הסחר בין Macromolecular בתאי צמח ניתן להעריך על ידי transiently לבטא חלבון fluorescently-tagged עניין וניתוח ההפצה התוך ואת אינטר שלה על ידי מיקרוסקופיה confocal.
Abstract
כאן, אנו מציגים פרוטוקול פשוטה ומהירה כדי לזהות ולהעריך את מידת התא אל התא תחבורה מולקולארית Planta. בפרוטוקול זה, fluorescently מתויג חלבון עניין מתבטא transiently ברקמות הצמח לאחר הלידה biolistic קידוד של ה-DNA שלה לבנות. הפצה התוך ואת אינטר של החלבון מתויג הוא ניתח מכן על ידי מיקרוסקופיה confocal. אנו מתארים את הטכנולוגיה הזו בפירוט, מתן צעד אחר צעד הפרוטוקולים assay ולהעריך את היקף התחבורה חלבון symplastic בשלושה מיני צמחים, thaliana ארבידופסיס, ניקוטיאנה benthamiana ונ tabacum (טבק).
Protocol
רקע תחבורה Symplastic של מקרומולקולות דרך קשרים צמח אינטר, plasmodesmata, הוא עניין פתולוגים צמחים ביולוגים רבים. לדוגמה, חלבונים נגיפיים כמה ידועים להסדיר plasmodesmal הדרה מגבלות גודל לאפשר תנועה ויראלי 1-3. כמו כן, כמה חלבונים אנדוגניים, בי?…
Discussion
המפתח להצלחה של assay התחבורה symplastic היא להשיג יעילות הטרנספורמציה גבוהה, המאפשרת ייצור של אשכולות אות מובהק סטטיסטית ו detectible בקלות. זו יכולה להיות מושגת באמצעות עלים שנקטפו מן, צמחים חזקים ובריאים, והכנת חלקיקי זהב מצופה על ידי הכנה דנ"א טהור ומרוכז.
<p class="jove_content" sty…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
העבודה שלנו היא נתמך על ידי מענקים NIH / NIGMS, NSF, USDA / NIFA, ובארד ל VC.
Ueki, S., Meyers, B. L., Yasmin, F., Citovsky, V. A Cell-to-cell Macromolecular Transport Assay in Planta Utilizing Biolistic Bombardment. J. Vis. Exp. (42), e2208, doi:10.3791/2208 (2010).