我々は、末梢血単核細胞由来のヒトTリンパ球におけるカルシウム放出、活性化カルシウム(CRAC)電流の全細胞パッチクランプ記録のためのステップバイステップのプロトコルを提供しています。
Tリンパ球で、細胞内Ca 2 +ストアからのCa 2 +枯渇は、カルシウムのリリース-活性化カルシウム(CRAC)チャネルと呼ばれる細胞膜のCa 2 +チャネルの活性化につながる。 CRACチャネルは、T細胞の増殖と遺伝子発現の調節において重要な役割を果たしている。 T細胞の異常なCRACチャネル機能は、重症複合免疫不全や自己免疫疾患1、2にリンクされています。ヒトT細胞のCRACチャネルの機能を研究することは正常な免疫反応を調節する新たな分子メカニズムを明らかにし、関連するヒト疾患の原因を解明することができる。膜電流の電気生理学的記録は、機能的なチャネルのプロパティとその規制の最も正確な評価を行うこと。 Jurkat T細胞、ヒト白血病T細胞株、のCRACチャネル電流の電気生理学的評価が最初に20年以上前に3を実行された、しかし、正常なヒトT細胞におけるCRAC電流測定は困難な課題である。正常T細胞でCRACチャネル電流を記録するの難しさは、血液由来のTリンパ球は、Jurkat T細胞よりもはるかに小さいサイズと、従って、内因性の細胞全体のCRAC電流は振幅が非常に低いものであるという事実によって悪化されています。ここで、我々は日常的に健康なボランティアの末梢血から単離されたヒトT細胞の休止のCRACチャネル経由でのCa 2 +又はNa +電流を記録するために使用するステップバイステップの手順を与える。ここで説明する方法は、Jurkat T細胞および活性化ヒトT細胞4-8にCRAC電流を記録するために使用される手続きから導入されました。
これらの細胞中の内因性CRAC電流振幅が小さいセルサイズ(安静時のヒトT細胞の直径は5〜8μmの範囲にある)のために小さいため、ヒトT細胞の休止のCRAC電流の電気生理学的研究は困難な作業です。ここで、我々は確実に末梢血単核細胞から単離されたヒトTリンパ球を休んでCRAC電流を記録するためにステップバイステップの手順を示します。この技術は、私たちはより良い正常および病的な?…
The authors have nothing to disclose.
私たちは、施設やイオンチャネルの研究のための優れた環境をご提供するための生理学と膜生物学、カリフォルニア大学デービス校の学科に感謝しています。