여기, 우리는 폐에 타고난 면역 세포를 거주하고 polyanhydride의 nanoparticles와 공동으로 문화에 대한 응답으로 자신의 활성화를 검토하고 있습니다 murine 폐포 macrophages를 수확을위한 프로토콜을 설명합니다.
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방법 논문
Polyanhydride의 Nanoparticles에 의해 유도된 Murine Macrophages 폐포 수확 및 평가 세포 활성화
이 논문에서
요약
초록
생분해성 nanoparticles는 호흡기 감염증에 대한 새로운 비강 백신의 설계 및 구현을위한 다목적 플랫폼으로 등장했습니다. 특히, polyanhydride는 지방족 sebacic 산성 (SA), 방향족 1,6 - 비스 (파라 - carboxyphenoxy) 헥산 (CPH) 또는 amphiphilic 1,8 - 비스 (파라 - carboxyphenoxy) -3,6-dioxaoctane 구성되어 nanoparticles (CPTEG) 독특한 벌크 및 표면 부식 속도론 1,2을 표시하고 천천히 생체내 3,4,5의 기능 biomolecules (예, 단백질 항원, 면역 글로불린 등) 출시될 악용될 수 있습니다. 이러한 그들 백신 전달 플랫폼 6,7,8을위한 탁월한 선택하고, 또한 소유 내장 도움이되는 활동 nanoparticles.
비강 점막 접종에 따라 타고난 면역의 활성화를 지배하는 메커니즘을 명료하게하다하기 위해, 하나는 항원 P의 분자 및 세포 반응을 평가한다면역 반응을 시작 책임을 원망 세포 (APCs). 폐포 macrophages는 (AMɸ) 폐 실질 조직 9,10,11에 predominate 동안 돌기 세포는기도를 실시 발견 교장 APCs 있습니다. AMɸ 미생물 병원균과 세포 잔해 12,13의 폐를 청소에 매우 효율적입니다. 또한이 세포 유형은 적응 면역 반응 9 개시에 중요한 첫 걸음이다 배수 림프절에 미생물 항원의 수송에 중요한 역할을한다. AMɸ 또한 타고난 패턴 인식 및 청소 수용체, 분비 프로 염증 중재자, 및 주요 나이브 T 세포 12,14의 높은 수준을 표현. AMɸ (예,보다 큰 80 %)의 비교적 순수한 인구는 쉽게 연구실에서 공부를 위해 폐 세척을 통해 얻을 수있다. AMɸ 면역 능력이 동물로부터 수확 거주 encounte됩니다 macrophages의 대표적인 표현형를 제공합니다생체내의 R은 입자 기반의 백신. 여기, 우리는 생쥐에서 수확과 문화 AMɸ에 사용되는 프로토콜을 설명하고 체외에서 polyanhydride의 nanoparticles와 치료에 따라 macrophages의 활성화 표현형 검사합니다.
프로토콜
1. 폐 세척을 사용하여 마우스에서 폐포 Macrophages을 (AMɸ) 수확
- 이러한 실험 복, 일회용 장갑, 적절한 눈 보호 등 적절한 개인 보호 장비 (PPE)를 착용하십시오.
- 수확 개시 전에 전체 AMɸ (cAMɸ) 매체를 준비합니다. 페니실린 / 스트렙토 마이신 Dulbelcco의 수정일 독수리 중간 (DMEM)의 222.25 ML에 (펜 / strep) 솔루션, β-메르 캅 토 에탄올 250 μL (2 - 메르 캅 토 에탄올) 및 열 inactivated 태아 소 혈청 (FBS)의 25 ML 2.5 ML을 추가합니다. 진공 하에서 0.2 μm의 기공 크기의 병 최고의 필터를 사용 cAMɸ 매체를 필터 - 소독.
