Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Immunology and Infection

השימוש מלכודת אופטית לחקר מארח הפתוגן אינטראקציות עבור הדמיה דינמי תא חי

doi: 10.3791/3123 Published: July 28, 2011

Summary

השיטה מתוארת בנפרד לבחור, לתפעל, ומזיקים התמונה לחיות באמצעות מלכודת אופטי מצמידים את מיקרוסקופ דיסק מסתובב. מלכודת אופטי מספק שליטה במרחב ובזמן של אורגניזמים ומקומות אותם סמוך לתאי המארח. מיקרוסקופ פלואורסצנטי לוכדת אינטראקציות אינטר דינמי עם הפרעה מינימלית תאים.

Abstract

תא דינמי הדמיה לחיות מאפשר ראיה ישירה בזמן אמת אינטראקציות בין תאים של המערכת החיסונית 1, 2, עם זאת, חוסר שליטה במרחב ובזמן בין תא חיידק phagocytic ויש שניתנו ממוקד תצפיות לתוך אינטראקציות התגובה הראשונית של המארח פתוגנים קשה. מבחינה היסטורית, אירועים לפנות אינטר כגון phagocytosis 3 כבר צילמו על ידי ערבוב של שני סוגי התאים, ולאחר מכן ברציפות סריקת השדה של נוף למצוא קשר אינטר סרנדיפי בשלב המתאים של אינטראקציה. אופי סטוכסטיים של אירועים אלה הופך את התהליך מייגע, וקשה לצפות באירועים מוקדם או חולף על קשר תאים תאים על ידי גישה זו. שיטה זו מחייבת מציאת זוגות סלולריים, כי הם על סף מגע, והתבוננות לפנות אותם עד שהם המושלם שלהם, או לא. כדי לענות על המגבלות האלה, אנו משתמשים השמנה אופטי כשיטה, לא פולשנית ולא הרסנית, אבל מהיר ויעיל למצב התאים בתרבית.

מלכודות אופטי, או פינצטה אופטית, מנוצלים ויותר המחקר הביולוגי כדי ללכוד פיסית לתפעל תאים אחרים מיקרון חלקיקים בגודל בשלושה ממדים 4. לחץ קרינה נצפתה הראשון ליישם מערכות פינצטה אופטית ב -1970 5, 6, ושימש הראשון לשלוט דגימות ביולוגיות בשנת 1987 7. מאז, פינצטה אופטית הבשילו לתוך הטכנולוגיה כדי לבחון מגוון של תופעות ביולוגיות 8-13.

אנו מתארים שיטה 14 כי ההתקדמות לחיות הדמיה התא על ידי שילוב של מלכודת אופטי עם דיסק מסתובב מיקרוסקופיה confocal עם בקרת טמפרטורה ולחות כדי לספק שליטה במרחב ובזמן מעולה של אורגניזמים פתוגניים בסביבה פיזיולוגיים כדי להקל על אינטראקציות עם תאים המארח, כפי שנקבע על ידי המפעיל. Live, אורגניזמים פתוגניים כמו קנדידה אלביקנס, אספרגילוס fumigatus, אשר יכול לגרום פוטנציאל קטלני, זיהומים פולשניים בקרב אנשים immunocompromised 15, 16 (למשל איידס, כימותרפיה, השתלת איברים לחולים), היו לכודים אופטית באמצעות שאינו הרסני בעוצמות לייזר ועבר סמוך מקרופאגים, אשר יכול phagocytose את הפתוגן. רזולוציה גבוהה, המשודר בסרטים אור פלואורסצנטי מבוססי הקים את היכולת להתבונן באירועים הראשונים של phagocytosis בתאים חיים. כדי להדגים את תחולתם רחבה באימונולוגיה, העיקרי מתאי T נלכדו גם מניפולציות כדי ליצור סינפסות עם אנטי CD3 microspheres מצופה in vivo, וגם זמן לשגות הדמיה של היווצרות הסינפסה הושג גם. על ידי מתן שיטה להפעיל שליטה מרחבית קנס של פתוגנים לחיות ביחס תאים חיסוניים, אינטראקציות הסלולר יכול להיות שנתפסו על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי עם הפרעה מינימלית תאים יכולה להניב תובנה עוצמה לתוך התגובות המוקדמות של חסינות מולדת ובעלי כושר הסתגלות.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. תרבות תנאים של פתוגנים עבור השמנה אופטי

  1. לגדול א fumigatus (B-5233/RGD12-8) על חצי מוצק מדיה אגר המכיל SBD (Sabouraud דקסטרוז) בשעה 30 ° C במשך 3 ימים.
  2. לגדול C. אלביקנס (SC5314) ב YPD (שמרים, Peptone דקסטרוז) תרבות נוזל המכיל 100 מיקרוגרם / מ"ל אמפיצילין לילה חממה שייקר ב 30 ° C.

