Summary
Bu kağıt kadar 12-24 hr koşulları gibi ateş uyarabilir farelerde tüm vücut ısısı için bir protokol açıklar.
Abstract
Hipertermi, normal vücut çekirdek yukarıda sıcaklık artışı belirlemek için kullanılan genel bir terimdir. Genellikle ateş sırasında gözlenen artan iç vücut sıcaklığı tanımlamak için kullanılır. Bir yardımcı madde olarak hipertermi kullanımı kanser biyoloji alanında tümör gerilemesi için umut verici bir prosedür olarak ortaya çıkmıştır. Bu amaç için, en önemli gereklilik güvenilir ve düzgün ısıtma protokolleri olmasıdır. Biz farelerde hipertermi (tüm vücut) için bir protokol geliştirmiştir. Bu protokolde, hayvanların 15 dk bir dinlenme dönemi izler 90 dakika hipertermi döngülerine maruz kalmaktadır. Bu dönemde fareler yiyecek ve su kolay erişim vardır. İlk bir kaç hipertermi maruz kalma döngüleri sırasında fareler içinde Yüksek vücut sıcaklığı sivri hayvan hareketsizleştirici tarafından önlenir. Ayrıca, normal salin dehidratasyon etkilerini en aza indirmek için ilk birkaç döngüler halinde uygulanır. Bu protokol 12-24 hr farelerde koşulları gibi ateş simüle edebilirsiniz. Bizprotokolü göstermek için 8-12 haftalık BALB / Cj dişi fareler kullanıldı.
Protocol
1. Hayvan Etik
Fareler üzerinde uzun süre hipertermi gerçekleştirmeden önce prosedürü Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylandı emin olun. Bu yazıda ele alınan ve beraberindeki video gösterilen tüm prosedürleri İmmünoloji Ulusal Enstitüsü Kurumsal Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır.
2. Anlamak Hipertermi
Tüm Vücut Hipertermi (WBH) 39.5 tutulur inkübatöre konur önceden ısıtılmış kafeslerde ° C. hayvanlar koyarak teslim edilir Protokol standardizasyon sırasında, bir sıcaklık algılayıcı cerrahi fareler implante edildi ve vücut ısısı farklı deneysel koşullar içinde izlenmiştir. Bu ısıtılmış çevre hayvanlar üzerine yerleştirilmesi, bunların sıcaklık yavaş yavaş 37 arttığı görülmektedir ° C ila 42 ° C ile 100 dakika (Şekil 1) bir süre boyunca. Thiç vücut sıcaklığını dış ortam sıcaklığı daha yüksek ateş gibi sıcaklık "başak" sonuçlanan e merak uyandırıcı.
Vücut sıcaklığı 40 ° C aştığı zaman hayvan stres ve burun çevresinde ıslatma gibi dehidratasyon gösterecektir. 40 ötesinde vücut sıcaklığı artırın ° C, ıslatma ve tersinmez stres hatta ısı stresi nedeniyle hayvanların ölümüne yol açacaktır. Yani hipertermi sırasında sıcaklık yükselmelerini önleyen önemlidir.
Yüksek sıcaklık başak Bu fenomen, hipertermi maruz kalma sırasında hayvan fiziksel hiperaktivite ile ilişkilidir. Benzer sıcaklık ani de diğer gruplar tarafından gözlendi ve çevre 10 yüksek sıcaklıklara sahip tanıtılıyor üzerine hayvanın fiziksel hiperaktivite ile ilişkili bulunmuştur.
Bizim protokol, farelerin hipertermi maruziyeti sırasında hareketsiz kalıyor. GibiŞekil 2 de gösterildiği gibi, hayvan immobilizasyonu sıcaklık sivri önler.
Bu protokol göstermek için 8-12 haftalık BALB / Cj fareler kullanılmıştır. Protokol belli bir tip / farelerin zorlanma ile sınırlı değildir.
3. Denemeye Hazırlanma
3.1 İnkübatör
Bunlar iyi bir sıcaklık kontrol olduğu gibi bu deney, normal bir CO2 kuluçka makinesi içinde gerçekleştirilebilir. CO 2 gaz beslemesini kesin ve CO 2 inkübatör su tutma tepsisini çıkarın. Kuluçka Bazı modellerde bu CO 2 cihazı kapatmak mümkündür. Bir fare kafes rahatlıkla içine yerleştirilmiş olabilir böylece kuluçka rafları. 39.5 ° C'de kuluçka sıcaklığı ayarlayın
3.2 Kafesleri
Tipik olarak, hipertermi, deney bir seferde 4 fareler üzerinde gerçekleştirilmiştir. İki kafesleri gereklidir; ilgiliE inkübatör içine yerleştirilir ve diğer oda sıcaklığında dışına yerleştirilir. Yatak yamalar kafes içinde olmayan tekdüze sıcaklığı sonuçlanan zaman ıslanması gibi kafes yatakları, kaçınılmalıdır. Dışında kafes gıda pelet ve su şişesi olmalıdır.
