I denna video visar vi tekniken för mjuk litografi med polydimethyl siloxan (PDMS) som vi använder för att farbricate en mikroflödessystem anordning för odling nervceller.
I denna video visar vi tekniken för mjuk litografi med polydimethyl siloxan (PDMS) som vi använder för att tillverka en mikroflödessystem anordning för odling nervceller. Tidigare var en kiselskiva mönstrad med designen för neuron mikroflödessystem enheten med SU-8 och fotolitografi att skapa en mästare mögel, eller vad vi helt enkelt kallar för ett "master". Sedan häller vi kisel polymeren PDMS på toppen av befälhavaren som sedan botas genom uppvärmning av PDMS till 80 ° C i 1 timme. De PDMS bildar en negativ form av enheten. Den PDMS är sedan försiktigt klippa och lyfts bort från mastern. Hålen stansas där reservoarerna kommer att bli och överskottet PDMS putsas bort från enheten. Kväve används för att blåsa bort överflödigt skräp från enheten. Vid denna punkt enheterna är nu klar att användas och kan antingen limmas till Corning Nr 1 skyddsglas med en plasma autoklav / rengöringsmedel eller kan reversibelt bundna till täckglaset genom att helt enkelt placera enheten på toppen av locket glas. Den reversibla bindning av enheten för att glaset är täckt i en separat video och kräver först att enheten steriliseras antingen med 70% etanol eller genom autoklavering. Plasma behandla steriliserar enheterna så ingen ytterligare behandling krävs. Det är dock viktigt, när plasma-behandling enheterna, för att lägga till vätska för att enheterna inom 10 minuter plasma behandling medan ytorna är fortfarande hydrofil. Väntar längre än 10 minuter att lägga vätska till enheten gör det svårt för vätskan att komma in i enheten. Neuron enheter är vanligtvis plasma-bundet för att täcka glas och 0,5 mg / ml poly-L-lysin (PLL) i pH 8,5 boratbuffert läggs direkt till enheten. Efter minst 3 timmar inkuberar med PLL, är enheterna tvättas med dH2O vatten minst 3 gånger med minst 15 minuter mellan varje tvätt. Därefter är vattnet bort och färska media läggs till enheten. Vid denna punkt enheten är klar att användas. Det är viktigt att komma ihåg vid det här laget att aldrig ta bort all media från enheten. Lämna alltid media i den viktigaste kanalen.
I denna video har vi visat hur man gör och förbereda ett PDMS mikroflödessystem enhet som vi använder för att kulturen nervceller i. Enheten tillåter oss att få en ren axonal bråkdel separerade med microgrooves från facket som innehåller en blandning av cellens organ, dendriter och axoner . Dessa enheter kan forskaren att studera effekterna av olika behandlingar samt ge en plattform för att utföra fysisk skada på axoner och observera vilka effekter dessa behandlingar har på nervceller. Enheten ger också en nivå för att odla nervceller som hjälper till att underlätta transport studier. Dessutom tillåter microgrooves som separata facket cellodling från axonet facket, för fluidic isolering mellan de två kamrarna vilket gör det möjligt att behandla en sida av enheten utan att påverka den andra sidan av enheten direkt med behandling. Den här egenskapen kan forskaren att studera effekter som signaltransduktion och transport som är resultatet av behandlingen.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
PDMS | Reagent | Dow Corning | Sylgard 184 with curing agent Please consult Dow Corning to find a vendor near you | |
Plasam Cleaner | Tool | Harrick | http://www.harrickplasma.com/ | |
Neural Basal Media | Reagent | Invitrogen | 21103-049 | Neural Basal Media is obtained by Invitrogen under their Gibco line of cell culture reagents. |
B27 | Reagent | Invitrogen | 17504-044 | B27 is a proprietary supplement available through Invitrogen under their Gibco line of cell culture reagents. |
Glutamax | Reagent | Invitrogen | 35050-061 | Glutamax is available through Invitrogen under their Gibco line of celll culture reagents. |
Cornig No. 1 Cover Glass | cover glass | Corning | Corning No. X2935 244 | Available through Fisher Scientific, Fish Catalog number 12-531D |
60 mm Petri Dish | Tool | Fisher Scientific | 08-757-13A | 60 mm polystyrene sterile petri dishes are used to house the device bound to glass. |
BD Falcon 50 ml Tube | Tool | BD Falcon | Falcon No. 352098 | Available through Fisher Scientific catalog number 14-959-49A |
BD Falcon 15 ml tube | Tool | BD Falcon | Falcon No. 352097 | Available through Fisher Scientific catalog number 14-959-70C |
Poly-L-Lysine | Reagent | Sigma | P-1274 | |
New Item |