Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Windowing куриные яйца целях развития исследований

doi: 10.3791/306 Published: October 1, 2007

Summary

Легкость доступа к эмбрион позволило эксперименты по карте ячейки судьбы, используя несколько подходов, в том числе куриных перепела химеры и координационные маркировке краской. В этой статье мы показываем, одно яйцо подготовки метод, который был оптимизирован в течение долгого времени выживания.

Abstract

Изучение развития был значительно способствовало использование куриного эмбриона в качестве экспериментальной модели. Легкость доступа к эмбрион позволило эксперименты по карте ячейки судьбы, используя несколько подходов, в том числе куриных перепела химеры и координационные маркировке краской. Кроме того, оно позволяет для молекулярных возмущения нескольких типов, в том числе размещение белка покрытием бисером и введение плазмидной ДНК с использованием в ово электропорации. Эти эксперименты были получены важные данные о развитии центральной и периферической нервной систем. Для многих из этих исследований, необходимо, чтобы открыть яичной скорлупы и повторного его, не возмущающие роста эмбриона. Эмбриона могут быть рассмотрены на последующих стадиях развития путем повторного открытия яичной скорлупы. Хотя Есть несколько отличных методов для открытия куриных яиц, в этой статье мы покажем один метод, который был оптимизирован в течение долгого времени выживания. В этом методе, яйцо лежит на боку и маленькое окошко режется в оболочке. После экспериментальной процедуры, оболочка используется для покрытия яйца в течение всего срока его развития. Прозрачная пластиковая лента вышележащих яичная скорлупа защищает эмбрион и помогает сохранить увлажнение в течение оставшейся части инкубационного периода. Этот метод был использован, начиная с двух дней инкубации и позволило выживание через зрелые эмбриональных возрастов.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Удалить яйца из инкубатора

  1. Поддерживать при 37 ° С при относительной влажности установлен выше 60%.
  2. Удалить яйца; свою очередь, яйца 90 ° так, чтобы большая база лежит горизонтально.

2. Тампон яйца для стерилизации

  1. Пропитайте стек нестерильных марлевых с 70% этанола.
  2. Используйте 2:58 штук тампоном до 5 яиц. Отменить когда марли загрязнен.

3. Подготовка сайта белка удаления

  1. Вырезать и место 1 "х 1" кусок ленты 3М пластиковые только что вышли из базы для защиты района, где альбумин будет длительным.

4. Удаление белка

  1. Используйте точки ножницы, чтобы сделать небольшое отверстие в середине ленты.
  2. Использование 10 мл шприц с 18 калибра, 1-дюймовый иглы, медленно дрель иглу через отверстие, сделанное от ножниц.
  3. Drive иглу вниз на 45 ° C углом к ​​нижней части яйца.
  4. Наклона иглы к центру и составляет от 3 до 4 мл белка.

5. Windowing

  1. Отрежьте 3 "х 3" пластиковая лента и растянуть его, чтобы поместиться на верхней части яйца. Расширение углах квадрата вокруг закругленными концами горизонтальной поверхности яйца, стараясь не тянуть слишком сильно. Потяните ленту так, чтобы она плотно прилегает к поверхности яйца без каких-либо складок.
  2. Используя пару острыми прямыми 4 "ножницы рассечение, твист отверстие в центре нижней части области, где лента была сделана. Медленно руководство нижней лезвие ножниц в яйцеклетку будучи уверенным, держать Советы против внутри оболочкой. Прямой клинок к основанию и медленно начинают резать оболочку. Действовать в направлении против часовой моды, останавливаясь только до достижения верхнего центра. Удалите ножницы и повторить идет в противоположном направлении, пока только маленький кусочек яйцо остается на месте. Проверьте, чтобы яйцеклетка оплодотворяется. Закрой окно.

6. Закрытие, открытие и герметизации яйцо.

  1. Отрежьте около 2-3 "длиной 1 / 2" широкой лентой пластика и закрыть окно, поэтому он подходит обратно в дыру, которая была вырезана. Возьмите еще 1 х 1 "кусок ленты и печатью отверстие, из которого яйцо было осушено. Используйте пару щипцов возобновить яйцо делать какие-либо манипуляции. Когда вы будете готовы вернуться яйца в инкубатор, вырезать кусок ленты, достаточно большой, чтобы запечатать окна и охватывают всю горизонтальную поверхность яйца.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Этот метод позволяет в течение долгого времени выживания следующих экспериментальных манипуляций. Например, краска маркировки исследования позволили выживание E10 или поздно в исследование судьбы отображения (1). Кроме того, он был использован для исследований в ово электропорации, которые обеспечивают изменение уровня экспрессии генов и развитие необходимых для перехода к поздних стадий развития (2-6). Это оконная техника может быть использована в сочетании с какой-либо процедуры, которая требует выживаемость после манипуляций с эмбрионом.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Rotating incubator Profi Maintain at 37° Degrees with relative humidity set above 60%
70 % EtOH
gauze
3M plastic tape
10cc syringe 1/egg
18G needles 1½ inch needle, 1/syringe
Dissection scissors 4" sharp straight blades
Fertilized Eggs

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Cramer, K. S., Fraser, S. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 224, 138-151 (2000).
  2. Cramer, K. S., Bermingham-McDonogh, O., Krull, C. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 269, 26-35 (2004).
  3. Cramer, K. S., Cerretti, D. P., Siddiqui, S. A. Dev Biol. 295, 76-89 (2006).
  4. Huffman, K. J., Cramer, K. S. Dev Neurobiol. 67, 1655-1668 (2007).
  5. Krull, C. E. Dev Dyn. 229, 433-439 (2004).
  6. Gerlach-Bank, L. M., Cleveland, A. R., Barald, K. F. Dev Dyn. 229, 219-230 (2004).
Windowing куриные яйца целях развития исследований
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

J. Korn, M., S. Cramer, K. Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies. J. Vis. Exp. (8), e306, doi:10.3791/306 (2007).More

J. Korn, M., S. Cramer, K. Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies. J. Vis. Exp. (8), e306, doi:10.3791/306 (2007).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter