Summary
इस कागज चूहों कि बुखार जैसी स्थितियों 12-24 घंटे के लिए प्रोत्साहित कर सकते हैं में पूरे शरीर अतिताप के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करता है.
Abstract
अतिताप कोर शरीर का तापमान सामान्य से ऊपर में वृद्धि को परिभाषित करने के लिए एक सामान्य शब्द का इस्तेमाल किया है. यह अक्सर वृद्धि मूल शरीर के तापमान है कि बुखार के दौरान मनाया जाता है का वर्णन करने के लिए प्रयोग किया जाता है. एक सहायक के रूप अतिताप के उपयोग कैंसर जीव विज्ञान के क्षेत्र में ट्यूमर प्रतिगमन के लिए एक आशाजनक प्रक्रिया के रूप में उभरा है. इस प्रयोजन के लिए, सबसे महत्वपूर्ण आवश्यकता के लिए विश्वसनीय और वर्दी हीटिंग प्रोटोकॉल है. हम चूहों में अतिताप (पूरे शरीर) के लिए एक प्रोटोकॉल विकसित किया है. इस प्रोटोकॉल में, पशुओं के लिए 90 मिनट के लिए 15 मिनट के एक आराम की अवधि के द्वारा पीछा अतिताप के चक्र को उजागर कर रहे हैं. इस अवधि के दौरान चूहों को भोजन और पानी के लिए आसान पहुँच है. पहले कुछ अतिताप जोखिम चक्र के दौरान चूहों में उच्च शरीर का तापमान spikes पशु immobilizing द्वारा रोका जाता है. इसके अतिरिक्त, सामान्य नमक पहले कुछ चक्र निर्जलीकरण के प्रभाव को कम करने में किया जाता है. इस प्रोटोकॉल चूहों में 12-24 घंटा शर्तों की तरह बुखार अनुकरण कर सकते हैं. हम8-12 सप्ताह पुराने / BALB Cj मादा चूहों का इस्तेमाल करने के लिए प्रोटोकॉल का प्रदर्शन.
Protocol
1. पशु नीतिशास्त्र
चूहों पर लंबी अवधि अतिताप प्रदर्शन करने से पहले सुनिश्चित करें कि प्रक्रिया संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया है. इस अखबार में चर्चा की और साथ वीडियो में दिखाया गया है सभी प्रक्रियाओं इम्यूनोलॉजी के राष्ट्रीय संस्थान के संस्थागत पशु की आचार समिति द्वारा अनुमोदित किया गया.
2. समझौता अतिताप
पूरे शरीर अतिताप (WBH) prewarmed पिंजरों कि इनक्यूबेटर में 39.5 पर बनाए रखा जाता है डिग्री सेल्सियस में पशुओं को रखने के द्वारा दिया जाता है प्रोटोकॉल के मानकीकरण के दौरान, एक तापमान संवेदक शल्य चिकित्सा चूहों में प्रत्यारोपित किया गया था और उनके शरीर का तापमान अलग प्रयोगात्मक परिस्थितियों में नजर रखी थी. यह देखा गया है कि गर्म वातावरण में पशुओं को रखने पर उनके तापमान में धीरे - धीरे 37 से बढ़ ° C अप करने के लिए 42 डिग्री सेल्सियस से अधिक की अवधि 100 मिनट (1 चित्रा). गुतापमान में "कील" परिणामस्वरूप ई पेचीदा है के रूप में आंतरिक शरीर का तापमान भी बाहरी वातावरण के तापमान की तुलना में अधिक गोली मार दी.
जब शरीर का तापमान 40 डिग्री सेल्सियस से अधिक है, पशु थूथन चारों ओर गीला के रूप में इस तरह के तनाव और निर्जलीकरण के लक्षण दिखा सकते हैं. परे शरीर का तापमान बढ़ाएँ 40 डिग्री सेल्सियस, गीला और अपरिवर्तनीय तनाव या यहां तक कि तनाव गर्मी के कारण पशुओं की मौत के लिए नेतृत्व करेंगे. इसलिए यह महत्वपूर्ण है अतिताप के दौरान तापमान spikes को रोकने.
