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Medicine

Modèle de souris complète stase de la veine cave inférieure thrombose

Published: June 15, 2011 doi: 10.3791/2738

Summary

La souris modèle complet stase de la veine cave inférieure thromboses rendements quantités mesurables de tissu paroi veineuse et thrombose. Il s'est avéré utile pour évaluer les interactions entre la paroi de la veine et le thrombus occlusif et à évaluer la progression de l'aiguë de l'inflammation chronique.

Abstract

La thromboembolie veineuse (TEV) comprend à la fois la thrombose veineuse profonde (TVP) et embolie pulmonaire (EP). Aux Etats-Unis (É.-U.), le taux élevé de morbidité et de mortalité font TEV une sérieuse préoccupation de santé 1-2. Après les maladies cardiaques et accidents vasculaires cérébraux, la TEV est la troisième 3 plus commune des maladies vasculaires. Aux États-Unis seulement, il ya un estimé 900 000 personnes touchées chaque année, avec 300 000 décès survenant chaque année 3. Une fiabilité dans un modèle animal in vivo pour étudier les mécanismes de cette maladie est nécessaire.

Les avantages d'utiliser la souris modèle complet stase de la veine cave inférieure thrombose sont multiples. Le modèle de souris permet de l'administration de très petits volumes de tester la disponibilité limitée des agents, réduisant considérablement les coûts. La plus prometteuse est le potentiel de souris avec KO du gène qui permettent les fonctions spécifiques des facteurs inflammatoires et de coagulation à être délimitées. Courant tests moléculaires permettant la quantification de la paroi veineuse, thrombose, le sang total, plasma et pour les dosages. Toutefois, une préoccupation majeure impliquant ce modèle est la taille de contraintes opérationnelles et la friabilité des vaisseaux. En outre, en raison du poids IVC petit échantillon (moyenne 0.005 grammes), il est nécessaire d'augmenter le nombre d'animaux pour l'analyse statistique exacte pour les tissus, thrombus, et des dosages sanguins tels que en temps réel la réaction en chaîne par polymérase (RT-PCR), Western Blot, immuno-enzymatique (ELISA), paroi de la veine zymographie, thrombus et l'analyse cellulaire, et le sang total et des dosages plasmatiques 4-8.

L'inconvénient majeur avec le modèle de stase, c'est que le manque de circulation sanguine inhibe l'effet maximal des administrés systémique agents thérapeutiques sur le thrombus et la paroi veineuse.

Protocol

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1. Procédures d'anesthésie de la souris

  1. Les animaux sont retirés de leur cage et placé dans une chambre d'induction anesthésique pré-opératoire pour l'induction de gaz à 5% d'isoflurane et de l'oxygène à 100%, à un débit de 0,5 litres par minute (vaporisateur contrôlée).
  2. Les souris sont sous sédation dans la chambre de l'induction anesthésique, retiré de la chambre et l'abdomen ventral est rasée avec une tondeuse électrique, ou maintenu dans la chambre si une épilation des cheveux est utilisé (1min).
  3. Alors qu'il était encore sous sédation, ils sont pesés, les yeux sont lubrifiés avec de la pommade ophtalmique stérile, puis placé dans un décubitus dorsal sur une eau chaude circulant dispositif de chauffage sous anesthésie générale, avec un cône de nez, en utilisant l'isoflurane et de l'oxygène. A ce point du taux d'oxygène est réduit à 0,2 litres par minute.
  4. L'abdomen est pulvérisé avec une solution de chlorhexidine (diacétate de chlorhexidine est rapidement bacterialcidal et persistante) et essuyé avec une gaze stérile à trois reprises ou jusqu'à ce que le site chirurgical est propre.

