Die organoptypic Hippocampus Stück Kultur-Modell ist ein<em> In-vitro-</em> Modell verwendet, um neuronale Verletzungen in eine Vielzahl von Paradigmen zu untersuchen. In diesem Artikel beschreiben wir die Methoden zur Erzeugung von Slice Kulturen und Quantifizierung neuronaler Schädigung.
Abstract
Organotypischen hippocampalen Slice-Kultur ist eine in vitro-Methode, um Mechanismen der neuronalen Verletzungen, in denen die grundlegende Architektur und die Zusammensetzung des Hippocampus relativ 1 ist erhalten zu untersuchen. Die organotypischen Kultur-System ermöglicht die Untersuchung der neuronalen, Astrozyten und Mikroglia-Effekte, sondern als Ex-vivo-Vorbereitung, befasst sich nicht mit Auswirkungen der Durchblutung, oder Rekrutierung von peripheren Entzündungszellen. Zu diesem Zweck ist diese Kultur-Methode häufig verwendet, um excitotoxic und hypoxischen Verletzung pyramidalen Neuronen des Hippocampus zu untersuchen, sondern wurde auch verwendet, um die entzündliche Reaktion zu untersuchen. Hier beschreiben wir die Methoden zur Erzeugung von hippocampalen Slice-Kulturen aus postnatalen Nagetier Gehirn, Verwaltung toxische Reize zu neuronaler Schädigung hervorrufen, und Untersuchung und Quantifizierung des Hippocampus neuronalen Tod.
Protocol
1. Vorbereitung Bevor Sie beginnen, montieren die erforderliche chirurgische Instrumente, Präparation und Kultur Medien und 7 Tage alten Ratte oder Maus Welpen. Das Protokoll ist das gleiche für Maus und Ratte Vorbereitungen. (I) Material und Ausrüstung Operating Schere (gestreckte Länge 6 ", cat # RS6818, Roboz, Gaithersburg, MD) Micro Präparierschere, (Länge 4 '", cat # RS5910. Roboz, Gaithersburg, MD) Carbon Stee…
Discussion
Es gibt zwei wichtige Punkte zu folgen, um reproduzierbare und konsistente Ergebnisse zu gewährleisten, wenn die Replikation Experimente. Zunächst ist es wichtig, den Schnitten des Hippocampus Alter für 12-14 Tage vor Experimentieren lassen. Mit slice Isolation, gibt es einen signifikanten Mikroglia Antwort, und Mikroglia noch einige Zeit aktiviert, mit einer Rückkehr zu einer ruhenden verzweigten Zustand auftretenden Tag 10 in vitro3,6. Zweitens bedeuten PI Fluoreszenzintensität ist proportion…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gefördert durch NINDS, American Heart Association, American Federation for Aging Research, March of Dimes
Wang, Q., Andreasson, K. The Organotypic Hippocampal Slice Culture Model for Examining Neuronal Injury. J. Vis. Exp. (44), e2106, doi:10.3791/2106 (2010).