Kaposi sarkomu ile ilişkili Herpes (KSHV) Yol Açtığı düzensiz Genler belirlenmesi
Summary
Konak hücre faktörleri, kuruluş ve Kaposi sarkomu (KS) bakım çok önemli bir rol oynamaktadır. Biz KSHV enfekte DMVEC hücreleri değişmiş konak hücre faktörleri belirlemek için yöntemler anahat ve KS tümör dokusu. Virüs tarafından değiştirilmiş Hücresel gen roman tedavi için potansiyel hedef (ler) olarak hizmet edecektir.
Abstract
KS en baskın Güney Afrika'da HIV / AIDS ile ilgili malignite ve dolayısıyla dünyada 1,2 vasküler endotelyal hücreler bir angioproliferative tümör olarak karakterize edilir ve plevral efüzyon lenfomalar şeklinde nadir B hücreli lenfoproliferatif hastalıklar (PEL ) ve multisentrik Castleman hastalığının bazı formları, KS 3-5 hücrelerin sadece% 1-5 Kaposi sarkomu-ilişkili herpes (KSHV), KS ile ilişkili etiyolojik ajan litik çoğaltma aktif destek lezyonlar, ve hücresel faktörler gerektiği açıktır . karsinojeneze ve tümör progresyonu sürecinde viral faktörler ile etkileşim. KS patoloji katkıda 6,7 belirlenmesi roman konak faktörü belirleyicileri sıra KS tedavisi için yeni terapötikler geliştirilmesi için tümör progresyonu ve metastaz için prognostik göstergeleri geliştirmek için gerekli mikroarray analizi düzensiz genler tarafından tespit edildikten sonra 8 eşlik eden video ayrıntıları dermal mikrovasküler endotel hücreleri (DMVEC) KSHV enfeksiyon sonrası ve KS tümör dokusu değişmiş konak hücre gen ekspresyon programları tanımlamak için kullandıkları yöntemleri. 9, protein ekspresyonunda değişiklikler immunoblotting ve çift etiketli immünofloresan doğruladı. Düzensiz genlerin transkripsiyonel ifade değişiklikler kantitatif gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (QRT PCR) ile in vitro teyit edilir. Arşiv KS tümör dokusu kullanılarak in vitro bulgular Doğrulama ayrıca çift etiketli immünokimyanın tuvar 8,10 Bizim yaklaşımımız, in vitro ve in vivo model sistemler daha sonra gelişmesi için izin KS tümör dokusu mikroçevresinin düzensiz genlerin belirlenmesi amacıyla KS tedavisi için potansiyel yeni tedavi keşif ve değerlendirme.
Protocol
Discussion
Bu raporda kullanılan metodolojileri, çeşitli laboratuar ayarları yapılabilir. Onlar bazı özel ekipman ya da çekirdek tesislerine erişim gerektirir. KSHV bir biosaftey seviye 3 (BSL-3) özellikler kullanılması gerekebilir gibi bulaşıcı viral patojenler içeren deneyler yaparken uygun önlemler alınmalıdır. Doku satın almalar da uygun kurumsal inceleme kurulları (IRBs) tarafından onaylanmış olması gerekir.
Bu metodolojileri birlikte, in vitro ifade içinde düz…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
James EK Hildreth, Meharry Tıp Koleji, onun tavsiye ve bu yazının incelenmesi için teşekkür ederiz. Ayrıca Diana marver yazının düzenleme için teşekkür ederim. AIDS Sağlık Farklılıkların Araştırma Merkezi, NIH hibe 5U54 RR019192-05; Meharry Klinik Araştırma Merkezi, erişmiş P20RR011792; Bu çalışma, AIDS Araştırma Meharry Vanderbilt Merkezi (NIH hibe P30 AI054999-05) tarafından desteklenen ve NIH tarafından Hibe P01 CA113239. DJA kısmen, AIDS Araştırma Vanderbilt Meharry Merkezi (CFAR) ve Meharry Klinik Araştırma Merkezi (CRC) pilot bağışları ile finanse edilmiştir.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| RPMI 1640 | Invitrogen | 05-0001DJ | ||
| TPA | Sigma | P1585 | ||
| PBS pH 7.4 | Invitrogen | 10010-023 | ||
| Sodium butyrate | Sigma | 19364 (FLUKA) | ||
| EBM-2 media | Lonza | CC-3156 | + bullet kits supplement | |
| DMVEC cells (HMVEC) | Lonza | CC2543 | ||
| Fetal calf serum | Hyclone | SH30066.03 | ||
