Summary

תא גלייה לימוד הטרוגניות השפעה על הצמיחה אקסון בשיטה Coculture חדש

Published: September 06, 2010
doi:

Summary

בפרוטוקול זה, אנו תיאר שיטה חדשה ללמוד את השפעת ההטרוגניות תא גליה על צמיחת האקסון עם<em> במבחנה</em> שיתוף התרבות המערכת. קליפת המוח עכברוש ותאי גלייה היו בתרבית כדי מפגש ו cocultured עם מטוהרים מאוד הגבי עכברוש שורש עצב הגרעינים. תאים שונים להשפיע על גליה הידבקות נוירונים וצמיחה האקסון הושווה ישירות באותה תרבות. שיטה זו מספקת דרך חדשה ישירות ללמוד תא גלייה ההטרוגניות השפעה על הידבקות נוירון וצמיחה האקסון.

Abstract

במערכת העצבים המרכזית של כל היונקים, אקסונים ניתק לאחר פציעה אינם מסוגלים להתחדש ליעדים המקוריים שלהם התאוששות תפקודית ירודה מאוד 1. הכישלון של התחדשות האקסון הוא תוצאה משולבת של מספר גורמים, כולל סביבה עוינת תא גלייה, מעכבות מולקולות הקשורות המיאלין וירידה יכולת ההתחדשות הפנימית נוירון 2. האסטרוציטים הם סוג השולט ביותר תא גליה במערכת העצבים המרכזית לשחק תפקיד חשוב בפונקציות האקסון תחת הפיזיולוגיה והפתולוגיה התנאים 3. בניגוד הומולוגיים oligodendrocytes, האסטרוציטים הם אוכלוסייה הטרוגנית תא שהלחין subpopulations astrocyte מורפולוגיות שונות עם מגוון ביטוי גנים 4. משמעות תפקודית של ההטרוגניות הזאת, כמו השפעות על צמיחה האקסון, אינו ידוע ברובו.

כדי לחקור את תא גלייה, בעיקר פונקציה של ההטרוגניות astrocyte בהתנהגות נוירון, הקמנו שיטה חדשה על ידי שיתוף culturing גבוה מטוהרים הגב הגרעינים נוירונים ותאי גלייה עם השורש המתקבל בקליפת חולדה. על ידי טכניקה זו, הצלחנו להשוות ישירות הידבקות נוירון וצמיחה האקסון על subpopulations האסטרוציטים שונים בתנאי אותו.

בדו"ח זה, אנו נותנים את פרוטוקול מפורט של שיטה זו של בידוד האסטרוציטים ותרבות, השורש הגבי הגרעינים נוירונים בידוד וטיהור, ואת שיתוף התרבות של נוירונים עם DRG האסטרוציטים. שיטה זו יכולה גם להיות מורחבת לאזורים אחרים במוח ללמוד אינטראקציה ספציפית הסלולר או אזורית בין נוירונים ותאי גלייה.

Protocol

1. תא גליה תרבות ותאי גלייה יכול להיות מתורבת מאזורים שונים של מערכת העצבים המרכזית. התהליך כולו מוצג בתרשים התהליך. 1 ?…

Discussion

פרוטוקול הניסוי תוכנן להגיע שתי מטרות ללמוד ותאי גלייה, השפעה ההטרוגניות של astrocyte במיוחד על הידבקות נוירון וצמיחה neurite. המטרה הראשונה היתה לשמור על ההטרוגניות astrocyte ככל האפשר, בניסוי הזה, ומחוברות גליה תרבית תאים האסטרוציטים מועשר היה מעורב תרבות ראשוני ללא כל טיפול ?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

מחקר זה נתמך על ידי FMMU חדש למציאת הקרן באופן חלקי במימון NIH.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
DMEM(high glucose)   Invitrogen 10313-039  
L15 medium   Invitrogen 11415-114  
FBS   Invitrogen 10437-077  
Neurobasal Medium   Invitrogen 21103-049  
poly-lysine   Sigma P4832 culture grade
NGF(2.5S)   Invitrogen 13257-019  
B27 supplyment   Invitrogen 17504-044  
0.25% trypsin-EDTA   Invitrogen 25200-056  
FUDR   Sigma F0503  
neurofilament antibody   Abcam ab24575  

References

  1. Rossignol, S., Schwab, M., Schwartz, M., Fehlings, M. G. Spinal cord injury: time to move?. J Neurosci. 27 (44), 11782-11792 (2007).
  2. Yiu, G., He, Z. Glial inhibition of CNS axon regeneration. Nat Rev Neurosci. 7 (8), 617-627 (2006).
  3. Barres, B. A. The mystery and magic of glia: a perspective on their roles in health and disease. Neuron. 60 (3), 430-440 (2008).
  4. Matyash, V., Kettenmann, H. Heterogeneity in astrocyte morphology and physiology. Brain Res Rev. , (2009).
  5. Wanner, I. B., Deik, A., Torres, M., Rosendahl, A., Neary, J. T., Lemmon, V. P., Bixby, J. L. A new in vitro model of the glial scar inhibits axon growth. Glia. 56 (15), 1691-1709 (2008).
  6. Kuffler, D. P., Sosa, I. J., Reyes, O. Schwann cell chondroitin sulfate proteoglycan inhibits dorsal root ganglion neuron neurite outgrowth and substrate specificity via a soma and not a growth cone mechanism. J Neurosci Res. 87 (13), 2863-2871 (2009).
  7. Kleitman, N., Wood, P. M., Bunge, R. P. Tissue culture method for the study of myelination. Culturing nerve cells. , P559-P559 (1998).

Play Video

Cite This Article
Xu, H., Gou, L., Dong, H. Study Glial Cell Heterogeneity Influence on Axon Growth Using a New Coculture Method. J. Vis. Exp. (43), e2111, doi:10.3791/2111 (2010).

View Video