2. הכנה של פתוגנים תיוג פלורסנט

  1. קציר כמות רצויה של פתוגנים להעביר צינור 1.5 תגובה מ"ל.
  2. הוספת 300 μL של פוספט שנאגרו מלוחים (PBS) אל צינור התגובה.
  3. Sonicate התערובת למשך 30 שניות.
  4. צנטריפוגה בסל"ד 4000 למשך 1 דקה.
  5. לשאוב supernatant, עוזב גלולה באין מפריע.
  6. חזור על (2.4) ו (2.5) עוד פעמיים.
  7. Resuspend ב 500μL של PBS.

3. תיוג של פתוגנים עם צבע פלואורסצנטי

  1. ממיסים 1 מ"ג של צבע של עניין (למשל אלקסה פלואוריד 488, Alexa פלואוריד 647) ב dimethylformamide 100 μL (DMF) (בריכוז של 10 מ"ג / מ"ל).
  2. הוסף 3 μL תערובת של צבען צינורות התגובה המכיל פתוגנים שטף.
  3. סיבוב או להתנער מדגם ב 37 מעלות צלזיוס במשך שעה 1.
  4. לשטוף עם מדגם PBS 3X ידי centrifuging בסל"ד 4000 למשך 1 דקה.
  5. Resuspend ב 300 μL של PBS.

4. מסיק T-תאים מהדם כולו

  1. השג דם שלם (טרי).
  2. דם חם, PBS + 2% עוברית שור בסרום (FBS), ו histopaque לטמפרטורת החדר.
  3. הוסף CD4 + RosetteSep האדם העשרה T קוקטייל נייד ב μL 50 / מ"ל ​​של דם מלא.
  4. סובב מדגם דגירה במשך 20 דקות בטמפרטורת החדר.
  5. מדולל מדגם עם נפח שווה של PBS + 2% FBS ומערבבים בעדינות.
  6. שכבה מדוללת מדגם על גבי histopaque, מזעור ערבוב
  7. צנטריפוגה במשך 20 דקות ב 1200 XG בטמפרטורת החדר עם הבלם משם.
  8. הסרת תאים מועשר.
  9. לשטוף את התאים מועשר 2x עם פתרון PBS + FBS 2%.
  10. Lyse כדוריות דם אדומות למשך 2 דקות עם תא דם אדום חיץ lysing
  11. הוסף 10 מ"ל של PBS + 2% FBS ו lysed צנטריפוגות אדום דם תאים בסל"ד 1500 למשך 5 דקות
  12. לשאוב supernatant, נזהר לא להפריע גלולה
  13. Resuspend בתקשורת IMDM המכיל 10% בסרום שור העובר

5. הכנת 264.7 מקרופאגים הגלם לתוך שקופיות קאמרית

  1. הכן DMEM (מדיום שונה Dulbecco של הנשרים) להכיל 10% FBS, 1% פניצילין / סטרפטומיצין, ו 1% L-גלוטמין.
  2. מדיה חמים, טריפסין, ו pbs באמבט חם 37 ° C.
  3. לשטוף 2x צלחת עם PBS
  4. לשאוב PBS בין לשטוף כל אחד.
  5. הוסף 5 מ"ל טריפסין לצלחת כדי לכסות את פני השטח (עבור צלחת 10 ס"מ תרבות רקמות).
  6. דגירה של 5 דק 'ב 37 ° C.
  7. לדפוק בעדינות לצד הצלחת לנתק את התאים מפני השטח צלחת. היזהר לא להתיז טריפסין מחוץ לצלחת.
  8. הוסף 5 מ"ל או כמות זהה של התקשורת טריפסין.
  9. לשאוב תערובת לתוך צינור התגובה.
  10. צנטריפוגה XG ב 1000 במשך 3 דקות.
  11. לשאוב התקשורת, נזהר לא להפריע גלולה.
  12. Resuspend ב 10 מ"ל של התקשורת.
  13. הוספת 400 μL של התקשורת לתא אחד של השקופית קאמרית.
  14. הוסף 5 μL ההשעיה תא לתא אחד.
  15. לגדול בין לילה באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס עם 5% CO 2.