2. Souris micro-chirurgicales et les procédures de récupération

  1. Une incision médiane ventrale (2cm) est faite avec des ciseaux iris à travers la peau et la paroi abdominale exposer l'abdomen. Un stériles de gaze imbibée salines 2x2in est utilisé pour refléter les intestins à gauche de l'animal. Un dispositif de retenue de la souris est mis en place, permettant la visualisation de la veine cave inférieure (VCI).
  2. A ce point, un niveau d'entretien des isoflurance 2% et le taux d'oxygène à 100% de 0,2 litres / min est utilisée pour le reste de la procédure chirurgicale.
  3. Dissection est facilitée à l'aide d'un écouvillon applicateur stérile et extra délicats iris pince moitié tissus courbes. Des précautions doivent être prises dans la manipulation des tissus de souris car elles sont extrêmement fragiles. En entrant dans la cavité abdominale, de façon stérile imprégnée de sérum physiologique 4x4in trempés à réfléchir et à extérioriser les intestins sur un champ stérile, permettant ainsi la visualisation de la VCI.
  4. Toutes les branches de retour IVC, des veines rénales à la bifurcation iliaque, sont cautérisées tandis que les branches latérales sont ligués avec 7-0 points de suture Prolène non réactif.
  5. L'IVC est séparée de l'aorte, juste inférieur aux veines rénales. 7-0 prolène est utilisé pour ligaturer la veine cave inférieure.
  6. Le site est fermé laparotomie dans un mode bi-couche. Notre laboratoire utilise 5-0 Vicryl, une suture synthétique, dans un motif continu de fermer la paroi abdominale. Colle de peau adhésif est utilisé pour fermer la peau. Il n'y a pas sutures externes pour l'enlèvement.
  7. Les souris sont ensuite récupérés dans une cage de souris individuelle, observée en post-opératoire (45 minutes à 2 heures) sous une lampe chauffante (distance minimum de 24-pouces loin de la cage), puis retournèrent à leurs unités de logement d'origine. Médicaments contre la douleur et les agents anti-inflammatoires peuvent être utilisés si elle n'interfère pas avec l'objectif de l'étude. Justification scientifique à retenir médicaments contre la douleur, vétérinaire, et l'approbation ICUCA sont nécessaires. Notre laboratoire a montré que la buprénorphine, 0,05-0,1 mg / kg SQ est un excellent analgésique pré-et post-opératoire pour les souris. En outre, lidocaïne au 4mg/kg (0,4 ml / kg d'une solution à 1%) peuvent être infusés dans le site d'incision lors analgésiques systémiques peuvent brouiller les résultats expérimentaux.
  8. Sham animaux de chaque groupe expérimental soumis à la dissection plus, utilisés pour l'approche chirurgicale, sauf la VCI ou les branches de drainage ne sont pas ligaturées ou cautérisée.
  9. L'euthanasie est effectuée en conformité avec les recommandations énoncées par l'American Veterinary Medical Association Directives sur l'euthanasie pour les rongeurs.

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Discussion

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Le modèle de souris complète stase de la veine cave inférieure thrombose peut être effectué sur plusieurs souches de souris d'âges différents. Le modèle est le plus adapté à la souris d'au moins 20 grammes en poids. Ce modèle animal de thrombose veineuse permet aux enquêteurs d'étudier les interactions entre les inflammatoire de la paroi veineuse et le thrombus veino-occlusive. De notre expérience, nous avons constaté que plus de 10 animaux par groupe sont nécessaires pour obtenir une signification statistique entre les groupes pour des poids de thrombus, veine compte paroi cellulaire inflammatoire, la protéine paroi de la veine, l'expression des gènes paroi veineuse, et toute analyse de sang ou de plasma pour l'activité dosages.

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Disclosures

Aucun conflit d'intérêt déclaré.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Isoflurane gas
Prolene 7-0 suture
Vicryl 5-0 suture
Skin glue
Eye lube
Nolvasan Solution or bacteriostatic solution
Stereomicroscope scope
MediCapture
Cotton Applicators
2x2 Gauze
Heating pad
Anesthetic machine
Glass bead instrument sterilizer
Micro surgical instruments
Abdominal Restrainers

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References

  1. Naess, I. A., Christiansen, S. C., Romundstad, P., Cannegieter, S. C., Rosendaal, F. R., Hammerstrom, J. Incidence and mortality of venous thrombosis: a population-based study. J Thromb Haemost. 5, 692-699 (2007).
  2. White, R. H., Keenan, C. R. Effects of race and ethnicity on the incidence of venous thromboembolism. Thromb Res. 123, Suppl 4. S11-S17 (2009).
  3. Heit, J. A. The epidemiology of venous thromboembolism in the community. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, 370-372 (2008).
  4. Henke, P. K., Varga, A., De, S. Deep vein thrombosis resolution is modulated by monocyte CXCR2-mediated activity in a mouse model. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24, 1130-1137 (2004).
  5. McDonald, A. P., Meier, T. R., Hawley, A. E. Aging is associated with impaired thrombus resolution in a mouse model of stasis induced thrombosis. Thromb Res. 125, 72-78 (2010).
  6. Myers, D., Farris, D., Hawley, A. Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis. J Surg Res. 108, 212-221 (2002).
  7. Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis. J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).
  8. Myers, D. D. J. r, Rectenwald, J. E., Bedard, P. W. Decreased venous thrombosis with an oral inhibitor of P selectin. J Vasc Surg. 42, 329-336 (2005).
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Wrobleski, S. K., Farris, D. M., Diaz, J. A., Myers Jr., D. D., Wakefield, T. W. Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis. J. Vis. Exp. (52), e2738, doi:10.3791/2738 (2011).More

Wrobleski, S. K., Farris, D. M., Diaz, J. A., Myers Jr., D. D., Wakefield, T. W. Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis. J. Vis. Exp. (52), e2738, doi:10.3791/2738 (2011).

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