Menschliche pluripotente Stammzellen (hPSCs) haben das Potenzial, eine Vielzahl von verschiedenen Krankheiten zu behandeln. Die Nützlichkeit dieser Zellen besteht darin, dass sie in einem beliebigen Zelltyp im Körper zu unterscheiden. Hier beschreiben wir die Teratom-Assay, mit dem die Pluripotenz von hPSCs demonstrieren wird.
Pluripotente Stammzellen (PSC) haben die einzigartige Eigenschaft, dass sie können in Zellen von allen drei Schichten unterscheiden. Damit sind sie ein wertvolles Werkzeug für die Behandlung vieler verschiedener Krankheiten. Mit dem Aufkommen von pluripotenten Stammzellen (IPSCs) und weitere Forschungsarbeiten mit humanen embryonalen Stammzellen (HES) gibt es einen Bedarf für Tests, die zeigen, dass eine bestimmte Zelllinie ist pluripotenten kann. Keimbahntransmission wurde der Goldstandard für den Nachweis der Pluripotenz von embryonalen Maus-Stammzellen (MESC) Linien 1,2,3. Mit diesem Test können die Forscher zeigen, dass eine MESC Linie können alle Zelltypen im Embryo einschließlich der Keimzellen 4 vorzunehmen. Mit der Erzeugung von menschlichen ESC-Linien 5,6, war der entsprechende Test zur Pluripotenz dieser Zellen nachweisen unklar, da die menschliche WSR kann nicht für Keimbahntransmission getestet werden. Als Ersatz wird die Teratom-Assay verwendet, um die derzeit pluripot demonstrierenTransparenz der menschlichen pluripotenten Stammzellen (hPSCs) 7,8,9. Obwohl dieser Test wurde vor kurzem unter die Lupe genommen und neue Technologien werden aktiv erforscht, ist das Teratom Assay dem derzeitigen Goldstandard 7. In diesem Assay werden die Zellen in Frage in einem immungeschwächten Maus injiziert. Wenn die Zellen pluripotent sind, wird ein Teratom schließlich entwickeln und Abschnitte des Tumors wird Gewebe aller drei Keimblätter 10 zeigen. Im Teratom Assay kann hPSCs in verschiedene Bereiche der Maus injiziert werden. Die häufigsten Injektionsstellen umfassen den Hoden Kapsel, die Nierenkapsel, die Leber oder in das Bein entweder subkutan oder intramuskulär 11. Hier beschreiben wir eine robuste Protokoll für die Erzeugung von Teratome aus hPSCs mit dem Hoden Kapsel als Standort für das Tumorwachstum.
Die hier vorgestellte Methode bietet sehr zuverlässige, einfache Mittel zur Erzeugung von hPSCs Teratome im Hoden Kapsel. Es gibt mehrere kritische Parameter in dieser Technik. Insbesondere ist es wichtig, HPSC Zelllinien, die bekanntermaßen pluripotenten als Steuerelement zu injizieren. Andere wichtige Parameter sind das Zeitintervall zwischen der Impfung und Tumor-Beobachtung. Für Zelllinien, wie WA09, sollte Teratome in 6-8 Wochen beobachtet werden. Für neue iPSC Zeilen finden wir, dass oft 10 Wochen benötigt werden. Ein weiteres Problem ist die Anzahl der Zellen injiziert. Wir injizieren eine Million Zellen, der Assay kann einfach mit weniger Zellen durchgeführt werden. Darüber hinaus ist das Einspritzmedium wichtig. Wir finden, dass wir die besten Ergebnisse erzielen, wenn die Zellen in einer 1:1-Mischung aus Matrigel und DMEM/F-12 injiziert werden, wie zum PBS oder DMEM/F-12 entgegengesetzt.
The authors have nothing to disclose.
Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse CIRM # TR-1250, RT1-01108, und CL1-00502 finanziert.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Accutase | Invitrogen | A1110501 |
DMEM/F-12 | Invitrogen | 113300-032 |
Matrigel | BD Biosciences | 354277 |