6. תוספת של פתוגנים לדגום

  1. Pipet μL 5-10 של פתוגנים שכותרתו עניין (מ צעדים 1-3) אל תוך החדר.
  2. מערבבים היטב על ידי pipeting למעלה ולמטה, נזהר שלא לגעת בקרקעית של החדר להפריע מקרופאגים דבק.

7. טוען מדגם על ספינינג מיקרוסקופ דיסק confocal (וידאו, סריקה באמצעות רכיבים)

  1. הפעל את כל הרכיבים על ספינינג מיקרוסקופ דיסק confocal.
  2. יישר מיקרוסקופ הדמיה DIC.
  3. הסר שקופיות קאמרית מן החממה.
  4. הוסף שקף קאמרית לשלב מיוחדים.
  5. הסרת החלק העליון של השקופית קאמרית (הכרחי הדמיה DIC).

8. הכנה השמנה אופטי (וידאו, סריקה באמצעות רכיבים איך זה להשתלב מיקרוסקופ)

  1. הפעל את תריס עבור מלכודת אופטית.
  2. הפעלת IR לייזר.
  3. תריס פתוח (על הלייזר) מלכודת אופטית.
  4. אשר תריס מול IR לייזר סגור על ידי סימון עם כרטיס IR.

9. בחירה מניפולציה של הפתוגן עם מלכודת אופטית

  1. פוקוס על מקרופאגים בשקופית דבק.
  2. מצא פתוגנים תנודות בחופשיות פתרון הסמוכים מקרופאגים.
  3. העבר בשלב כזה הפתוגן הוא בקרבת המלכודת.
  4. פתיחת תריס להעסיק את מלכודת.
  5. העבר מדגם להביא מקרופאגים במגע עם המלכודת נייחped הפתוגן.
  6. תמונה עם דיסק מסתובב מיקרוסקופ confocal, לא DIC, הקרינה, או שילוב של שניהם. בדרך כלל, השמנה נעשית DIC, בזמן אמת הדמיה נעשה עם פלואורסצנטי.

10. נציג תוצאות:

כדי להפעיל שליטה במרחב ובזמן מלא של פתוגנים וחרוזים ב in vivo ו בסביבה חוץ גופית, עיצבנו מנגנון שהותקן השמנה משולב על גבי מיקרוסקופ דיסק ספינינג confocal (סכמטי באיור. 1). במלוא העוצמה, לייזר סיפק 350 מגוואט של חשמל לאחר צימוד האור עם רכיבים אופטיים שונים במנגנון מלכודת אופטית, ~ 80 mW של כוח על המטרה TIRF, כפי שנמדד עם מד כוח, שימש בצורת מלכודת בחדר.

על מנת עמדה חפץ בחדר יחסי האובייקט לכודים, בשלב הועבר תוך כדי החזקת חפץ נייח עם לכודים לייזר השמנה. בשלב הועבר במהירויות די איטי, כך כוח הגרר על החלקיקים הלכודים לא יעלה על כוח השמנה מקסימלית.

אוכלוסיות נפרדות של C. albicans (גודל טיפוסי - ~ 5 מיקרומטר) תויגו עם כל אחד משלושת הצבעים (AF488, AF568, ו AF647, המתאים ירוק, כחול, אדום באיור, בהתאמה) כדי להמחיש הדמיה עם ערוצי הקרינה מרובים ובמקביל אופטית השמנה הפתוגן. יחיד ג אלביקנס נלכד ועבר בדפוס מרובע באמצעות מקבץ של שמרים אחרים, כפי שעולה חצי אפור, הוכחת את היכולת ללכוד ולתפעל את המיקום הספציפי של הפתוגן יחיד שנבחר על ידי המפעיל גם בסביבה צפופה (איור 2 א) .

כדי להמחיש עוד יותר את הגמישות של מערכת זו כדי ללכוד את הצורה מורפולוגיות שונות הוצגו על ידי אורגניזמים פתוגניים, פינצטה אופטית גם היה מסוגל להחזיק למקם ג אלביקנס חלקיק עם pseudohyphae. ג אלביקנס שכותרתו עם AF647 (אדום) היה נע לאורך מסלול כפי שתואר על ידי החץ הלבן והניח ליד התאים GFP-LC3-RAW ניאון (איור 2B). החלק שמרים של C. אלביקנס נלכד כמו pseudohyphae השתרך.

