В этой статье намерен описать поэтапно часто используемых<em> В пробирке</em> Тесты, используемые при изучении Шванн клеточной asrtocyte взаимодействий.
Шванн клетки являются одним из наиболее часто используемых клетками в ремонт стратегии следующие повреждения спинного мозга. Шванн клетки способны поддерживать аксонального регенерации и прорастанию на 1,2 секретирующие фактор роста и оказания содействия росту молекул адгезии 3 и внеклеточной матрицы молекул 4. Кроме того, они myelinate демиелинизированные аксонов в месте повреждения 5.
Однако после трансплантации, Шванн клетки не мигрируют с места имплантата и не смешиваются с принимающей астроциты 6,7. Это приводит к образованию резкой границы между клетками Шванн и астроцитов, создавая препятствие для роста аксонов пытается выйти трансплантата обратно в ткани хозяина проксимально и дистально. Астроциты в контакт с клетками Шванн также подвергаются гипертрофии и постоянно регулировать тормозное молекул 8-13.
В пробирке тесты были использованы для моделирования Шванн клеточных взаимодействий и астроциты играют важную роль в понимании механизмов, лежащих в основе сотовой поведения.
Эти тесты в пробирке включают границы анализа, где со-культуры осуществляется с помощью двух различных клеток каждого типа клеток занимающих разные территории только с небольшой разрыв, отделяющий два фронта клетки. Как клетки делятся и мигрируют, два сотовых фронтах стать ближе друг к другу и, наконец, сталкиваются. Это позволяет поведение двух клеточных популяций, которые будут проанализированы на границе. Другой вариант того же метода является сочетание двух клеточных популяций в культуре и в течение долгого времени два типа клеток выделять с клетками Шванн слипаются вместе, как между островами в астроциты вместе создание нескольких Шванн-астроцитов границ.
Второй анализа используются при изучении взаимодействия двух типов клеток является миграция анализа, где сотовая движение можно проследить на поверхности другого типа клеток монослоя 14,15. Этот анализ обычно известен как перевернутая анализа покровное. Шванн клетки культивируют на мельчайшие осколки стекла, и они обращены лицевой стороной вниз на поверхности астроцитов монослоев и миграции оценивается от края покровного.
И анализы играют важную роль в изучении основных механизмов, участвующих в клеточном изоляции и границы образования. Некоторые из молекул определяется с помощью этих методов включают N-Кадгерины 15, хондроитин сульфат протеогликаны (CSPGs) 16,17, FGF / Гепарин 18, Еф / Ephrins 19.
В этой статье намерен описать анализа границ и миграции в анализе поэтапно и выяснить возможные технические проблемы, которые могут возникнуть.
Анализы, описанные выше, были использованы в различных исследований, демонстрирующих роль несколько факторов, влияющих на формирование границы между Шванн-астроциты и ограниченной ячейке Шванн миграции в астроцитарных окружающей среды.
Понимание механизмов лежащих в…
The authors have nothing to disclose.
Мы хотели бы поблагодарить Филиппа Уоррен для нее вид помощи.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
DMEM | Invitrogen | 41966-029 | ||
HBSS | Invitrogen | 14170-088 | ||
FCS | Invitrogen | 10091-148 | ||
PSF | Invitrogen | 15240-062 | ||
BPE | Invitrogen | 13028-014 | ||
Forskolin | Calbiochem | 344273 | ||
Coverlips | VWR-International | 631-0149 | ||
Coverlips(rectangle) | MENZEL-GLASER (Supplied by Thermo Scientifics) | BB022050A1 | ||
Chamber slides | Nunc-LabTek | 177380 | ||
4 well plates, 6 well plates | Nunc | 4 well plates 6 well plates |
||
rat p75 antibody | Millipore, Temecula,California | MAB365 | ||
GFAP antibody | Dako | Z0334 | ||
Secondary antibodies (Alexa-conjugated) | Invitrogen | A-11004 A-11034 |
Goat anti mouse 568 Goat anti Rabbit 488 |
|
Secondary biotinylated | Vector | Goat anti mouse | ||
DAB tablets | Sigma-aldrich | D4418 | ||
ABC elite kit | Vector | PK-6100 | ||
Fine Forceps | FST | 11295-10 | ||
Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6168 | ||
Fluorosave | Calbiochem | 345789 |