Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

התגברות על חוסר התגובה של ניסיוני אוטואימוניות Encephalomyelitis (EAE) זנים עמידים עכבר ידי העברת המאמצת אתגר אנטיגני

Published: April 9, 2012 doi: 10.3791/3778
Automatic Translation
1, 2, 2
1Department of Medicine, Section of Cardiology, St. John-Providence Health System, 2Department of Immunology and Microbiology, Wayne State University School of Medicine

Summary

זנים מסוימים עכבר מסוגלים לעמוד בפני גיוס של Encephalomyelitis אוטואימונית ניסויית (EAE) עם חלבון המיאלין הבסיסי. המתואר כאן הוא פרוטוקול חיסון פשוט הופך את חוסר התגובה וגורם למחלת שיתוק בכמה כתמים אופייניים EAE עכבר עמידים.

Abstract

Encephalomyelitis אוטואימונית ניסויית (EAE) היא מחלה דלקתית של מערכת העצבים המרכזית (CNS) וכן שימש במודל חיה למחקר של המחלה demyelinating האדם, טרשת נפוצה (MS). EAE מתאפיין בחדירה פתולוגית של תאים mononuclear לתוך מערכת העצבים המרכזית ועל ידי הביטוי הקליני של מחלת שיתוק. בדומה MS, EAE גם תחת שליטה גנטית כי זנים מסוימים עכבר רגישים אינדוקציה המחלה בעוד אחרים עמידים. בדרך כלל, C57BL / 6 (H-2 ב) לחסן עכברים עם חלבון המיאלין הבסיסי (MBP) אינם מפתחים סימני שיתוק. חוסר תגובה זה בהחלט לא בשל פגמים עיבוד אנטיגן או מצגת אנטיגן של MBP, כמו פרוטוקול הניסוי המתואר כאן נעשה שימוש כדי לגרום EAE חמורה C57BL / 6 עכברים, כמו גם זנים אחרים נחשב עכבר עמידים. בנוסף, encephalitogenic שיבוטים תא ה-T של C57BL / 6 ו Balb / C עכברים תגובתי ל MBP היה הצלחהמבודד לחלוטין מופצות.

פרוטוקול הניסוי כולל באמצעות המערכת הסלולרית העברת המאמץ שבו MBP-דרוך (200 מיקרוגרם / עכבר) C57BL / 6 לימפה הצומת התורמות תאים מבודדים ותרבותית במשך חמישה ימים עם אנטיגן כדי להרחיב את מאגר MBP ספציפית בתאי T. בסוף התקופה תרבות, 50 מיליון תאים קיימא מועברים לנמענים syngeneic תמימים דרך וריד הזנב. העכברים שטופלו כך נמענים בדרך כלל אינם מפתחים EAE, ובכך מאשרים מחדש מצב עמיד שלהם, והם יכולים להישאר נורמלי ללא הגבלת זמן. עשרה ימים בתא העברת הודעה, עכברים הנמען מאותגרים עם שלמה פרוינד אדג'ובנטי (CFA), תחליב MBP בארבעה אתרים האגפים. EAE חמורה מתחילה להתפתח אצל עכברים אלו עשר עד 14 ימים לאחר האתגר. תוצאות המחקר הראו כי אינדוקציה של המחלה היה ספציפי אנטיגני כאתגר עם אנטיגנים לא רלוונטיות לא לגרום סימנים קליניים של המחלה. באופן משמעותי, טיטרציה של מינון האנטיגן פעםתיגר על עכברים הראו כי הנמען הוא יכול להיות נמוך כמו 5 מיקרוגרם / עכבר. בנוסף, המחקר הקינטית של עיתוי אתגר אנטיגני עולה כי האתגר לגרום למחלה היה יעיל כבר 5 ימים האתגר הודעה אנטיגני וכל עוד מעל 445 האתגר ימים אנטיגני הודעה. נתונים אלה מאוד נקודת למעורבות של האוכלוסייה "חיים ארוכים" תא T בשמירה על חוסר תגובה. מעורבותם של תאים T רגולטוריים (Tregs) במערכת זו אינו מוגדר.