אנו ממוקמים גם אספרגילוס fumigatus ליד תא עכבר RAW macrophage על מנת לנתח את מסגרת הזמן המוחלט של phagocytosis עם הקו הזה תא הפתוגן מסוים (איור 3A). לאחר הפתוגן יוצר קשר עם התא, המלכודת כבוי, ואת זמן לשגות הדמיה מועסק לצפות אירועים הסלולר עוקבות (איור 3B). מלכודת אופטי שימש גם כדי ללכוד העיקרי T-תאים מבודדים מהדם וביים הסמוכים חרוזים מצופים נוגדני אנטי CD3 על מנת תא-T כדי ליצור הסינפסה האימונולוגית עם חרוז (איור 4), המופע נוספים צדדיות ישירות מלכודת מניפולציה בתאי מערכת החיסון.

איור 1
באיור 1. סקירה כללית סכימטי של מלכודת אופטי משולב ספינינג דיסק ההתקנה confocal מיקרוסקופ. כלי הפריסה מראה את הקורה השמנה (סגול), דרך תאורה עבור brightfield הדמיה (כתום), קרן עירור פלואורסצנטי (אדום), פליטת הקרינה (ירוק), תשלום מצמידים התקן (CCD) המצלמה, אלקטרונים הכפלת מכשיר תשלום מצמידים (EM- CCD) המצלמה, מראות dichroic (D1 ו-D2), מראות (M1 ו M2), ועדשות (L1, L2, L3, L4). כל הרכיבים האחרים של המערכת confocal מלכודת מיקרוסקופ מסומנים בתרשים.

איור 2
איור 2. (א) תמונות של הקרינה לכודים מניפולציות ג אלביקנס. לכודים fluorescently שכותרתו (אלקסה פלואוריד 488 (AF488), כחול) האורגניזם בשטח של כ fluorescently שכותרתו אחרים אלביקנס (AF568, ירוק AF647, אדום). הבמה נע סביב החלקיקים הלכודים, CA כחול כפי שצוין על ידי החצים אפור. (ב) לכודים פסאודו hyphal צורה של C. אלביקנס ליד תא GFP LC3-RAW. טופס psuedohyphal שכותרתו fluorescently של CA (אדום, AF647) לכודים אופטית ועבר סמוך GFP-LC3 הביע מקרופאגים RAW. האורגניזם CA הוא נע לאורך מסלול כפי שצוין על ידי החץ הלבן.

איור 3
איור 3. השמנה ומיצוב של א ' fumigatus ליד תא RAW phagocytic. (א) brightfield תמונות של א 'לכוד fumigatus, כפי שצוין על ידי החץ הלבן, עברה ואת מיקומו לאורך השביל כפי שצוין על ידי החץ האדום. הפתוגן לכודים מעט מחוץ לפוקוס בגלל המלכודת דוחפים את האורגניזם מעט מעל המטוס מוקד א. fumigatus מועבר עד ממוקמת סמוך לתא הגלם המבוקש. (ב) שפעתהדמיה של orescence phagocytosis א fumigatus על ידי תא RAW. לאחר הפתוגן לכודים ממוקם ליד תא הגלם, תהליך phagocytosis מופעל. בשעה 30 s, הממברנה של התא RAW מתחיל לשנות צורה כוס סביב החלקיקים. בשעה 60 s, כוס נוצר במלואו. מ -90 ל 150s, א ' fumigatus נבלע, ועל ידי 180 s, החלקיק מופנם במלואו

איור 4
איור 4. השמנה העיקרי T-cell כדי ליצור סינפסה עם אנטי CD3 חרוזים מצופים. DIC תמונות של ראשוני T-cell עבר על ידי מלכודת אופטית למיקום ליד מצופה חרוז עם נוגדן אנטי CD3. לאחר מכן התא מהווה סינפסה החיסונית, אשר לא ניתן להבחין בקלות את התמונות.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

בעבודה זו אנו משתמשים מלכודת אופטי ללכוד פתוגנים עם ממדים בין 3 מיקרומטר - 5 מיקרומטר. אמנם פתוגנים עניין במעבדה שלנו בדרך כלל יש ממדים אלה, מערכת פינצטה אופטית המתוארת כאן היא גמישה ללכוד מגוון רחב של גדלים. ואכן מלכודות אופטיות שימשו כדי ללכוד חלקיקים הנעים בין אטומים בודדים לתאי כ 10 מיקרומטר קוטר. בנוסף, מערכת זו השמנה אופטי הצליח ללכוד חלקיקים של צורות שונות: כדוריים, אליפטיים, חלקיקים מאורכים מאוד, וזה שימושי כאשר עובדים עם פתוגנים ביולוגיים.