उच्च तापमान spikes की यह घटना अतिताप प्रदर्शन के दौरान पशु की शारीरिक सक्रियता के साथ जुड़ा हुआ है. इसी तरह के तापमान spikes अन्य समूहों द्वारा भी मनाया गया और पर्यावरण उच्च तापमान 10 करने के लिए शुरू किया जा रहा है पर पशु की शारीरिक सक्रियता के साथ जुड़े थे.
हमारे प्रोटोकॉल में, चूहों अतिताप प्रदर्शन के दौरान स्थिर रहे हैं. जैसाचित्रा 2 में दिखाया गया है, पशुओं के स्थिरीकरण तापमान spikes रोकता है.
हम इस प्रोटोकॉल का प्रदर्शन करने के लिए 8-12 सप्ताह पुराने / BALB Cj चूहों का इस्तेमाल किया है. प्रोटोकॉल / एक विशेष प्रकार के चूहों के तनाव के लिए सीमित नहीं है.
3. प्रयोग के लिए तैयारी
3.1 इनक्यूबेटर
यह एक सामान्य सीओ 2 इनक्यूबेटर में प्रयोग किया जा सकता है के रूप में वे एक अच्छा तापमान नियंत्रण है. सीओ 2 गैस की आपूर्ति डिस्कनेक्ट और पानी सीओ 2 इनक्यूबेटर की पकड़ ट्रे को हटा दें. इन्क्यूबेटरों के कुछ मॉडलों में यह संभव है कि सीओ 2 नियंत्रक स्विच. इनक्यूबेटर की अलमारियों इतना है कि एक चूहों के पिंजरे के अंदर आसानी से रखा जा सकता है व्यवस्थित. इनक्यूबेटर का तापमान 39.5 डिग्री सेल्सियस में सेट
3.2 पिंजरों
आमतौर पर, अतिताप प्रयोग 4 चूहों पर एक समय में किया जाता है. पर, दो पिंजरों आवश्यक हैंई मशीन के अंदर रख दिया गया है और अन्य बाहर कमरे के तापमान पर रखा जाता है. पिंजरों के बिस्तर से बचा है, के रूप में बिस्तर के पैच समय गैर वर्दी पिंजरे के अंदर तापमान में जो परिणाम के साथ गीला हो गया है. बाहर पिंजरे भोजन छर्रों और पानी की बोतल चाहिए.
3.3 चूहे स्थिरीकरण ट्यूबों
छिद्रित ट्यूबों में अतिताप चूहों के पहले 4 चक्र के दौरान स्थिर रहे हैं. ये स्थिरीकरण ट्यूबों भेदी 3 मिमी अपने शरीर और चार ऐसे ट्यूबों के लिए आवश्यक हो जाएगा पर सभी छेद द्वारा 50 मिलीग्राम 'अपकेंद्रित्र' ट्यूब से बनाया जा सकता है. 50ml ट्यूब सुविधा BALB / Cj चूहों जो 8 सप्ताह से अधिक पुराने हैं स्थिर कर सकते हैं. चूहों की कुछ असामान्य रूप से अलग तनाव के लिए उपयुक्त आकार के ट्यूब या चूहे जो बहुत युवा या 50 सप्ताह से अधिक उम्र के हैं के लिए आवश्यक हो सकता है.
प्लेस स्थिरीकरण ट्यूब और इनक्यूबेटर अंदर एक पिंजरे 39.5 डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखा इतना है कि कम से कम 2 घंटे के लिए प्रतीक्षा पिंजरे और मैंmmobilization ट्यूबों इनक्यूबेटर तापमान प्राप्त.