Protocol

1. הכנת CFA-תחליב Antigen

  1. ממיסים חזיר ים MBP (מוכן לפי השיטה של ​​Swanborg1 ומאוחסנים בצורה lyophilized ב 4 ° C) בתמיסה פוספט חיץ (PBS) בריכוז של 2 מ"ג / מ"ל. אם פפטידים MBP מסונתז (MBP 60-80, SHHAARTTHYGSLPQKSQR) 2 משמשים, להכין פתרון 2 מ"ג / מ"ל. צייר את הכמות המתאימה של פתרון אנטיגן (0.1 מ"ל לכל העכבר כדי להתחסן) לתוך מזרק זכוכית עם luer-Lok.
  2. צייר את נפח H37Ra adjuvant פרוינד מלאה של (0.1WT%) (CFA, Difco מעבדות) שווה הפתרון האנטיגן לתוך המזרק עוד כוס מצויד luer-Lok.
  3. לחבר את שני מזרקים זכוכית עם שסתום משולשת. מערבבים את הפתרון MBP עם CFA על ידי לחיצה על בוכנות קדימה ואחורה. שמור את ההצעה עד תחליב נוצר.
  4. כדי לבדוק אם נוצר תחליב, לדחוף את כל התערובת לתוך מזרק אחד. נתק את המזרק ריק, לא למשוךהוא הבוכנה חזרה קצת לפרוק ירידה של תחליב שיורית לתוך כוס של מים נקיים בטמפרטורת החדר. אם טיפה תחליב תישאר ללא שינוי על פני המים, תחליב נוצר. אם טיפה תחליב מפזר, חבר מחדש את מזרקים ולהמשיך את התנועה ערבוב.
  5. השתמש מזרק פלסטיק 1 מ"ל לתהליך חיסון על מנת להבטיח אספקת מינון מדויק של אנטיגן. כדי להעביר את תחליב אנטיגן כדי מזרק פלסטיק, לשלוף את הבוכנה והכניסו לתוך מזרק פלסטיק ריק פתיחת שסתום משולשת שם את המזרק זכוכית הקודם היה מנותק כמו 1.4.
  6. למלא את מזרק פלסטיק השפה על ידי לחיצה על הבוכנה של מזרק זכוכית. הכנס את הבוכנה של מזרק פלסטיק לאחור להדוף תחליב עודף להגיע עד 1.2 מ"ל מרק על מזרק פלסטיק. מהלך זה מבטיח ששום בועת אוויר לכודה בתוך מזרק פלסטיק.
  7. הסר את המזרק פלסטיק שסתום משולשת. אתאפרק # 26 מחט מד כדי מזרק פלסטיק. דחוף את הבוכנה סימן 1 מ"ל כך תחליב כרגע ממלא את נפח החלל של המחט.

2. החיסון של עכברים התורמות

הערה: נקבה עכברים C57BL / 6 מוזרקים בדרך כלל עם אמולסיה אנטיגן בארבעה אתרים הכסלים, בעקבות שיטות שנועדו במקור על ידי קבוצה של McFarlin 3 במכון הלאומי לבריאות. על חוקר מנוסה, אדם אחד יכול לבצע את המשימה כולה. למתחילים, עזרה ניתן שידל כך אדם אחד מחזיק את העכבר אדם אחר עושה את הזריקה. לחלופין, העכבר יכול להיות מורדם להזרקה.

  1. החזק את העכבר היטב בעור הצוואר לעצור את הזנב בין אצבעות ה 4 וה 5 כאלה, בית החזה והבטן נגישים בקלות.
  2. מניחים את המחט של מזרק פלסטיק 1mL באתר של בית החזה מעט מעל בית השחי הימני (של מובו שימוש) להזריק 0.05 מ"ל של תחליב אנטיגן תת עורי. הבליטה הקטנה של CFA לבנבן ניתן לראות דרך העור חיוור. חזור על אותו באתר של בית החזה מעט מעל בית השחי השמאלי.
  3. שחרר את הזנב אוחז ברגל ימין (של העכבר), ולהפוך אותו והחזיקו אותו בין ה 4 ו -5 אצבעות ה. אתר את האתר ממש מתחת במקרה הצלעות באגף ימין להזרים 0.05 מ"ל של תחליב אנטיגן.
  4. שחרר את רגל ימין, להפוך את העכבר לכיוון השני והחזק את רגל שמאל (של העכבר) בין ה 4 ו -5 אצבעות ה. אתר את האתר ממש מתחת במקרה הצלעות של האגף השמאלי ו להזריק 0.05 מ"ל של תחליב אנטיגן.
  5. כדי לשנות את מחט חדשה לאחר ההזרקה של 10 עכברים, או אם המחט חדל להיות רעב.

