钙离子释放活化钙全细胞膜片钳记录(CRAC)外周血单核细胞衍生的人类T淋巴细胞中的电流,我们提供了一步一步的协议。
T淋巴细胞,耗尽的Ca 2 +从细胞内Ca 2 +存储信息激活质膜钙离子通道,被称为钙释放激活钙(CRAC)通道。 CRAC通道中的T细胞增殖和基因表达调控中发挥重要作用。 T细胞异常的CRAC通道的功能已被链接到重症联合免疫缺陷和自身免疫性疾病1,2。在人类T细胞研究的CRAC通道功能调节正常的免疫反应,可能会发现新的分子机制,并揭开有关人类疾病的原因。膜电流的电生理记录功能通道特性及其调控提供最准确的评估。然而,在正常的人体T细胞的CRAC电流测量,人类白血病T细胞株,Jurkat T细胞的CRAC通道电流的电生理评估是第一次执行超过20年,前3仍然是一个具有挑战性的任务。在录音中正常T细胞的CRAC通道电流的困难加剧的事实,血源性T淋巴细胞Jurkat T细胞的大小比要小得多,因此,全细胞内源性的CRAC电流幅度非常低。在这里,我们给一步一步的过程,我们经常使用记录的 Ca 2 +或Na +通过在休息从健康志愿者的外周血中分离的人类T细胞的CRAC通道的电流。这里描述的方法记录在Jurkat T细胞的CRAC电流激活人体T细胞4-8所使用的程序获得通过。
人类T细胞在休息的CRAC电流的电生理调查是一项具有挑战性的任务,因为在这些细胞中的内源性的CRAC的电流幅值小,由于小单元尺寸(休息人体T细胞直径在5-8微米的范围内)。在这里,我们现在一步一步的程序,以可靠地记录在休息的人类T淋巴细胞从外周血单个核细胞中分离的CRAC电流。这项技术使我们能够探讨在静息T细胞的CRAC通道的生理学和功能表达,以便更好地了解正常和病理的免疫细胞?…
The authors have nothing to disclose.
我们感谢为我们提供与离子通道的研究设施和良好的环境,加州大学戴维斯分校生理学与膜生物学部。