4. अतिताप के पहले चक्र
चूहे अतिताप प्रदर्शन के दौरान निर्जलीकरण का अनुभव हो सकता है. इसलिए प्रयोग शुरू होने से पहले, हर माउस 0.5 मिलीलीटर सामान्य intraperitoneally खारा प्रशासन. 1 मिलीलीटर सिरिंज के साथ एक 26 जी सुई का प्रयोग करें.
जल्दी से बाहर इनक्यूबेटर में रखा पिंजरे ले, जगह प्रत्येक स्थिरीकरण ट्यूबों में एक जानवर और इनक्यूबेटर में वापस पिंजरे जगह है. समय रिकार्ड. यह इनक्यूबेटर में एक ही जगह हर समय पिंजरे रखने के लिए आवश्यक है.
90 मिनट के बाद इनक्यूबेटर से पिंजरे ले. स्थिरीकरण ट्यूब से जानवरों को छोड़ दें और उन्हें भोजन और पानी के लिए आसान पहुँच के साथ पिंजरे में सामान्य तापमान पर जगह. जगह खाली स्थिरीकरण ट्यूबों वापस इनक्यूबेटर में.
15 मिनट के बाद, अतिताप के दूसरे चक्र 0 देने से शुरू कर दिया है.5 मिलीग्राम हर माउस खारा intraperitoneally.
वे तो 50 मिलीलीटर छिद्रित स्थिरीकरण ट्यूबों में स्थिर कर रहे हैं और इनक्यूबेटर में रखा जाता है.
5. बाद के अतिताप साइकिल
पहले 4 चक्र के लिए, यह जरूरी है अतिताप प्रदर्शन के दौरान और पहले दो चक्रों के लिए चूहों स्थिर, खारा इंजेक्शन अतिताप अवधि शुरू होने से पहले दिया जाता है.
बाद अतिताप के इन चक्रों के बाद आराम से पूरा कर रहे हैं, चूहों acclimatize और अतिताप प्रदर्शन के दौरान हो अतिसक्रिय नहीं. खारा की intraperitoneal इंजेक्शन आवश्यक नहीं होगा यदि चूहों आराम समय के दौरान आसानी से भोजन और पानी ले सकता है.
6. सभी चक्र पूरा करने के बाद, अंतिम चरण के लिए पशु की जांच करने के लिए है
अतिताप चक्र के दौरान किसी भी मौत नहीं होनी चाहिए. हर जानवर को बहुत सावधानी से पहली बार में देखा जा सकता हैकुछ चक्र. थूथन के आसपास किसी भी गीला के लिए तेजी से देखो. यह लक्षण निर्जलीकरण के हस्ताक्षर है. जैसे लक्षणों के साथ चूहे तुरंत 0.5 मिलीलीटर सामान्य नमक और कमरे के तापमान पर आईपी बाकी दी जानी चाहिए. Immobilized चूहों के अधिकांश किसी भी अतिरिक्त देखभाल की आवश्यकता नहीं है और सफलतापूर्वक तनाव अतिताप सहन करेंगे.
आवश्यक चक्र को पूरा करने के बाद, जानवरों के कमजोर और निर्जलित लग रही है लेकिन वे जल्दी से कुछ ही घंटों के भीतर ठीक हो जाएगी.
चित्रा 1 चूहे का मूल शरीर का तापमान जब पिंजरे एक मशीन में 39.5 डिग्री सेल्सियस पर रखा गया था के रूपांतर. 90 मिनट के बाद पिंजरे मशीन से हटा दिया गया था और 25 डिग्री सेल्सियस पर रखा गया लाल हलकों उच्च तापमान spikes से संकेत मिलता है.
