Замедленного типа гиперчувствительности (DTH) является воспалительная реакция опосредована CCR7-эффекторных памяти T (ПЭМ) лимфоцитов. Здесь мы показываем, как активировать антиген-специфические клетки ТЕМ, вызывают приемные DTH у крыс Льюиса и контролировать воспалительную реакцию.
Abstract
Замедленного типа гиперчувствительности (DTH) является воспалительная реакция опосредована CCR7-эффекторные Т-лимфоциты памяти, что проникнуть в месте введения антигена, против которого иммунная система была загрунтовать. Воспалительная реакция характеризуется покраснением и отеком сайт антигенный вызов. Это удобная модель для определения в естественных условиях эффективность иммунодепрессанты. Кожные DTH могут быть вызваны либо приемных передачи антиген-специфические Т-лимфоциты или активной иммунизации с антигеном, и последующие внутрикожные проблема с антигеном, чтобы вызвать воспалительную реакцию в данной области кожи. DTH реакции могут быть вызваны на различные антигены, например, яичный альбумин, туберкулин, столбняка, или замочную скважину блюдечко гемоцианин. Такая реакция может быть вызвана против аутоантиген, например к основному белку миелина (ОБМ) у крыс с экспериментальным аутоиммунный энцефаломиелит индуцированной с MBP, животной модели рассеянного склероза (1). Здесь показано, как вызвать приемных DTH реакцию Льюиса крыс. Сначала стимулировать овальбумином специфические клетки Т в пробирке и вводят эти клетки активированы внутрибрюшинно наивному крыс. После учета клетки, чтобы уравновесить в естественных условиях в течение 2 дней, мы будем вызов крыс с овальбумина в ушной раковины на одно ухо, а другой Виль ухо получить физиологический раствор. Воспалительная реакция будет виден 3-72 часов позже, и ухо толщина будет оцениваться как указание DTH тяжести.
Protocol
1. Стимуляция овальбумином конкретные Т-лимфоцитов Отдых овальбумина-специфических Т клетки стимулируются овальбумином в присутствии облученных крыс тимоцитов Льюис (30 Гр), как антиген представляющих клеток (БТР), в Стимуляция среднего (Подготовка в DMEM + Pen / Strep / L-Glut + + NEAA R…
Discussion
Антигенный вызов может также выполняться на других объектах, например, в кожу спины (2). Мы, однако, что сложно. Использование ушной раковины из уха, как показано в этом видео, позволяет наиболее точное измерение DTH реакцию.
Acknowledgements
Мы благодарим д-р Александр Flügel (Martinsried, Германия) за предоставление нам GFP-маркированы, яичный альбумин-специфических Т клеточной линии, используемые в настоящем протоколе.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
DMEM
Gibco/Invitrogen
12430-062
500ml
Sodium pyruvate
Sigma
S8636
1 mM final, in Stimulation medium
Penicillin – Streptomycin – L-Glutamine
Cambrex/BioWhittaker
17-718R
100 u/ml – 100 µg/ml – 4 mM respectively, final, in Stimulation Medium