3.3 Fare immobilizasyon tüpler
Hipertermi farelerin ilk 4 döngüleri sırasında delikli borular immobilize edilir. Bu sabitleme tüpler gövdesi ve bu tür tüplerin dört gerekli olacaktır fazla delme 3 mm delik ile 50 ml 'santrifüj' borudan yapılabilir. 50ml tüp elverişli 8 haftadan daha eski olan BALB / Cj fareler hareketsiz olabilir. Uygun boyutlarda Tüpler farelerin bazı alışılmadık farklı suşu için ya çok genç ya da 50 haftadan daha eski olan fareler için gerekli olabilir.
Sıra immobilizasyon tüpleri ve inkübatör içinde bir kafes 39.5 ° C'de muhafaza Böylece en az 2 saat bekledikten sonra, kafes ve immobilization tüpler kuluçka sıcaklığına ulaşmak.
4. Hipertermi ilk çevrimi
Fare hipertermi pozlama sırasında dehidratasyon karşılaşabilirsiniz. Bu nedenle deney başlamadan önce, her fare için 0.5 ml serum fizyolojik intraperitoneal olarak yönetmek. 1 ml şırınga ile 26 G iğne kullanın.
Çabuk yere, her immobilizasyon tüpler bir hayvan kuvözde kafes çıkarmak ve inkübatör kafese geri yerleştirin. Zaman kaydedin. Bu kuvöz aynı yerde her zaman kafes tutmak esastır.
90 dakika sonra, kuluçka makinesi dan kafes çıkar. Immobilizasyon tüplerinden hayvanlar serbest bırakın ve yiyecek ve su kolay erişim ile normal ısıda kafese koyun. Inkübatöre geri boş immobilizasyon tüpleri yerleştirin.
15 dakika sonra, hipertermi ikinci çevrimi 0 sunarak başladı.Her fare için 5 ml serum fizyolojik intraperitoneal olarak verildi.
Daha sonra 50 ml delikli immobilizasyon tüpler içinde immobilize ve inkübatör içine yerleştirilir.
5. Müteakip Hipertermi Çevrimleri
İlk 4 kür için, hipertermi pozlama sırasında ve ilk iki döngüleri için fare hareketsiz esastır, salin enjeksiyonu hipertermi dönemi başlamadan önce verilir.
Geri kalanı tarafından takip hipertermi bu döngüleri tamamlandıktan sonra, fareler ACCLIMATIZE almak ve hipertermi pozlama sırasında hiperaktif olmazlar. Fareler kolayca dinlenme zaman yiyecek ve su çekmek ise salin intraperitoneal gerekli olmayabilir.
6. Tüm Cycles Tamamlanan sonra, Son Adım Hayvanlar inceleyin etmektir
Hipertermi döngüleri sırasında herhangi bir ölüm olmamalıdır. Her hayvan ilk olarak çok dikkatle takip edilmesi gereken bir sahiptirbirkaç döngüleri. Hızla burun etrafında herhangi bir ıslatma arayın. Bu belirti dehidratasyon bir imzadır. Bu semptomlar ile Fareler hemen oda sıcaklığında 0.5 ml serum fizyolojik ip ve kalan verilmelidir. Immobilize farelerin çoğu herhangi bir ek bakım gerektirmez ve başarıyla stres hipertermi taşıyacak.
Gerekli döngüleri tamamlandıktan sonra, hayvanlar zayıf ve susuz görünebilir ama onlar hızla birkaç saat içinde iyileşir.
Şekil 1. Kafes 39.5 ° C'de bir inkübatöre yerleştirildi Sıçanların vücut çekirdek sıcaklığı değişimi 90 dakika sonra kafes inkübatörden çıkarılmıştır ve 25 ° C'de yerleştirilmiştir Kırmızı çevreler yüksek sıcaklık sivri göstermektedir.
Şekil 2. Merkez vücut sıcaklıkları Değişimihipertermi döngüleri sırasında hareketsiz Mice yeniden. Hayvan hareketsizleştirici sonra, yüksek sıcaklıklarda sivri kafes 39.5 ° C'de yerleştirildiği zaman gözlemek değildi
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bildiğim kadarıyla geri 5.000 M.Ö., Mısırlı doktorlar ısı ile tümör tedavi. Yunanlılar, bazı tıbbi tedaviler ısı değeri tanıdı. Musa'ya söz Kaplıcalar (Tekvin 36:24) Kanunu en eski metinler terapötik vücut ısısını yükseltmek için.
