Fare Visual Cortex İnceltilen kafatası Hazırlık Kronik Görüntüleme
Summary
Bu video ve tamamlayıcı malzeme, kronik bir protokol<em> In vivo</em> Seyrelmiş bir kafatası hazırlık kullanarak sağlam beyin görüntüleme.
Abstract
Bozulmamış beyin hücreleri ve nöronal süreçleri yaşayan iki foton lazer tarama mikroskobu (2PLSM) kullanarak in vivo görüntüleme çalışma sağlar. Burada sunulan teknik MSS eksitatör postsinaptik sitelerin büyük çoğunluğu temsil eden küçük yapılar dendritik dikenler izleme izin mikroskobik çözünürlüğü ile çeşitli zaman noktalarında (kronik görüntüleme) aynı bölgede beyin görüntüleme sağlar. Ince kortikal yapıların, birkaç kez puan üzerinden açıkça çözmek için yeteneği, sinapsların morfolojik değişiklikler ve devre remodelling altta yatan mekanizmaların açıklanmasına yardımcı olan beyin plastisite çalışma, özellikle pek çok avantajı vardır. Bu video ve tamamlayıcı malzeme, kronik seyrelmiş bir kafatası hazırlık kullanarak bozulmamış beyin in vivo görüntüleme için bir protokol göstermektedir. Inceltilmiş kafatası hazırlama, minimal invaziv bir yaklaşım, böylece bir inflamatuar yanıt başlangıcı azaltarak, dura ve / veya korteks potansiyel zarar görmesini engeller. Bu protokol doğru yapıldığında, açıkça zaman uzun bir süre içinde bozulmamış beyin dendritik omurga özellikleri değişiklikleri izlemek için mümkündür.
Protocol
Discussion
Iki foton mikroskopi kullanılarak Kronik görüntüleme plastisite 2-5 sırasında tetiklenen morfolojik değişiklikleri incelemek için giderek daha popüler bir teknik haline gelmektedir . Burada farklı görüntüleme gün bozulmadan fare beyin tespit dendritik dikenler takip seyrelmiş bir kafatası hazırlık göstermektedir. Bu protokolde, korteks minimal hasara neden kafatası ve beyin fonksiyonu 6 değiştirebilir nöro çok düşük seviyelerde ile sonuçlanan, değişmeden kalır. Bu ha…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma, Biyomedikal Bilimler (AKM) Burroughs Wellcome Kariyer Ödülü tarafından desteklenen, Whitehall Vakfı Araştırma Bursu (AKM), Sloan Vakfı Bursu (AKM), NIH EY019277 (AKM) ve bir NEI tarafından finanse edilen, Vizyon Eğitim Grant, EY013319 ( EAK).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Fentanyl Citrate | In-house pharmacy | Fentanyl Cocktail: Anesthesic Cocktail; IP Dose: 0.0125 ml/g Final cocktail conc.: 0.05 mg/kg |
||
| Medetomindine Hydrochloride | In-house pharmacy | Fentanyl Cocktail: Anesthesic Cocktail; IP Dose: 0.0125 ml/g Final cocktail conc.: 0.05 mg/kg |
||
| Midazolam HCL | In-house pharmacy | Fentanyl Cocktail: Anesthesic Cocktail; IP Dose: 0.0125 ml/g Final cocktail conc.: 0.05 mg/kg |
||
| 2,2,2-tribromoethanol | Avertin Cocktail: Anesthetic; IP Dose: 0.0075 cc/ g Final cocktail conc.: 1% |
|||
| 2-methyl-2-butanol (Final concentration: 0.775%) | Avertin Cocktail: Anesthetic; IP Dose: 0.0075 cc/ g Final cocktail conc.: .775% |
|||
| TC-1000 Temp. Control System for Mice | CWE, Inc. | TC-1000 Mouse | Body Temp. Regulation | |
| Toberadex | In-house pharmacy | Eye Ointment | ||
| 10% Ferric Chloride | Ricca Chemical, Inc. | 3120-32 | Thin-skull preparation | |
| Microsurgical Blade | Sable Industries | S-6400 | Thin-skull preparation | |
| Cyanoacrylate 404,401 | Loctite | P/N 46551 | Thin-skull preparation | |
| Cyanoacrylate 401 | Loctite | P/N 40140 | Thin-skull preparation | |
| Zip Kicker Glue Accelerator | Pacer Technology | PT-29 | Thin-skull preparation | |
| Micro Drill Steel Burrs 0.7mm tip diameter | Fine Science Tools | 19008-07 | Thin-skull preparation | |
| Microtorque Control Box and Tech2000 Handpiece | Ram Products, Inc. | TECH2000ON/OFF | Thin-skull preparation | |
| #6-0 (0.7 metric ) silk suture | Ethicon | K8894H | Taper C-1 | |
| Eye Dressing Forceps, 10cm, tip width 0.5mm, curved | Surgical Tools | Fine Science Tools | 11152-10 | |
| Extra Fine Bonn Scissors, 8.5cm, straight tip, cutting edge 13mm | Surgical Tools | Fine Science Tools | 14084-08 | |
| Standard Pattern Forceps, straight, 2.5mmx1.35mmtip, 12cm | Surgical Tools | Fine Science Tools | 11000-12 |
References
- Feng, G. Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP. Neuron. 28 (1), 41-51 (2000).
- Holtmaat, A. high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window. Nat Protoc. 4 (8), 1128-1144 (2009).
- Majewska, A. K., Newton, J. R., Sur, M. Remodeling of synaptic structure in sensory cortical areas in vivo. J Neurosci. 26 (11), 3021-3029 (2006).
- Mostany, R., Portera-Cailliau, C. A Craniotomy Surgery Procedure for Chronic Brain Imaging. J Vis Exp. , (2008).
- Yang, G. Thinned-skull cranial window technique for long-term imaging of the cortex in live mice. Nat Protocols. 5 (2), 201-208 (2010).
- Xu, H. T. Choice of cranial window type for in vivo imaging affects dendritic spine turnover in the cortex. Nat Neurosci. 10 (5), 549-551 (2007).
