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Medicine

鼠标完成血瘀模型的下腔静脉血栓

Published: June 15, 2011 doi: 10.3791/2738

Summary

鼠标完成瘀下腔静脉血栓模型的静脉壁组织和血栓产生的可量化的数额。它已被证明有用的评估之间的静脉壁和闭塞的血栓,并在评估急性慢性发炎恶化的互动。

Abstract

静脉血栓栓塞(VTE)包括深静脉血栓形成(DVT)和肺栓塞(PE)。在美国(美国),高发病率和死亡率的利率使VTE的一个严重的健康问题 1-2 。心脏病和中风后,静脉血栓栓塞是第三大最常见的血管疾病 3 。仅在美国,就有影响,每年估计有900000人,与30万死亡发生每年 3 。一个可靠在体内动物模型,以研究这种疾病的机制是必要的。

使用鼠标完成瘀下腔静脉血栓模型的优点是几个。在小鼠模型,让有限的可用性测试剂的极少量的管理,大大降低了成本。最有前途的是与基因敲除,让特定的炎症和凝血因子功能划定小鼠的潜力。目前的分子检测允许静脉壁血栓,全血和血浆用于检测的定量。然而,这种模式的一个重大问题,涉及手术的大小的限制,血管脆性。此外,由于下腔静脉的小样品的重量(平均0.005克),它是必要的,以增加动物数量进行准确的统计分析,组织,血栓和血液检测,如实时聚合酶链反应(RT - PCR检测),免疫印迹,酶联免疫吸附试验(ELISA),酶谱法,静脉壁和血栓细胞分析,全血和血浆检测4-8。

血瘀模型的主要缺点是,血流量不足,抑制全身治疗药物的管理上的血栓和静脉壁的最大效应。

Protocol

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1。鼠标麻醉程序

  1. 动物从它们的笼子中被删除,和放置在手术前麻醉诱导在5%异氟醚和100%的氧气室气体感应,在每分钟0.5升(蒸发器控制)的流量。
  2. 小鼠镇静麻醉诱导室,室拆除,剃腹腹部与电动快船,或分庭内保持,如果使用一毛脱毛(1分)。
  3. 虽然仍在镇静,他们权衡,眼睛用无菌眼药膏润滑,然后放置在一个温暖的循环水加热装置,在全身麻醉下背recumbancy,用鼻锥,采用异氟醚和氧气。此时氧率降低到每分钟0.2升。
  4. 腹部洗必泰溶液喷洒(洗必泰双乙酸钠是迅速bacterialcidal和持久的),并用无菌纱布擦拭三次,直到手术部位是干净的。

2。鼠标显微手术和恢复过程

  1. 一个腹正中切口(2CM)是用虹膜剪刀通过皮肤和腹壁,露出腹部。一个无菌生理盐水浸泡2x2in的纱布是用来反映动物的左侧肠。鼠标限位到位,使下腔静脉(IVC)的可视化。
  2. 此时,一个isoflurance 2%和100%,为0.2升/分钟的氧率维持原有水平用于手术过程的其余部分。
  3. 促进使用无菌敷贴拭子和额外的细腻光圈半弧形组织钳钝性分离。在处理鼠标组织,因为他们是极其脆弱的,必须小心。进入腹腔后,用无菌生理盐水浸泡4x4in的纱布,以反映和exteriorize到无菌的悬垂性的肠子,从而使下腔静脉的可视化。
  4. 所有的下腔静脉回分支,从肾静脉至髂分叉,烧灼而偏科7-0非活性普理灵缝线结扎。
  5. 下腔静脉分离主动脉,肾静脉逊色。 7-0普理灵用于结扎下腔静脉。
  6. 开腹网站是封闭在两层的方式。我们的实验室使用5-0薇乔,合成缝合线,在连续模式,关闭腹壁。胶粘剂皮胶是用来关闭皮肤。有没有外部缝线拆除。
  7. 然后在一个单独的鼠笼恢复小鼠,观察手术后的下一个加热灯(最小距离24英寸离笼)(45分钟到2小时),然后返回到原来的公屋单位。可以使用止痛药和消炎药,如果它不干预研究的目的。科学理由隐瞒止痛药,兽医学,和ICUCA审批是必要的。我们的实验室已经发现,丁丙诺啡,0.05-0.1毫克/公斤SQ是一个极好的前和手术后的小鼠的镇痛。此外,利多卡因在4mg/kg(1%溶​​液0.4毫升/公斤),可在切口部位注入的全身性镇痛药时,可能会混淆实验结果。
  8. 从各实验组的深水动物进行的手术方式使用上述解剖,除不结扎或烧灼下腔静脉或任何排水分行。
  9. 执行安乐死,安乐死美国兽医医疗协会的准则啮齿类动物中提出的建议。

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Discussion

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鼠标完成瘀下腔静脉血栓模型上可以执行多个不同年龄的小鼠品系。该模型是最适合小鼠至少20克的重量。这种静脉血栓形成的动物模型,使调查研究静脉壁和闭塞的静脉血栓炎症之间的相互作用。从我们的经验,我们发现,每10个或更多组动物都需要获得重量血栓,静脉壁炎性细胞计数,静脉壁蛋白,静脉壁的基因表达,和全血或血浆活动分析组之间统计学意义检测。

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Disclosures

没有利益冲突的声明。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Isoflurane gas
Prolene 7-0 suture
Vicryl 5-0 suture
Skin glue
Eye lube
Nolvasan Solution or bacteriostatic solution
Stereomicroscope scope
MediCapture
Cotton Applicators
2x2 Gauze
Heating pad
Anesthetic machine
Glass bead instrument sterilizer
Micro surgical instruments
Abdominal Restrainers

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References

  1. Naess, I. A., Christiansen, S. C., Romundstad, P., Cannegieter, S. C., Rosendaal, F. R., Hammerstrom, J. Incidence and mortality of venous thrombosis: a population-based study. J Thromb Haemost. 5, 692-699 (2007).
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  8. Myers, D. D. J. r, Rectenwald, J. E., Bedard, P. W. Decreased venous thrombosis with an oral inhibitor of P selectin. J Vasc Surg. 42, 329-336 (2005).
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Cite this Article

Wrobleski, S. K., Farris, D. M., Diaz, J. A., Myers Jr., D. D., Wakefield, T. W. Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis. J. Vis. Exp. (52), e2738, doi:10.3791/2738 (2011).More

Wrobleski, S. K., Farris, D. M., Diaz, J. A., Myers Jr., D. D., Wakefield, T. W. Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis. J. Vis. Exp. (52), e2738, doi:10.3791/2738 (2011).

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