עם היווצרות, שיטה phagocytosis ו סינפסה זו, בזמן אמת, נחקרו, ושינויים מבניים על פני הסלולר נותח. על ידי חלקיקים מיצוב ליד תא, פתוגנים לחיות נשלטו מניפולציות כדי להפעיל את מכונות phagocytic וללמוד את התגובה החיסונית בתאים חיים ולנטר את תחילת מוחלטת של אירוע באמצעות מהלך שלם של phagocytosis. כתוצאה מכך, האבולוציה כולה של אירועים phagocytic ומכונות ניתן למדוד במדויק. עקבנו phagocytosis א fumigatus כמו הפתוגן ממוקם ליד macrophage, וצפו את השינויים הממברנה הראשונית החלקיק נבלע. הצלחנו למדוד במדויק את מסגרת הזמן של כל תהליך זה על ידי שליטה כשרצינו להתחיל בתהליך עם המיקום של הפתוגן. טכניקה זו הורחבה גם להיווצרות סינפסה התבוננות ראשונית על ידי T-תאים. פינצטה אופטית עבר תא T-ליד נוגדן אנטי CD3 חרוז מצופה, היווצרות הסינפסה ניתן לצפות בזמן אמת.

למיטב ידיעתנו, שיטה זו היא הראשונה לשלוט ולתפעל פתוגן ליד תא phagocytic, וב conjuction עם מיקרוסקופיה confocal, שימש כדי להקליט לדמיין את תחילת הסוף המוחלט של phagocytosis בשלושה ממדים עם עקיפה מוגבל spatio- זמני החלטה. הטכנולוגיה נוצל גם לשלוט ולתפעל העיקרי מתאי T ללמוד סינפסות החיסונית, הממחישות את הרבגוניות של הכלי הזה עבור מגוון של יישומים ביולוגיים. המערכת שלנו מספקת five אורכי גל עירור, כולל עירור UV, המאפשר הדמיה של מגוון רחב של fluorophores. מנגנון ההשמנה תופסת 4.5 2 טביעת רגל, יכול להיות משולב על הרבה מיקרוסקופים epifluorescent ו confocal קונבנציונאלי. אמנם זה היה המכשיר מיועד בעיקר מניפולציה אובייקט, שינויים בעתיד יכלול כוח לייזר גבוה יותר, חרוז זיהוי היכולות מיקום, וכו 'יאפשר אפיון של כוחות biomechanical באינטראקציה תא הפתוגן.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

Acknowledgments

עבודה זו נתמכה על ידי החולים הכללי במסצ'וסטס מחלקת קופות לרפואה פנימית (JMT, MKM, MLC, JMV), המכון הלאומי הדמיה ביו Bioengineering מענק T32EB006348 (CEC), המרכז הכללי של מסצ'וסטס של החולים לקרן חישובית אינטגרטיבית פיתוח ביולוגיה AI062773 ( RJH), מענקים AI062773, DK83756 ו DK 043,351 (RJX), NSF 0,643,745 (MJL), NIH R21CA133576 (MJL), ואת המכון הלאומי לאלרגיה ומחלות זיהומיות (NIAID) של המכון הלאומי לבריאות (NIH) AI057999 (JMV ). אנו מודים ניקולס C. Yoder לדיונים מועיל, צ'רלס פלטס (RPI, Inc) לקבלת סיוע טכני.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
A. fumigatus Albino strain, B-5233/RGD12-8, gift from K.J. Kwon-Chung, NIH
C. albicans SSY50-B mutant, gift from Eleftherios Mylonakis, MGH; SC5314 strain, gift from Gerald Fink, Whitehead Institute
Alexa Fluor 488 Invitrogen A20000
Alexa Fluor 647 Invitrogen A20006
dimethylformamide Sigma-Aldrich D4551
Fresh blood Gift from R.J.W. Heath, MGH, HMS
Nikon inverted microscope Nikon Instruments Model Ti-E
Trapping laser, ChromaLase Blue Sky Research CLAS-106-STF02-02
Fluorescence excitation laser Coherent Inc. Model Innova 70C
Breadboards for trapping components Thorlabs Inc. MB1224, MB1218
Optical air table Technical Manufacturing Corp.
Electronic shutter with pedal control Uniblitz Purchased from Vincent Associates, Rochester, NY
Singlemode optical fiber Oz Optics PMJ-3S3S-1064-6
Fiber positioner Thorlabs Inc. PAF-X-5-C
Fiber collimator Oz Optics HPUCO-23-1064-P-25AC
Lenses for telescope Thorlabs Inc. AC254-150-B Focal length of 150 mm
Translation stages (x, y, z) Newport Corp. M-461-XYZ
IR dichroic mirror Chroma Technology Corp. ET750-sp-2p8
Objective lens (100X) Nikon Instruments NA = 1.49, oil immersion, TIRF objective
Confocal head Yokogawa CSU-XI
Polarizer Nikon Instruments MEN51941
Wollaston prism Nikon Instruments MBH76190
EM-CCD camera Hamamatsu Corp. C9100-13
CCD camera (ORCA ER) Hamamatsu Corp. C4742-80-12AG
Filter wheel Ludl 99A353
Filter wheel Sutter Instrument Co. LB10-NWE
Chambered coverglass Lab-Tek 155409
Dynabeads Invitrogen 111-51D Coated with anti-CD3
Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM) Invitrogen 10313
Penicillin/streptomycin Invitrogen 15140-122
L-glutamine Invitrogen 25030-081
Fetal Bovine Serum (HyClone) Thermo Fisher Scientific, Inc. SH30071.03