- euthanization 챔버의 CO 2 질식하여 건강한 마우스를 안락사. C57BL / 6 마우스 (6-8주 오래된)는이 프로젝트의 목적으로 사용되었지만,이 폐 세척 기술은 마우스의 어떤 변형을 수행할 수 있습니다. 압축 가스 실린더를 사용하여 채널에 마우스를 배치하기 전에 1 분 동안 챔버로 가스 흘러가게챔버가 완전히 CO 2로 기소되어 있는지 확신하기 위해 호박. 마우스를 안락사시키려는 적어도 한 분만 챔버에서 마우스를 놓으십시오. 또한, 1.4에서 설명한대로 마우스 사....
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토론
단일 선량 regimens 5 intranasally 실시하면 Polyanhydride의 nanoparticle 백신 플랫폼은 효능을 보여주었다. 이 백신 전달 플랫폼에 의해 유도된 폐의 주민 phagocytic 세포 인구의 활성화를 측정하는 것은 그것의 잠재적인 능력의 평가는 궁극적으로 적응 면역 반응을 촉진하도록 허용합니다.
특히, 폐 세척 유체에서 폐포 macrophages를 수확하고 nanoparticles의 다른 공법으로 그들을 치료하는 것은 항원 프레 젠 테이션 6,8로 이어지는, macrophages를 활성화하기 위해 서로 다른 입자 화학의 능력으로 통찰력을 제공합니다. 또한, 체외 연구에서 이들이 생체내 연구에 크고 더 복잡한에 착수하기 전에 폐포 macrophages를 활성화하기 위해 이러한 미립자 도움이되는 공법의 용량을 평가하는 데 유용합니다. 실험은 항상 surfac에 대한 긍정적인 .......
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공개 사항
관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.
감사의 글
저자를 위해 아이오와 주립 대학 유동세포계측법 시설에서 재정 지원과 박사 션 Rigby 위해 미군 의료 연구 및 Materiel 명령 (부여 번호 W81XWH-09-1-0386 및 W81XWH-10-1-0806)에 감사드립니다 그의 전문 기술 지원.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약의 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
| CAM 미디어 | |||
| DMEM | Cellgro | 15-013 - 이력서 | |
| 50 MM 2 - 메르 캅 토 에탄올 | 시그마 | M3148-25ML | |
| 페니실린 / 스트렙토 마이신 10,000 μg / ML 솔루션 | Cellgro | 30-002-CI | |
| 태아 소 혈청 | 애틀랜타 체액 | S11150 | |
| FACS 버퍼 | |||
| 염화나트륨 (소금) | 피셔 과학 | S671-500 | |
| 인산 나트륨 | 피셔 과학 | MK7868500 | |
| 염화칼륨 | 피셔 과학 | P217500 | |
| 인산 칼륨 | 피셔 과학 | P288-200 | |
| BSA (소 혈청 알부민) | 시그마 | A7888 | |
| 나트륨 Azide | 시그마 | S2002 | |
| 항체 | |||
| 쥐 IgG | 시그마 | I4341 | |
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| 안티-MS MHC II의 haplotype 플루오레신 isothiocyanate (FITC)에 아이오와 / 즉, 클론 M5/114.15.2, 복합 | eBioscience | 11-5321 | |
| 안티 마우스 CD86, allophycocyanin에 복합 클론 GL-1, (APC) Cy7 | Biolegend | 105,030 | |
| APC에 복합 방지 마우스 CD40, 클론 1C10, | eBioscience | 17-0401 | |
| 비오틴의 복합 안티 - 마우스 CD209, 클론 5H10, | eBioscience | 13-2091 | |
| 알렉사 형석 700 복합 방지 마우스 CD11b, 클론 M1/70, | eBioscience | 56-0112 | |
| phycoerythrin까지 복합 방지 마우스 F4/80, 클론 BM8 (PE) Cy7 | eBioscience | 25-4801 | |
| PE-텍사스 붉은 복합 Streptavidin | BD Biosciences | 551,487 | |
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참고문헌
- Mallapragada, S. K., Narasimhan, B. Immunomodulatory biomaterials. Int. J. Pharm. 364, 265-271 (2008).
- Torres, M. P., Vogel, B. M., Narasimhan, B., Mallapragada, S. K. Synthesis and characterization of novel polyanhydrides with tailored erosion mechanisms. J. Biomed. Mater. Res. ....
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