Иммуноцитохимическая идентификации периферических сенсорных нервных волокон подтипы (и выявления экспрессии белка в них) являются ключом к пониманию молекулярных механизмов, лежащих периферические ощущения. Здесь мы опишем методы подготовки периферического / висцерального образцы тканей, таких как кожа и кости конечностей, для конкретных иммуноокрашивания периферических сенсорных нервных волокон.
Обнаружение и первичной обработки физических, химических и термических сенсорных стимулов на периферических сенсорных нервных волокон имеет ключевое значение для чувственного восприятия у животных и человека. Эти периферические чувствительные нервные волокна выразить множество рецепторов и белков ионных каналов, которые обнаруживают и инициировать конкретные сенсорные стимулы. Существуют методы для характеристики электрических свойств периферических сенсорных нервных волокон, иннервирующих кожу, что также может быть использована для выявления функциональной экспрессии специфических белков ионных каналов в этих волокон. Однако подобные электрофизиологические методы недоступны (и также трудно разработать) для выявления функциональных экспрессию рецепторов и ионных каналов белков в периферических сенсорных нервных волокон, иннервирующих других внутренних органов, в том числе самых сложных тканей, таких как кости. Более того, такие электрофизиологические методы не могут быть использованы, чтобы определить выражение не-возбудимых белкаа в периферических сенсорных нервных волокон. Таким образом, иммунной периферической / висцерального образцы ткани для сенсорных fivers нерв обеспечивает наилучший способ определения экспрессии специфических белков интереса к этим нервным волокнам. Пока большая часть экспрессии белка исследований в сенсорных нейронов использовали иммуноокрашивания процедур в сенсорных ганглиях, где информация ограничивается экспрессии специфических белков в теле клетки определенных типов или подмножеств сенсорных нейронов. Здесь мы приводим подробные методы / протоколы для подготовки периферического / висцерального образцы ткани для иммунной периферических сенсорных нервных волокон. Мы специально подробно методы подготовки кожи или подошвенной биопсии и кость (бедро) разделов из мышей для иммунной периферических сенсорных нервных волокон. Эти методы не только ключ к качественного определения экспрессии белка в периферических сенсорных нейронов, но и обеспечить количественный метод анализа дляопределения изменений в экспрессии белка уровней в конкретных типов или подмножеств чувствительные волокна, а также для определения морфологических и / или анатомические изменения в количество и плотность чувствительных волокон при различных патологических состояниях. Кроме того, эти методы не ограничиваются окрашивание только чувствительные нервные волокна, но также может быть использована для окраски любых типов нервных волокон в коже, костях и других висцеральных тканей.
Здесь мы имеем подробные методы для подготовки кожи мыши и костной ткани разделы для иммунной и обнаружения периферических сенсорных нервных волокон. Разделы производится из подошвенной биопсии удар содержать как голые и волосатые кожи, а это значит протокол может быть использован н?…
The authors have nothing to disclose.
Мы благодарим д-ра Юрия М. Усачев за помощь в начальной стандартизации конфокальной микроскопии / изображений мыши подошвенной иммуноокрашивания биопсии и д-р Донна Л. Хаммонд за ее постоянную помощь и конструктивную критику в этой работе. Эта работа финансировалась грантами от NINDS / NIH (NS069898) и Грант Идея развития премию от Министерства обороны простаты Программа исследований рака (DoD-PCRP-101096) для DPM
Material Name | Type | Company | Catalogue No. | Comment |
3mm Harris Micro-Punch | Material | Ted Pella | 15094 | |
Perfusion pump | Material | VWR International | 23609-170 | |
Paraformaldehyde | Reagent | Fisher Scientific | T353 | |
Picric acid | Reagent | Sigma-Aldrich | 239801 | |
OCT Embedding compound | Reagent | Tissue-Tek | 4583 | |
Cyto-Freeze cryogenic aerosol spray | Material | Control Company | 3118 | |
Goat Serum | Reagent | Sigma-Aldrich | G9023 | |
Incubation tray and lid for Immunostaining (Large) | Material | RPI Corp. | 248270 (tray) 248270-A (lid) |
|
ImmEdge hydrophobic barrier pen | Material | Vector Laboratories | H-4000 | |
Camel’s Hair Brushes (#1 thickness) | Material | Ted Pella | 11859 | |
Pro‐Long Gold Mounting medium | Reagent | Invitrogen | P36930 |