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Grakoui, A. The immunological synapse: A molecular machine controlling T cell activation. Science. 285, 221-227 (1999).
  2. Monks, C. R. Three-dimensional segregation of supramolecular activation clusters in T cells. Nature. 395, 82-86 (1998).
  3. Stuart, L. M., Ezekowitz, R. A. Phagocytosis and comparative innate immunity: Learning on the fly. Nat Rev Immunol. 8, 131-141 (2008).
  4. Neuman, K. C., Block, S. M. Optical trapping. Rev Sci Instrum. 75, 2787-2809 (2004).
  5. Ashkin, A. Optical trapping and manipulation of neutral particles using lasers. Proc Natl Acad Sci USA. 94, 4853-4860 (1997).
  6. Ashkin, A. Acceleration and trapping of particles by radiation pressure. Phys Rev Lett. 24, 156-159 (1970).
  7. Ashkin, A., Dziedzic, J. Optical trapping and manipulation of viruses and bacteria Science. Nature. 235, 1517-1520 (1987).
  8. Khalil, A. S. Single M13 bacteriophage tethering and stretching. Proc Natl Acad Sci USA. 104, 4892-4897 (2007).
  9. Khalil, A. S. Kinesin's cover-neck bundle folds forward to generate force. Proc Natl Acad Sci USA.. 105, 19247-19252 (2008).
  10. Li, Z. Membrane tether formation from outer hair cells with optical tweezers. Biophys J. 1386-1395 (2002).
  11. Kim, S. The αβ T cell receptor is an anisotropic mechanosensor. J Biol Chem. 284, 31028-31028 (2009).
  12. Mohanty, S., Mohanty, K., Gupta, P. Dynamics of interaction of RBC with optical tweezers. Opt. Express. 13, 4745-4751 (2005).
  13. Tam, J. Control and manipulation of pathogens with an optical trap for live cell imaging of intercellular interactions. PLoS One. 5, e15215-e15215 (2010).
  14. Lin, S. J., Schranz, J., Teutsch, S. M. Aspergillosis case-fatality rate: Systematic review of the literature. Clin Infect Dis.. 32, 358-366 (2001).
  15. Wey, S. B. Hospital-acquired candidemia - the attributable mortality and excess length of stay. Arch. Intern. Med. 148, 2642-2645 (1988).
השימוש מלכודת אופטית לחקר מארח הפתוגן אינטראקציות עבור הדמיה דינמי תא חי
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Tam, J. M., Castro, C. E., Heath, R. J. W., Mansour, M. K., Cardenas, M. L., Xavier, R. J., Lang, M. J., Vyas, J. M. Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging. J. Vis. Exp. (53), e3123, doi:10.3791/3123 (2011).More

Tam, J. M., Castro, C. E., Heath, R. J. W., Mansour, M. K., Cardenas, M. L., Xavier, R. J., Lang, M. J., Vyas, J. M. Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging. J. Vis. Exp. (53), e3123, doi:10.3791/3123 (2011).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter