech2000 Handpiece   Ram Products, Inc. TECH2000ON/OFF Thin-skull preparation
#6-0 (0.7 metric ) silk suture   Ethicon K8894H Taper C-1
Eye Dressing Forceps, 10cm, tip width 0.5mm, curved Surgical Tools Fine Science Tools 11152-10  
Extra Fine Bonn Scissors, 8.5cm, straight tip, cutting edge 13mm Surgical Tools Fine Science Tools 14084-08  
Standard Pattern Forceps, straight, 2.5mmx1.35mmtip, 12cm Surgical Tools Fine Science Tools 11000-12  

References

  1. Feng, G. Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP. Neuron. 28 (1), 41-51 (2000).
  2. Holtmaat, A. high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window. Nat Protoc. 4 (8), 1128-1144 (2009).
  3. Majewska, A. K., Newton, J. R., Sur, M. Remodeling of synaptic structure in sensory cortical areas in vivo. J Neurosci. 26 (11), 3021-3029 (2006).
  4. Mostany, R., Portera-Cailliau, C. A Craniotomy Surgery Procedure for Chronic Brain Imaging. J Vis Exp. , (2008).
  5. Yang, G. Thinned-skull cranial window technique for long-term imaging of the cortex in live mice. Nat Protocols. 5 (2), 201-208 (2010).
  6. Xu, H. T. Choice of cranial window type for in vivo imaging affects dendritic spine turnover in the cortex. Nat Neurosci. 10 (5), 549-551 (2007).

Play Video

Cite This Article
Kelly, E. A., Majewska, A. K. Chronic Imaging of Mouse Visual Cortex Using a Thinned-skull Preparation. J. Vis. Exp. (44), e2060, doi:10.3791/2060 (2010).

View Video