我们描述涉及的方法进行快速评估的功能基因在大脑皮层的发展,<em>体外</em>电质粒共表达抑制核糖核酸(RNA干扰)和绿色荧光蛋白在小鼠胚胎皮层。该协议是适合研究神经发育的各个方面,如神经,神经细胞迁移和神经元的形态,包括树突和轴突生长。
大脑皮质的指示较高的认知功能。这6个层状结构会产生一个内部第一,外部最后的方式,其中第一个出生的神经元保持密切的心室,而去年出生的神经元迁移过去的第一个出生的神经细胞向大脑表面1。除了 神经细胞迁移2,皮质功能正常的一个关键过程是调节神经元的形态3。虽然神经元形态,可在原代培养体外研究,有多少要了解到,从这些过程是如何在组织环境监管。
我们描述的技术来分析神经细胞迁移和/或在大脑皮层的器官切片4,6形态。用于修改一个pSilencer载体,其中包含同时U6启动子驱动的双链发夹RNA和一个单独的编码绿色荧光蛋白表达盒驱动b雅CMV启动子7-9。我们的方法允许候选基因的具体击倒后突起生长的缺陷快速评估,并已成功用于在屏幕上一个突起生长8监管。因为只有一部分细胞会表达的RNAi构造,器官切片允许镶嵌一个潜在的表型分析。此外,因为这种分析是在附近近似体内环境,它提供了一个低成本为皮质功能未知的基因,并迅速替代代转基因或基因敲除动物。最后,在体内电穿孔技术相比, 体外电击实验的成功是不依赖于熟练的手术技巧的发展,可以用更短的训练时间和技能进行。
这些方法包括体外电击质粒编码双链RNA发夹和器官切片4提供了几个明显的优势文化。首先,这些方法可以快速评估为RNAi派生的表型的。 pSilencer载体包含U6启动子驱动的双链RNA发夹编码绿色荧光蛋白表达盒中列入允许细胞电穿孔与RNAi载体的快速识别和表征。除了时间效率,这些方法具有高度成本效益的几个淘汰赛行产生相比。第二,与生存电技术12,需要较长的培训和技能?…
The authors have nothing to disclose.
我们感谢提供的pSil-GFP的结构图1的插图,博士阿尔珀乌尊,共聚焦显微镜勒杜克生物成像设备,博士希林Bonni。电解金属锰支持从巴勒斯惠康基金,NARSAD奖的年轻研究者,美国国立卫生研究院NCRR COBRE P20的RR018728-01职业医学科学奖。借券支持由美国国立卫生研究院NCRR COBRE P20的RR018728-01,并已收到小灵通NRSA 5T32MH019118-20的支持。