Traffico macromolecolari tra le cellule delle piante può essere valutata transitoriamente esprimere una proteina fluorescente-tagged di interesse e per analizzarne la distribuzione intra-ed intercellulare mediante microscopia confocale.
Abstract
Qui, vi presentiamo un protocollo semplice e rapido per rilevare e valutare l'entità del cellula-cellula trasporto macromolecolari in planta. In questo protocollo, una fluorescente con tag proteina di interesse è transitoriamente espressa in tessuti vegetali dopo la consegna biolistic del suo DNA codifica costruire. La distribuzione intra-ed intercellulare della proteina tag viene quindi analizzato al microscopio confocale. Descriviamo questa tecnologia nel dettaglio, fornendo passo-passo protocolli di saggiare e valutare l'entità del trasporto delle proteine symplastic in tre specie di piante, Arabidopsis thaliana, Nicotiana benthamiana e N. tabacum (tabacco).
Protocol
Fondo Symplastic trasporto di macromolecole attraverso connessioni impianto intercellulari, il plasmodesmi, è di interesse per molti patologi vegetali e biologi. Per esempio, diverse proteine virali sono noti per regolare plasmodesmal limiti di esclusione dimensioni per permettere il movimento virale 1-3. Inoltre, alcune proteine endogene, tra i quali importanti regolatori dello sviluppo, si presume per passare da una cella all'altra, presumibilmente attraverso plas…
Discussion
La chiave per il successo del saggio di trasporto symplastic è quello di ottenere elevata efficienza di trasformazione, che consente la produzione di cluster segnale statisticamente significativi e facilmente misurabili. Ciò può essere ottenuto utilizzando le foglie raccolte da piante sane, robuste, e la preparazione di particelle di oro rivestite da una preparazione del DNA puro e concentrato.
Utilizzando le foglie in fase di crescita stessa è fondamentale anche per l'affidabilità …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Il nostro lavoro è supportato anche da finanziamenti NIH / NIGMS, NSF, USDA / NIFA e BARD a VC.
Ueki, S., Meyers, B. L., Yasmin, F., Citovsky, V. A Cell-to-cell Macromolecular Transport Assay in Planta Utilizing Biolistic Bombardment. J. Vis. Exp. (42), e2208, doi:10.3791/2208 (2010).