ويمكن تقييم الاتجار الجزيئات بين الخلايا النباتية بالإعراب عابر بروتين fluorescently الموسومة المصالح وتحليل توزيعه داخل وبين الخلايا بواسطة المجهر مبائر.
Abstract
هنا ، نطرح على بروتوكول بسيط وسريع لكشف وتقييم مدى الخلية الى خلية النقل الجزيئات في بلانتا. في هذا البروتوكول ، وأعرب عن عابر a fluorescently الموسومة البروتين من الاهتمام في الأنسجة النباتية بعد الولادة biolistic من الحمض النووي لبناء الترميز. ثم يتم تحليل التوزيع داخل وبين الخلايا من البروتين الموسومة بواسطة الفحص المجهري متحد البؤر. وصفنا هذه التكنولوجيا بالتفصيل ، وتوفير خطوة بخطوة لبروتوكولات الفحص وتقييم مدى النقل بروتين متحد الجبلة في الأنواع النباتية ثلاثة thaliana Arabidopsis ، ونيكوتيانا benthamiana N. تبغ (التبغ).
Protocol
خلفية متحد الجبلة النقل الجزيئات من خلال الاتصالات بين الخلايا النباتية ، ورابطات هيولية ، هو موضع اهتمام العديد من الأطباء وعلماء الأحياء النباتية. على سبيل المثال ، لا يعرف العديد من البروتينات الفيروسية لتنظيم plasmodesmal حدود حجم…
Discussion
المفتاح لنجاح تجربة النقل متحد الجبلة هو الحصول على كفاءة عالية التحول ، الذي يسمح للإنتاج مجموعات إشارة ذات دلالة إحصائية واكتشافها بسهولة. ويمكن تحقيق ذلك باستخدام أوراق تحصد من النباتات وصحية قوية ، وإعداد جزيئات الذهب المطلي بواسطة الحمض النووي إعداد نقية ومرك?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ويدعم عملنا من المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة / NIGMS ، جبهة الخلاص الوطني ، وزارة الزراعة / NIFA وBARD إلى VC.
Ueki, S., Meyers, B. L., Yasmin, F., Citovsky, V. A Cell-to-cell Macromolecular Transport Assay in Planta Utilizing Biolistic Bombardment. J. Vis. Exp. (42), e2208, doi:10.3791/2208 (2010).