Önceki teknikler hipertermi 1 indüksiyonu için ateş veya sıcak su banyoları indüksiyonu için pirojenik mikrobiyal ekstrelerinin kullanımı ya istihdam. Ancak bu yaklaşımların hiçbiri kolayca izlenebilir veya kontrol edilebilir. Bizim protokol farelerde kontrollü ve tekrarlanabilir bir şekilde hipertermi maruz kalmaktadır.
Bu prosedürde bu hipertermi ilk iki döngüleri sırasında fareler üzerinde bir saat tutmak için önemlidir. Onların kürk burun etrafında görülen ıslak veya aşırı ıslatma bulunması durumunda, bunlar hemen dinlenme verilen ve oda sıcaklığında su kaybını önlemek için normal salin intraperiotoneally vermek gerekir.
İyileştikten sonra çadır ">, bu hayvanlar tekrar hipertermi maruz kalabilirler. Bu hipertermi 3-4 döngüsünden sonra en farelerde hiperaktif olmazlar ve aktif dinlenme döneminde su ve gıda tüketmek olduğunu gözlemlemek ilginçtir.Kanser tedavisinde yapay hipertermi kullanılan için birkaç klinik protokoller son zamanlarda 4,9,11 geliştirilmiştir. Hipertermi kullanımı hakkında birkaç rapor tümör regresyonu 3,5-8,12 ilişkin olan vardır. Yeni bir çalışmada, Jia ark. kısa süreli (30 dk) tüm vücut ısısı 5 hayvanların sergilemek için mikrodalga ısıtıcılar kullandık. Uzun süre (birkaç saat süren) tüm vücut ısısı daha zorlu bir işlemdir. Biz uzun süreli hipertermi poz için çok basit ve ucuz bir protokol tarif var. Kanser tedavisi için kapsamlı bir strateji geliştirmek için çok umut verici bir araçtır. Sadelik ve programı o üzerinde daha fazla farkındalık ilef hipertermi prosedürü, bu araştırmacılar ve klinisyenler 2 arasında daha popüler hale gelebilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Biz ifşa etmek başka bir şey var.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Thermistor | RS components | 528-8558 | |
| CO2 Incubator | Heraeus | B5060 EK-CO2 | |
| Mice cages | Citizen industries ltd. | Type B 365X207X190 cm | |
| Animal feed | Provimi India | ||
| Water bottle for cage | Local supplier | Glass bottle | |
| Soldering iron | Solderon, India | ||
| 50 ml Centrifuge tubes | BD Biosciences | 352070 | |
| Timer | Local supplier | ||
| 1 ml Syringe with 26G needle | BD Biosciences | 309602 | |
| Saline | Local supplier |
References
- Braude, A. I., Beck, J., Zalesky, M. Febrile response to bacterial pyrogens in leukemia. Blood. 16, 1279 (1960).
- Dovern, E. Hyperthermic intraperitoneal chemotherapy added to the treatment of ovarian cancer. A review of achieved results and complications. Eur. J. Gynaecol. Oncol. 31, 256 (2010).
- Gaworek, J., Mayer, C. T. Systemic whole body hyperthermia in oncology: fatal heat for tumor cells. Pflege. Z. 56, 15 (2003).
- Hegewisch-Becker, S. Effects of whole body hyperthermia (41.8 degrees C) on the frequency of tumor cells in the peripheral blood of patients with advanced malignancies. Clin. Cancer Res. 9, 2079 ( ).
- Jia, D. Inhibition of B16 murine melanoma metastasis and enhancement of immunity by fever-range whole body hyperthermia. Int. J. Hyperthermia. 27, 275 (2011).
- Maluta, S., Dall'oglio, S., Nadalini, L. Treatment for intermediate and high-risk prostate cancer: controversial issues and the role of hyperthermia. Int. J. Hyperthermia. 26, 765 (2010).
- Moyer, H. R., Delman, K. A. The role of hyperthermia in optimizing tumor response to regional therapy. Int. J. Hyperthermia. 24, 251 (2008).
- Muthana, M., Multhoff, G., Pockley, A. G. Tumour infiltrating host cells and their significance for hyperthermia. Int. J. Hyperthermia. 26, 247 (2010).
- Ostberg, J. R., Repasky, E. A. Comparison of the effects of two different whole body hyperthermia protocols on the distribution of murine leukocyte populations. Int. J. Hyperthermia. 16, 29 (2000).
- Pritchard, M. T. Protocols for simulating the thermal component of fever: preclinical and clinical experience. Methods. 32, 54 (2004).
- Repasky, E. A. Characterization of mild whole-body hyperthermia protocols using human breast, ovarian, and colon tumors grown in severe combined immunodeficient mice. Infect. Dis. Obstet. Gynecol. 7, 19 (1999).
- Willnow, U. Treatment of otherwise incurable tumor diseases in childhood using whole-body hyperthermia and chemotherapy. Dtsch. Med. Wochenschr. 114, 208 (1989).