| Penicillin/streptomycin | Invitrogen | 15140-122 | ||
| Chamber slides | Nalgene | 154461 | ||
| KSHV LANA Mab | Vector Labs | VP-H913 | 1:50 dilution/IFA | |
| Galectin-3 goat pAb | R&D Systems | AF1154 | ||
| Donkey-anti-goat FITC | Jackson ImmunoRessearch | 705-095-1 | ||
| Donkey-anti-goat Rho | Jackson ImmunoRessearch | 705-295-003 | 1:100 dilution/IFA | |
| Mounting media | Vector Labs | H 1500 | Vectashield with DAPI | |
| BCA Protein Assay Kit | Pierce | 23235 | ||
| Nitrocellulose | Bio-Rad | 161-0112 | ||
| Donkey-anti-goat-conj. | Santa Cruz | SC 2020 | ||
| Western substrate | Pierce | 34075 | ||
| Biotin-rabbit-anti goat | DAKO | 305-065-045 | ||
| AP-Strepavidin conj. | DAKO | K 0492 (kit) | ||
| RNase DNase Free Set | Qiagen | 79254 | ||
| MJ Mini Cycler | Bio-Rad | PTC-1148C | ||
| Bio-Photometer | Eppendorf | 952000006 | ||
| RC 6 Plus Centrifuge | Sorvall | 46910 | ||
| Coulter Optima L-90K Ultracentrifuge | Beckman | 392052 | ||
| MYiQ iCycler Real Time PCR Detection System | Bio-Rad | 170-9770 | ||
| TE 2000S Fluorescent microscope | NIKON | TE2000S | ||
| 2100 Bioanalyzer | Agilent | G2938C | ||
| Eclipse E 200 | NIKON | E 200 | ||
| Sorvall Legend RT Centrifuge | Thermo | 75004377 |
References
- Sitas, F., Newton, R. Kaposi’s sarcoma in South Africa. J Natl Cancer Inst Monogr. 28, 1-4 (2001).
- Moore, P. S., Chang, Y., Knipe, D. M., Howley, P. M. Kaposi’s sarcoma associated herpesvirus. Field’s Virology. , 2803-2833 (2002).
- Chang, Y., Cesarman, E., Pessin, M. S., Lee, F., Culpepper, J., Knowles, D. M., Moore, P. S. Identification of herpesvirus-like DNA sequences in AIDS-associated Kaposi’s sarcoma. Science. 266, 1865-1869 (1994).
- Cesarman, E., Chang, Y., Moore, P., Said, J. W., Knowles, D. M., M, D. Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus-like DNA sequences in AIDS-related body-cavity-based lymphomas. N Engl J Med. 18, 1186-1191 (1995).
- Cesarman, E., Knowles, D. M. Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus: a lymphotropic human herpesvirus associated with Kaposi’s sarcoma, primary effusion lymphoma, and multicentric Castleman’s disease. Semin Diagn Pathol. 14, 54-66 (1997).
- Chiou, C. J., Poole, L. J., Kim, P. S., Ciufo, D. M., Cannon, J. S., ap Rhys, C. M., Alcendor, D. J., Zong, J. C., Ambinder, R. F., Hayward, G. S. Patterns of gene expression and a transactivation function exhibited by the vGCR (ORF74) chemokine receptor protein of Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus. J Virol. 76, 3421-3439 (2002).
- Staskus, K. A., Zhong, W., Gebhard, K., Herndier, B., Wang, H., Renne, R., Beneke, J., Pudney, J., Anderson, D. J., Ganem, D., Haase, A. T., T, A. Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus gene expression in endothelial (spindle) tumor cells. J Virol. 71, 715-719 (1997).
- Alcendor, D. J., Zhu, W. Q., Desai, P., Vigil, H. E., Hayward, G. S. KSHV downregulation of galectin-3 in kaposi’s sarcoma. Glycobiology. , (2009).
- Ciufo, D. M., Cannon, J. S., Poole, L. J., Wu, F. Y., Murray, P., Ambinder, R. F., Hayward, G. S. Spindle cell conversion by Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus: formation of colonies and plaques with mixed lytic and latent gene expression in infected primary dermal microvascular endothelial cell cultures. J Virol. 75, 5614-5626 (2001).
- Long, E., Ilie, M., Hofman, V., Havet, K., Selva, E., Butori, C., Lacour, J. P., Nelson, A. M., Cathomas, G., Hofman, P. LANA-1, Bcl-2, Mcl-1 and HIF-1alpha protein expression in HIV-associated Kaposi sarcoma. Virchows Arch. 2, 159-170 (2009).
