Hier hebben we voorstellen eenvoudige methoden voor het testen en evalueren van de aanwezigheid van reactieve zuurstofradicalen in de cellen.
Reactieve zuurstof soorten zijn een aantal moleculen die schade DNA en RNA en oxideren eiwitten en lipiden (lipiden peroxydation). Deze reactieve moleculen bevatten een zuurstof-en onder meer H 2 O 2 (waterstofperoxide), NO (stikstofoxide), O 2 – (oxide anion), peroxynitriet (Onoo -), hydrochlorous zuur (HOCl) en hydroxyl radicaal (OH -) .
Oxidatieve soorten worden geproduceerd niet alleen onder pathologische omstandigheden (kanker, ischemische / reperfusie, neurologische en cardiovasculaire aandoeningen, infectieziekten, ontstekingsziekten 1, 2 auto-immuunziekten, etc …) maar ook tijdens fysiologische (niet-pathologische) situaties, zoals cellulaire stofwisseling 3 , 4. Inderdaad, ROS spelen een belangrijke rol in vele cellulaire signaalwegen (proliferatie, cel activatie 5, 6, 7 migratie etc..). ROS kan nadelig worden (het is dan bedoeld als"Oxidatieve en nitrosatieve stress"), wanneer deze wordt geproduceerd in grote hoeveelheden in de intracellulaire compartimenten en cellen in het algemeen reageren op de ROS door opregulerende anti-oxidanten, zoals superoxide dismutase (SOD) en catalase (CAT), glutathion peroxidase (GPX) en glutathion (GSH) dat beschermt hen door het omzetten van gevaarlijke vrije radicalen tot onschadelijke verbindingen (dat wil zeggen water). Vitamine C en E zijn ook beschreven als ROS (anti-oxidanten).
Vrije radicalen zijn gunstig in lage hoeveelheden 3. Macrofagen en neutrofielen-gemedieerde immuunrespons betrekking hebben op de productie en afgifte van NO, die virussen, ziekteverwekkers en tumorcellen proliferatie 8 remt. GEEN reageert ook met andere ROS en dus, heeft ook een rol als een detoxifier (ROS aaseter). Eindelijk geen handelingen op schepen om de bloedstroom die van belang is voor de aanpassing van de spier om langdurige oefening 9, 10 reguleren. Verschillende publicaties hebben ook aangetoond dat ROS betrokken zijn bij insuline sensitivity 11, 12.
Tal van methoden om de ROS productie te evalueren zijn beschikbaar. In dit artikel stellen we een aantal eenvoudige, snelle en betaalbare testen, deze testen zijn gevalideerd door de vele publicaties en worden routinematig gebruikt om de ROS of de gevolgen ervan op te sporen in zoogdiercellen. Hoewel sommige van deze testen te detecteren meerdere ROS, anderen te detecteren slechts een ROS.
Verschillende pathologische situaties, zoals inflammatoire ziekten, kanker, ischemie / reperfusie, en ook behandelingen zoals bestraling of chemotherapie (dat wil zeggen cisplatine) veroorzaken ROS overproductie. Zo, het opsporen en het meten van ROS niveaus is belangrijk in veel basic, pre-klinische en klinische studies. Echter, ROS hebben zeer korte halfwaardetijd en kan ingewikkeld op te sporen. Hier stellen we voor eenvoudige tests die routinematig worden gebruikt en algemeen aanvaard voor de detectie van de vrije r…
The authors have nothing to disclose.
Dit werk werd ondersteund door National Institutes of Health (CA142664).
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
---|---|---|---|
5-(and-6)-carboxy-2′,7′-dichlorofluorescein diacetate (carboxy-DCFDA) | Molecular Probes | C369 | control |
carboxy-H2DCFDA | Molecular Probes | C400 | |
Sulfanilamide | Sigma | S9251-100G | |
N-1-napthylethylenediamine dihydrochloride | Sigma | N9125-10G | |
Nitrite standard | Sigma | 237213-100G | |
GSH/GSSG-Glo Assay | Promega | V6612 | To quantify oxidized, reduced or oxidized/reduced glutathione |