3. בידוד של תאים הלימפה לתרבות רקמות 7 עד 10 ימים לאחר חיסון

  1. שבעה עד 10 ימים לאחר החיסון, להקריב את העכבריםולהסיר את בלוטות הלימפה וניקוז. השיטה המועדפת של המתת חסד היא על ידי שאיפת CO 2. אחרי הקרבה, להניח את העכבר על גבו על לוח החיתוך עם הגפיים שרוע ומאובטחת ללוח עם סיכות. עכברים הם הרטובות עם תרסיס של אתנול 70%.
  2. חותכים חתך בעור longitudinally באמצע מקצה התחתון של הבטן עד הסנטר עם מספריים מלקחיים סטריליות.
  3. חותכים את עור הבטן מאזור המפשעה עד רגל. פיל לאחור להצמיד את העור, חושף את בלוטות הלימפה מפשעתי.
  4. חותכים את העור לאורך forelimbs (ימינה ושמאלה), כך העור יכול להיות קלופים לאחור מרותקים לחשוף את בלוטות הלימפה בית השחי ליד השחי.
  5. עם שני זוגות מלקחיים עובדים יחד, למשוך את רקמות החיבור כיסוי סביב בלוטות הלימפה מפשעתי. כאשר רקמות החיבור נמחקים, במקום זוג אחד של מלקחיים תחת הצומת הלימפה להתרחק מהגוף. מניחים אתבלוטות הלימפה צלחת פטרי 35 מ"מ מלא PBS סטרילית.
  6. למשוך את רקמות החיבור המכסה את שתי בלוטות לימפה בית השחי באמצעות שני זוגות מלקחיים. לבודד את בלוטות הלימפה ומניחים אותם בצלחת פטרי. להיזהר מאוד לא לשבור את כלי הדם החוצים את האזור המדמם עושה זיהוי בלוטות הלימפה קשה מאוד.
  7. אחרי כל בלוטות הלימפה נאספים, להעביר צלחת פטרי על מכסה המנוע בטיחות ביולוגית. לשבור להקניט את בלוטות הלימפה בנפרד עם שני זוגות מלקחיים, שחיקה אחד נגד השני. לחלופין, בלוטות הלימפה ניתן לשבור על ידי משתמש הקצה השטוח של הבוכנה של מזרק פלסטיק 3 מ"ל לחיצה על בלוטות הלימפה בחלק התחתון של צלחת פטרי.
  8. עוברים צומת התגרו הלימפה ההשעיה התא דרך רשת ניילון להסיר את קרום ופסולת.
  9. איפור הלימפה תא ההשעיה ל 50 מ"ל באמצעות PBS סטרילית. סרכזת בסל"ד 1000 למשך 10 דקות. Resuspend גלולה במדיום תרבות. האם ג קיימאell לספור ולהתאים את הריכוז עד 4 x 10 6 תאים למ"ל. UseRPMI 1640 השלימו עם 10% עוברים נסיוב של עגלים, 2 מ"מ L-גלוטמין, 1 MEM mM פירובט נתרן, 0.1 מ"מ ממ לא חיוניות חומצות אמינו, 100 U / mL פניצילין, 100 מיקרוגרם / מ"ל ​​סטרפטומיצין, 10 mM חיץ Hepes ו 5 x 10 -5 M 2-ME. טרום חם התרבות לפני resuspending התאים.
  10. התרבות התאים 24 גם צלחות תרבות עם נפח 2 מ"ל לכל טוב (ריכוז התאים הסופי 8 x 10 6 תאים / טוב). הוסף אנטיגן היטב כל בריכוז הסופי של 100 מיקרוגרם / מ"ל. מניחים את הצלחת התרבות 37 ° C חממה עם 5% CO 2. דגירה התאים למשך 5 ימים.