चित्रा 2 कोर शरीर temperatu के रूपांतर.अतिताप चक्र के दौरान एक immobilized चूहे की फिर. पशु immobilizing के बाद, उच्च तापमान spikes का पालन नहीं किया गया जब पिंजरे 39.5 डिग्री सेल्सियस पर रखा गया था
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Discussion
के रूप में वापस दूर 5000 ई.पू. के रूप में, मिस्र के डॉक्टरों गर्मी के साथ ट्यूमर का इलाज किया. यूनानियों कुछ चिकित्सा उपचार में गर्मी के मूल्य को मान्यता दी. मूसा उल्लेख हॉट स्प्रिंग्स (36:24 उत्पत्ति) के कानून के सबसे प्राचीन ग्रंथों लिए थेरेप्युटीकली शरीर का तापमान तरक्की के लिए.
पहले तकनीक या तो बुखार या 1 अतिताप के शामिल होने के लिए गर्म पानी स्नान के शामिल होने के लिए ज्वरकारक माइक्रोबियल अर्क का उपयोग कार्यरत हैं. हालांकि इन तरीकों में से कोई भी आसानी से हो सकता है या निगरानी सकता है नियंत्रित है. हमारे प्रोटोकॉल चूहों में एक नियंत्रित और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य तरीके में अतिताप को उजागर कर रहे हैं.
इस प्रक्रिया में यह महत्वपूर्ण है अतिताप के पहले दो चक्र के दौरान चूहों पर नजर रखने के लिए. मामले में उनके फर गीला या अत्यधिक थूथन चारों ओर मनाया गीला पाया जाता है, तो वे तुरंत विश्राम दिया जाना चाहिए और सामान्य नमक intraperiotoneally देने के लिए कमरे के तापमान पर निर्जलीकरण को रोकने के.
तम्बू वसूली के बाद ">, जैसे जानवरों अतिताप उजागर किया जा सकता है फिर से यह निरीक्षण कि अतिताप के 3-4 चक्र के बाद ज्यादातर चूहों अति सक्रिय नहीं हो जाते हैं और वे सक्रिय रूप से बाकी अवधि के दौरान पानी और भोजन का उपभोग करने के लिए दिलचस्प है.हाल ही में 4,9,11 समय में कैंसर के इलाज में कृत्रिम रूप से प्रेरित अतिताप का उपयोग करने के लिए कुछ नैदानिक प्रोटोकॉल विकसित किया गया है. अतिताप के उपयोग पर कुछ रिपोर्टों ट्यूमर 3,5-8,12 प्रतिगमन के संबंध में हैं. हाल ही में एक पत्र में, जिया एट अल. कम अवधि (30 मिनट) पूरे शरीर अतिताप 5 के लिए पशुओं को उजागर करने के लिए माइक्रोवेव heaters का इस्तेमाल किया. लंबे समय (कुछ घंटों के लिए स्थायी) अवधि पूरे शरीर अतिताप एक अधिक चुनौतीपूर्ण प्रक्रिया है. हम लंबी अवधि अतिताप प्रदर्शन के लिए एक बहुत ही साधारण और कम खर्चीली प्रोटोकॉल का वर्णन किया है. यह एक बहुत ही होनहार कैंसर के इलाज के लिए एक व्यापक रणनीति विकसित करने के लिए एक उपकरण है. सादगी और उपयोगिता ओ पर अधिक से अधिक जागरूकता के साथच अतिताप प्रक्रिया, शोधकर्ताओं और चिकित्सकों के 2 के बीच और अधिक लोकप्रिय बन सकता है.
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Disclosures
हम खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Thermistor | RS components | 528-8558 | |
| CO2 Incubator | Heraeus | B5060 EK-CO2 | |
| Mice cages | Citizen industries ltd. | Type B 365X207X190 cm | |
| Animal feed | Provimi India | ||
| Water bottle for cage | Local supplier | Glass bottle | |
| Soldering iron | Solderon, India | ||
| 50 ml Centrifuge tubes | BD Biosciences | 352070 | |
| Timer | Local supplier | ||
| 1 ml Syringe with 26G needle | BD Biosciences | 309602 | |
| Saline | Local supplier |
References
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