Detta protokoll visar hur retrogradely att märka retinal ganglion celler, och hur man därefter gör en optisk skada synnerven krossa för att analysera näthinnan överlevnad ganglion celler och apoptos. Det är en experimentell sjukdom modell för olika typer av optikusneuropati, inklusive glaukom.
Abstract
Skador på synnerven kan leda till axonal degeneration, följt av en gradvis död retinala ganglion celler (RGC: er), vilket resulterar i oåterkallelig synnedsättning. Exempel på sådana sjukdomar hos människor inkluderar traumatisk optisk neuropati och synnerven degeneration i glaukom. Det kännetecknas av typiska förändringar i synnerven huvudet, progressiv synnerven degeneration och förlust av retinal ganglion celler, om okontrollerat, vilket leder till synnedsättning och blindhet.
Synnerven krossa (ONC) skada mus modell är en viktig experimentell sjukdom modell för traumatiska optikusneuropati, glaukom, etc. I denna modell krossa skada på synnerven leder till gradvis retinal ganglion celler apoptos. Denna sjukdom modellen kan användas för att studera generella processer och mekanismer för neuronal död och överlevnad, vilket är nödvändigt för utveckling av terapeutiska åtgärder. Dessutom kan farmakologiska och molekylära metoder kan användas i denna modell för att identifiera och testa potentiella terapeutiska reagenser för att behandla olika typer av optikusneuropati.
Här ger vi en steg för steg demonstration av (I) Baseline retrograd märkning av retinal ganglion celler (RGC: er) på dag 1, (II) synnerven krosskada på dag 4, (III) Samla in retinae och analysera RGC överlevnad vid dag 11, och (iv) representativt resultat.
Protocol
Alla utrustning och reagenser som används är sterila. Alla djurförsök har godkänts av Djurens skötsel och användning kommittén (ACUC) i NEI / NIH (djurstudie protokoll NEI-570) och utfördes enligt NIH riktlinjer och föreskrifter. 1. Baseline Retrograd Märkning av Retinal ganglion celler (RGC: er) vid dag 1 Syftet med detta förfarande är att märka näthinnans ganglion celler retrogradely genom att injicera ett neuralt spårämne färg i överlägsen co…
Discussion
Synnerven krosskada mus modell är användbar för att studera processen RGC död och överlevnad. Denna modell är också ofta används för att undersöka effekterna av olika reagenser och gener RGC apoptos och överlevnad. En fördel med denna modell är att den har en hög grad av reproducerbarhet med minimala variationer.
Det är dock särskild försiktighet krävs i flera steg i denna modell. Först när du gör synnerven skada synnerven krossa, är det viktigt att inte använda för m…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Vår forskning stöds av Interna forskningsprogram NIH, National Eye Institute.