4. קציר בתרבית תאים צומת הלימפה 5 ימים לאחר תחילת תרבויות

  1. מערבבים את כל התאים היטב על ידי pipetting למעלה ולמטה עם כוס פיפטה פסטר או פיפטה בנפח קטן. למסוק את התאים צינור צנטריפוגות 50 מ"ל.
  2. בצנטריפוגה תאים בסל"ד 1000 למשך 10 דקות. Resuspend תא גלולה לתוך נפח קטן של PBS.
  3. ספירת תאים ולהתאים את ריכוז התאים קיימא 2.5 x 10 8 תאים למ"ל עם PBS סטרילית. צייר את התאים לתוך המזרק מצויד במחט # 26 מד.
  4. מניחים מנורת חום מעל כלוב של עכברים הנמענים כדי לעזור להרחיב את הווריד הזנב.
  5. באמצעות בעל העכבר, להאריך את הזנב של העכבר לתוך חריץ של בעל. משוך להאריך את הזנב. אתר את הווריד.
  6. להזריק 0.2 מ"ל / עכבר ההשעיה התא, שווה 5 x 10 -7 תאים.

5. אנטיגני האתגר של עכברים הנמען 20 ימים Cell הודעה העברת ופיתוח של תסמיני המחלה

  1. הנמענים עכברים אתגר לא מראה סימנים של המחלה עם האנטיגן. הנהלים זהים בסעיף 2 על "חיסון של עכברים הפעילים".
  2. שימו לב להתפתחות של מחלת שיתוק 7 עד 10 ימים לאחר אתגר אנטיגני.
    1. המחלה מתחילה עם חולשה הזנב. המחלה מדורגת כמו 1כאשר הזנב הופך רפוי. המחלה מדורגת כמו 2 כאשר העכבר משותק גפיים אחורית. המחלה מדורגת 3, כאשר שתי הגפיים האחוריות משותקים ועכבר גורר את שתי הגפיים האחוריות כאשר לזחול קדימה. המחלה מדורגת 4 כאשר העכבר מאבד את השימוש forelimbs שני, והשאיר עכבר נייח לחלוטין. המחלה מדורגת 5 כאשר העכבר הוא גוסס והגוף מתכרבל. המוות הוא קלע כמו כיתה המחלה 6 4.
  3. MBP ספציפית הנגרמת EAE בעכברים C57BL / 6 בעקבות פרוטוקול זה הוא monophasic. עכברים עשויים להתאושש מהמחלה אך לא עוברים הישנות ספונטניות.

6. נציג תוצאות

עכברים שקיבלו ומוכן ואת במבחנה-מורחבת הלימפה תאים התורמות הצומת לא פיתחו תסמיני המחלה EAE, המשקף את התנגדותם אינדוקציה המחלה. עם זאת, לאחר מחלה קשה שפותח אתגר אנטיגני (טבלה I), הוכחת היכולת של אתגר אנטיגניב היפוך מנגנון התנגדות. שתי תכונות מיוחדות של אתגר אנטיגני ציין הן מנות של אנטיגן ו קינטיקה של אתגר כדי לגרום למחלה. מינון נמוך מאוד של אנטיגן דרוש כמוצג בטבלה III. באופן מפתיע, עכברים שקיבלו תאים מתורם שנה קודם לכן עדיין יכול לפתח מחלה קשה, כאשר קרא תיגר עם האנטיגן (לוח ד). שתי תצפיות מאוד מציע את מעורבותם של "מאריכות" ותאי T בשמירה על עמידות EAE. פרוטוקול זה הוא ישים EAE זנים רבים עמידים עכבר 4.

באיור 1.
1. תרשים זרימה תרשים של תכנון הניסוי לזירוז של EAE ב נחשב זנים עמידים העכבר.

