इस वीडियो में हम polydimethyl siloxane (PDMS) जो हम संवर्धन न्यूरॉन्स के लिए एक microfluidic युक्ति farbricate उपयोग के साथ नरम लिथोग्राफी की तकनीक का प्रदर्शन.
इस वीडियो में, हम polydimethyl siloxane (PDMS) जो हम संवर्धन न्यूरॉन्स के लिए एक microfluidic युक्ति बनाना उपयोग के साथ नरम लिथोग्राफी की तकनीक का प्रदर्शन. इससे पहले, एक सिलिकॉन वफ़र न्यूरॉन microfluidic डिवाइस का उपयोग SU-8 और एक मास्टर मोल्ड बनाने photolithography, या हम क्या सिर्फ एक "मास्टर" के रूप में उल्लेख के लिए डिजाइन के साथ नमूनों था. अगला, हम मास्टर जो तब 80 PDMS हीटिंग डिग्री सेल्सियस 1 घंटे के लिए ठीक है के शीर्ष पर सिलिकॉन बहुलक PDMS डालना. PDMS डिवाइस के नकारात्मक मोल्ड रूपों. PDMS तो ध्यान से कट जाता है और मास्टर से दूर हटा लिया. छेद जहां जलाशयों जाएगा छिद्रित हैं और अतिरिक्त PDMS डिवाइस से दूर छंटनी. नाइट्रोजन डिवाइस से दूर किसी भी अतिरिक्त मलबे झटका करने के लिए प्रयोग किया जाता है. इस बिंदु पर उपकरणों अब इस्तेमाल के लिए तैयार कर रहे हैं और या तो / अजीवाणु बनानेवाला पदार्थ क्लीनर प्लाज्मा या reversibly बस कांच कवर के ऊपर डिवाइस पर रखकर किया जा सकता है कांच कवर करने के लिए बाध्य के साथ Corning नंबर 1 कवर कांच को बंधुआ कर सकते हैं. डिवाइस की प्रतिवर्ती कांच के संबंध में एक अलग वीडियो कवर किया जाता है और पहले की आवश्यकता है कि डिवाइस या तो 70% इथेनॉल के साथ या autoclaving द्वारा निष्फल हो. प्लाज्मा के इलाज के उपकरणों sterilizes तो कोई आगे के इलाज के लिए आवश्यक है. तथापि, यह महत्वपूर्ण है, जब डिवाइस, प्लाज्मा उपचार के 10 मिनट के भीतर उपकरणों के लिए तरल जोड़ने जबकि अभी भी सतहों हाइड्रोफिलिक हैं प्लाज्मा इलाज. 10 मिनट से अधिक लंबी प्रतीक्षा की जा रही डिवाइस के लिए तरल जोड़ने के तरल डिवाइस में प्रवेश करने के लिए यह मुश्किल के लिए बनाता है है. न्यूरॉन उपकरणों आम तौर पर कर रहे हैं प्लाज्मा कांच और पीएच 8.5 borate बफर में 0.5 मिलीग्राम / मिलीलीटर पाली एल lysine (पीएलएल) को कवर ही सीमित तुरंत डिवाइस के लिए जोड़ा जाता है. PLL के साथ incubating तीन घंटे की एक न्यूनतम के बाद, उपकरणों dH2O पानी के साथ धो रहे हैं प्रत्येक धोने के बीच कम से कम 15 मिनट के साथ 3 बार की एक न्यूनतम. अगला, पानी निकाल दिया है और ताजा मीडिया डिवाइस के लिए जोड़ा जाता है. इस बिंदु पर डिवाइस के इस्तेमाल के लिए तैयार है. यह महत्वपूर्ण है इस बिंदु पर याद डिवाइस से हटाने के लिए सभी मीडिया कभी नहीं. हमेशा मुख्य चैनल में मीडिया छोड़ दें.
हम इस वीडियो में प्रदर्शन किया है कैसे बनाने के लिए एक PDMS microfluidic युक्ति है कि हम संस्कृति न्यूरॉन्स उपयोग करने के लिए तैयार अंदर युक्ति हमें एक शुद्ध axonal डिब्बे से microgrooves सेल शरीर, dendrites और axons की एक मिश्रण युक्त अलग अंश को प्राप्त करने के लिए अनुमति देता है . इन उपकरणों के शोधकर्ता विभिन्न उपचार के प्रभाव का अध्ययन करने के रूप में अच्छी तरह के रूप में axons पर बाहर ले शारीरिक चोट और निरीक्षण इन उपचार न्यूरॉन्स पर क्या प्रभाव के लिए एक मंच प्रदान करने की अनुमति देते हैं. डिवाइस भी संवर्धन न्यूरॉन्स कि परिवहन अध्ययन की सुविधा में मदद करता है के लिए आदेश की एक स्तर प्रदान करता है. इसके अलावा, microgrooves, जो अक्षतंतु डिब्बे से सेल संस्कृति डिब्बे अलग दो डिब्बों यह डिवाइस के दूसरे पक्ष उपचार के साथ सीधे प्रभावशाली बिना संभव डिवाइस के एक तरफ का इलाज करने के लिए बनाने के बीच fluidic अलगाव के लिए अनुमति देता है. इस संपत्ति के शोधकर्ता संकेत transduction और उपचार से परिणाम है कि परिवहन के रूप में इस तरह के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए अनुमति देता है.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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PDMS | Reagent | Dow Corning | Sylgard 184 with curing agent Please consult Dow Corning to find a vendor near you | |
Plasam Cleaner | Tool | Harrick | http://www.harrickplasma.com/ | |
Neural Basal Media | Reagent | Invitrogen | 21103-049 | Neural Basal Media is obtained by Invitrogen under their Gibco line of cell culture reagents. |
B27 | Reagent | Invitrogen | 17504-044 | B27 is a proprietary supplement available through Invitrogen under their Gibco line of cell culture reagents. |
Glutamax | Reagent | Invitrogen | 35050-061 | Glutamax is available through Invitrogen under their Gibco line of celll culture reagents. |
Cornig No. 1 Cover Glass | cover glass | Corning | Corning No. X2935 244 | Available through Fisher Scientific, Fish Catalog number 12-531D |
60 mm Petri Dish | Tool | Fisher Scientific | 08-757-13A | 60 mm polystyrene sterile petri dishes are used to house the device bound to glass. |
BD Falcon 50 ml Tube | Tool | BD Falcon | Falcon No. 352098 | Available through Fisher Scientific catalog number 14-959-49A |
BD Falcon 15 ml tube | Tool | BD Falcon | Falcon No. 352097 | Available through Fisher Scientific catalog number 14-959-70C |
Poly-L-Lysine | Reagent | Sigma | P-1274 | |
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