קלינית EAE
לאחר העברת המאמצת 		אחרי אתגר אנטיגני
להתאמץ אנטיגן שכיחות Av. המחלה כיתה
(טווח) 		Av. יום תחילת
(טווח) 		שכיחות Av. המחלה כיתה
(טווח) 		Av. יום תחילת
(טווח)
SJL MBP 21/21 4.0 (3-5) 8.0 (6-10) ND ND ND
C57BL / 6 MBP 0/10 - - 7/7 3.85 (3-5) 9,28 (9-10)
Balb / ג MBP 0/7 - - 5/5 3.2 (3-4) 7.0 (7)
C3H/HeJ MBP 0/7 - - 4/4 3.2 (3-4) 8.0 (8)
C57BL / 6 MBP 60-80 0/4 - - 4/4 2.75 (2-4) 10.2 (9-11)

לוח. אינדוקציה של EAE MBP בתיווך ב C57BL / 6 עכברים. העברת המאמצת של EAE ומוכן ואת במבחנה-מורחבת תאים התורמות לא לעורר C57Bl / 6 עכברים. האתגר אנטיגני הודעה העברת תא שניתנו העכברים רגישים אינדוקציה המחלה. Av., הממוצע. ND, לא נעשה.

EAE קלינית לאחר אתגר אנטיגני
תחול Antigen האתגר אנטיגן שכיחות Av. המחלה כיתה
(טווח)		 Av. יום תחילת
(טווח)
MBP-CFA CFA לבדו 0/3 - -
MBP-CFA OVA-CFA 0/3 - -
MBP-CFA MBP-CFA 3/3 4.0 (4.0) 7,7 (7-9)

לוח ב. הספציפיות של אתגר אנטיגני. עכברים הנמענים היו תיגר עם אנטיגן תחול גם אנטיגנים לא רלוונטיים אחרים. רק אנטיגן תחול הנגרמת ממחלה קשה. OVA: ovalbumin עוף. Av., הממוצע.

EAE קלינית לאחר אתגר אנטיגני
אנטיגן אתגר מנות (מיקרוגרם / עכבר) שכיחות Av. המחלה כיתה
(טווח) 		Av. יום תחילת
(טווח)
200 4/4 3.75 (3-4) 8,25 (7-9)
100 4/4 3.67 (3-4) 7.5 (7-8)
50 4/4 3.25 (3-4) 8.25 (7-10)
25 4/4 3.0 (3.0) 8.25 (8-9)
10 4/4 3.0 (3.0) 8.76 (8-9)
5 4/4 2.5 (2-3) 9,75 (9-10)
1 2/4 1.0 (1.0)
0 0/4 - -

לוח ג. אנטיגן מנות אתגר נדרש לזירוז המחלה. ריכוזים שונים של MBP המשמשים לאתגר עכברים הנמען נבדקו. Av., הממוצע.

EAE קלינית לאחר אתגר אנטיגני
האתגר אנטיגן יום אתגר שכיחות Av. מחלות כיתה
(טווח) 		Av. יום תחילת
(טווח)
MBP-CFA 5 3/4 1.33 (1-2) 9,67 (9-10)
MBP-CFA 10 4/4 3.0 (3.0) 8,25 (7-9)
MBP-CFA 15 4/4 3.75 (3-4) 7,25 (7-8)
MBP-CFA 25 4/4 4.0 (4.0) 8.0 (7-9)
MBP-CFA 35 4/4 3.5 (3-4) 7.5 (7-8)
MBP-CFA 60 4/4 3.75 (3-4) 9.0 (8-10)
--------------------------
MBP-CFA 343 3/3 3.0 (3.0) 10.33 (10-11)
MBP-CFA 445 3/3 3.0 (3.0) 7.0 (7.0)

לוח ד. קינטיקה של אתגר אנטיגני. עכברים הנמענים היו תיגר על נקודת זמן ההודעה שונות לאמץive העברת התא. Av., הממוצע.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

מחקרים של EAE בעכברים לעתים קרובות לנצל את neuroantigens, חלבון המיאלין הבסיסי (MBP), חלבון proteolipid (PLP) או חלבון המיאלין oligodendrocyte (ש"א). מחקרים קודמים השתמשו בעיקר MBP. PLP מעורר תגובות חזקות ועקביות מעכברים SJL. לאחרונה, ש"א הוא neuroantigen הנפוצות כי בי -6 עכברים רגישים למחלות אינדוקציה עם אנטיגן זה. רבים מן הזנים גנים ממוקדים עכבר הם על רקע גנטי B6. מעניין לציין, בי -6 עכברים רגישים EAE אינדוקציה עם ש"א אך עמידים בפני מחלות אינדוקציה עם MBP.

הרבה מאמץ קודם הבהרת המנגנונים של EAE מרוכז על המנגנונים אינדוקציה של המחלה, ההשפעות של ייצור ציטוקינים ואת בתיווך התאוששות ידי ותאי T רגולטוריים 5-7. כיצד נחשב עכברים עמידים EAE יכול לערער אינדוקציה של המחלה, לעומת זאת, לא נחקר באופן נרחב. זה יכול להיות בגלל הקושי לכימות unresponsiveness. ארנון 8 1 בשנת 1981 הראה כי טיפול בעכברים עם ציקלופוספמיד בי -6 שניתנו לעכברים אלה רגישים EAE המושרה עם MBP. אחרים הראו כי טיפול עם אינטרפרון נגד גמא גם המושרה בהצלחה המחלה B6 ו Balb / C עכברים 9,10. יש לציין כי מחקרים אלה כל ממוקד ללא אנטיגן סמנים ספציפיים. מצד שני, פרוטוקול המתואר כאן מתמקד בהיבט אחר של התנגדות EAE. הנה רק אנטיגן ספציפי בשימוש האתגר יכולים להתגבר על חוסר התגובה של EAE ומאפשר גיוס של המחלה. פרוטוקול זה כולל בתוכו הן את שלב ההתנגדות EAE עם העברת המאמצת של תאים T דרוך התורם שלב הרגישות אתגר אנטיגני (טבלה I). ניסויים יכול להיות מתוכנן ללמוד את הגורמים הפנימיים השומרים על התנגדות EAE, כמו גם גורמים להפוך את חוסר התגובה. בתחילה, הוכח כי עכברים עמידים EAE הצליחו לעלות תגובות אוטואימוניות כאשר מחוסןעם MBP 4. מאוחר יותר הוכח כי encephalitogenic ותאי T קיים אלה עכברים 2. כמה מחקרים שנעשו לאחרונה הראו כי הטיפול 11,12 של עכברים B10.S עם אנטי CD25 נוגדנים לפני החיסון של העכברים לחלבון proteolipid (PLP) להמיר את העכברים מ עמידים רגישים, רומז את תפקיד הפיקוח ותאי T (Tregs) ב שמירה על ההתנגדות EAE. עם זאת, זה לא המקרה כאשר עכברים C57BL / 6 מטופלים באופן דומה ו מחוסן עם MBP 13. רוב העכברים להישאר אדיש. לכן, ההתנגדות EAE יכול להיות רב העצרת. הוא הניח כי, במקרה של C57BL / 6 עכברים להגיב MBP, בחירת הרתי מחק ותאי T רוב MBP-reactive כאלה התדרים של MBP-reactive ותאי T בפריפריה נמוכים מאוד. בתדר זה מתחת לסף הנמוך יהפוך את העכברים לא מסוגלים להגיב חיסון עם MBP. מינון האתגר, באמצעות מנגנונים לא ידועים, הוא מסוגל להתגבר על נושא התדירות מ 'ount תגובה אוטואימונית. בדיקות נוספות של מנגנונים אפשריים יכלול את תפקידו של IL-6 12 במהלך האתגר אנטיגני ב להשפיע על הרגישות של encephalitogenic עיכוב ידי Tregs.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

אין דיווחים כספיים.

Acknowledgments

נתמך בחלקו על ידי מענקים מהמוסד הלאומי לבריאות (R01 NS37253 ו N01 NS055167) והחברה הלאומית טרשת נפוצה (RG 3288-A6).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Guinea pig spinal cords Rockland Immunochemicals GP-T065 frozen
Freund’s Adjuvant, complete H37Ra Difco Laboratories 231131
Multifit interchange-able syringe BD Biosciences 512133
RPMI 1640 Mediatech, Inc. 10-040-CM
OVA Sigma-Aldrich A5503
Mice Jackson Laboratory B6 mice: 0000664 Bar Harbor, Maine

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Swanborg, R. H. Experimental allergic encephalomyelitis. Methods in Enzymology. Sabato, G. D. 162, Academic Press. New York, NY. 413-421 (1988).
  2. Shaw, M. K., Kim, C., Hao, H. W., Chen, F., Tse, H. Y. Induction of myelin basic protein-specific experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice: Mapping of T cell epitopes and T cell Vb gene segment usage. J. Neuroscience Research. 45, 690-699 (1996).
  3. McCarron, R., McFarlin, D. E. Adoptively transferred experimental autoimmune encephalomyelitis in SJL/J, PL/J, and (SJL/J x PL/J)F1 mice. Influence of I-A haplotypes on encephalitogenic epitope of myelin basic protein. J. Immunol. 141, 1143-1149 (1988).
  4. Shaw, M. K., Kim, C., Ho, K. -L., Lisak, R. P., Tse, H. Y. A combination of adoptive transfer and antigenic challenge induces consistent murine experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice and other reputed resistant strains. J. Neuroimmunol. 39, 139-150 (1993).
  5. Krishnamoorthy, G., Saxena, A., Mars, L. T., Domingues, H. S., Mentele, R., Ben-Nun, A., Lassmann, H., Dornmair, K., Kurschus, F. C., Liblau, R. S., Wekerle, H. Myelin-specific T cells also recognize neuronal autoantigen in a transgenic mouse model of multiple sclerosis. Nat. Med. 15, 626-632 (2009).
  6. Anderson, A. C., Reddy, J., Nazareno, R., Sobel, R. A., Nicholson, L. B., Kuchroo, V. K. IL-10 plays an important role in the homeostatic regulation of the autoreactive reperteroire in naïve mice. J. Immunol. 173, 828-834 (2004).
  7. Anderton, S. M. Treg and T-effector cells in autoimmune CNS inflammation: a delicate balance easily disturbed. Eur. J. Immunol. 40, 332-334 (2010).
  8. Arnon, R. Experimental allergic encephalomyelitis - susceptibility and suppression. Immunol. Rev. 55, 5 (1981).
  9. Billiau, A., Heremans, H., Vandekerckhove, F., Dijkmans, R., Sobis, H., Meulepas, E., Carton, H. Enhancement of experimental allergic encephalomyelitis in mice by antibodies against IFN-g. J. Immunol. 140, 1506-1510 (1988).
  10. Arbomson-Leeman, S., Alexander, J., Bronson, R., Corroll, J., Southwood, S., Dorf, M. Experimental autoimmune encephalomyelitis-resistant mice have highly encephalitogenic myelin basic protein (MBP)-specific T cell clones that recognize a MBP peptide with high affinity for MHC class II. J. Immunol. 154, 388-398 (1995).
  11. Reddy, J., Illes, Z., Zhang, X., Encinas, J., Nicholson, L., Sobel, R. A., Wucherpfennig, K. W., Kuchroo, V. K. Myelin proteolipid protein-specific CD4+CD25+ regulatory cells mediate genetic resistance to experimental autoimmune encephalomyelitis. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 15434-15439 (2004).
  12. Korn, T., Reddy, J., Gao, W., Bettelli, E., Awasthi, A., Petersen, T. R., Backstrom, B. T. Myelin- specific regulatory T cells accumulate in the CNS but fail to control autoimmune inflammation. Nature Med. 13, 423-431 (2007).
  13. Shaw, M. K., Li, J., Ho, P. P., Hao, H., Lisak, R. P., Tse, H. Y. Induction of myelin basic protein-specific adoptive experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice. Longevity of donor T cells and lack of disease relapses. Neuroimmunology Research Focus. Broglie, P. V. , Nova Science Publisher. New York. 175-191 (2007).

Tags

אימונולוגיה גיליון 62 מחלות אוטואימוניות Encephalomyelitis אוטואימונית ניסיונית חיסון חלבון המיאלין הבסיסי העברת המאמצת שיתוק
התגברות על חוסר התגובה של ניסיוני אוטואימוניות Encephalomyelitis (EAE) זנים עמידים עכבר ידי העברת המאמצת אתגר אנטיגני
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Shaw, M. K., Zhao, X. q., Tse, H. Y. … More

Shaw, M. K., Zhao, X. q., Tse, H. Y. Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge. J. Vis. Exp. (62), e3778, doi:10.3791/3778 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter